白藜蘆醇抗肝纖維化作用新靶標及分子機制研究

《白藜蘆醇抗肝纖維化作用新靶標及分子機制研究》是依託同濟大學，由范江虹擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：白藜蘆醇抗肝纖維化作用新靶標及分子機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：范江虹
• 依託單位：同濟大學

中文摘要

HSC的活化和EMT是肝纖維化進展的核心環節,表現為表達α-SMA，形成纖維瘢痕。前期工作表明,在HSC細胞株中Hedghehog（Hh）通路中核轉錄因子Gli1可活化HSC。同時,還發現白藜蘆醇具有良好的抗肝纖維化效應，同樣也可抑制HSC中Gli1表達。故推測白藜蘆醇是Hh小分子抑制劑。為此，本項目採用細胞培養及肝纖維化動物實驗，探討白藜蘆醇對Hh信號及Gli1下游靶基因抑制作用，並對調控Hh信號通路和HSC活化、EMT的機制予以深入研究。擬解決以下幾個問題：①闡明Hh通路、EMT和HSC活化的相關性，解析肝纖維化中Hh信號通路調控EMT的分子機制；②確立白藜蘆醇是調控Hh信號通路，進而調控HSC活化、EMT而發揮作用；③證實白藜蘆醇是一個新型的小分子Hh信號通路抑制劑；④運用上述結果，為探索中西醫結合防治肝纖維化，尤其是對療效顯著的中藥單體的新藥靶及機制提供實驗依據。

結題摘要

肝纖維化是嚴重威脅人類健康的重要疾病之一，迄今沒有滿意的治療方法。因此，研究中藥單體白藜蘆醇抗肝纖維化作用及機制，具有重要的科學意義。 一. 白黎蘆醇在大鼠肝纖維化模型中抗肝纖維化作用研究:建立CC14誘導的大鼠肝纖維化模型，設立正常組、模型組、RT給藥組、秋水仙鹼陽性對照組。結果顯示，RT對CC14誘導的大鼠肝纖維化具有良好的保護作用。肝纖維化模型大鼠血清ALT、AST與正常組相比明顯升高，RT治療組轉氨酶均下降，陽性對照組秋水仙鹼亦能明顯降低模型大鼠血清轉氨酶ALT、AST。模型組HA,LN,CIV,PCIII等纖維化血清學標誌物水平較正常組明顯升高，給予RT可使其顯著降低。RT可顯著降低模型組的Hyp值。組織病理學結果表明RT可明顯的抑制肝纖維化程度，改善肝組織結構，減少膠原沉積。二． 觀察白藜蘆醇對TGF-β1，PDGF和α-SMA表達的影響:測定活化的HSC-T6中TGF-β1，PDGF和α-SMA的表達以及白藜蘆醇干預後表達的差異。結果顯示，白藜蘆醇可以顯著降低HSC-T6中TGF-β1，PDGF和α-SMA的表達(與模型組比較P＜0.01)，與信號通路各成員Shh、Patched、Smo和Gli1的表達降低一致。提示TGF-β1，PDGF和α-SMA可能是Shh-Gli1 信號通路在抗肝纖維化過程中控制的下游靶位點。三． 從細胞水平研究白藜蘆醇抑制HSC-T6增殖和促進HSC-T6凋亡的作用:結果顯示，白藜蘆醇對HSC-T6生長有明顯的抑制作用，白藜蘆醇可以明顯抑制HSC-T6生長(與正常組比較P＜0.01)；白藜蘆醇干預後HSC細胞大多停留在細胞周期G0和G1期；和對照組相比，白藜蘆醇作用24小時後星狀細胞的基因組DNA出現了明顯的凋亡梯度改變。四． Shh-Gli1 信號通路成員Shh、Patched、Smo和Gli1在肝星狀細胞HSC-T6中的表達以及白藜蘆醇干預作用:測定活化的HSC-T6中Shh, Smo, Ptch, Gli-1 mRNA的表達以及白藜蘆醇的干預後各基因mRNA水平表達差異，結果顯示，白藜蘆醇0.4 mg.L-1可以顯著降低Shh-Gli1 信號通路各成員Shh、Patched、Smo和Gli1的表達(與對照組比較P＜0.01)，提示白藜蘆醇抗肝纖維化的作用與其影響並降低Shh-Gli1 信號通路各主要成員的表達有關。