《甲醛分子膜化緩衝液及其製備方法》是安徽信靈檢驗醫學科技有限公司於2013年11月28日申請的發明專利，該專利申請號為2013106154371，公布號為CN103674640A，專利公布日為2014年03月26日，發明人是王之侃、孫文勇。
《甲醛分子膜化緩衝液及其製備方法》包括下列重量份的原料：多聚甲醛3.00-5.00、磷酸鈉4.00-6.00、磷酸氫二鈉•十二分子水21.80-21.90、磷酸二氫鈉•二分子水6.10-6.20、聚乙烯醇縮乙醛1.10-1.20、山梨醇3.00-3.50、乙二醇1.00-2.00、丙三醇1.80-2.00、脂肪醇聚氧乙烯醚1.00-1.20、硬脂酸聚醚脂1.00-1.50、吐溫-801.00-1.50、水51.70-51.80。該發明既能有效抑制單分子甲醛的揮發，又能為組織細胞染色提供衡定的pH值環境。
2020年7月17日，《甲醛分子膜化緩衝液及其製備方法》獲得安徽省第七屆專利獎優秀獎。
基本介紹
- 中文名：甲醛分子膜化緩衝液及其製備方法
- 公布號：CN103674640A
- 公布日：2014年3月26日
- 申請號：2013106154371
- 申請日：2013年11月28日
- 申請人：安徽信靈檢驗醫學科技有限公司
- 地址：安徽省安慶市桐城市經濟開發區同祥路28號
- 發明人：王之侃、孫文勇
- Int.Cl.：G01N1/28(2006.01)I
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
截至2013年11月，在醫學病理學組織檢驗中，不論組織標本或體液細胞標本在進行蘇木素染色或巴氏染色前都要將標本固定，臨床上使用的固定液無論是由醫院病理科部門自製或是由生產商提供的，都是採用市場上採購的36％甲醛水溶液（俗稱福馬林）稀釋後直接使用的。這種在市場採購的福馬林中含8—14％甲醇作為甲醛單體聚集的抑制劑，當組織標本浸入這種直接稀釋的福馬林溶液中時，內含甲醇首先與標本中的表層組織細胞蛋白結合固化，因此降低了甲醛對組織的穿透力，進而影響組織內部的細胞固定，使固定後的標本組織鬆弛，不利於切片和染色；而且單分子甲醛的分子小，極易揮發，造成如手術室、胃鏡室、病理室、解剖室的重度污染，嚴重損害醫護人員的身體健康。最新研究顯示，甲醛已成為一類致癌物質，極易引發鼻咽癌、鼻竇癌、血液病等。截至2013年11月，市場上也出現了一些環保型組織標本固定液，即以甲醇、乙醇等多元醇配製而成，是較好的不含甲醛固定液，但是這種固定液臨床醫學病理界並不認可，因為以甲醇為主的組織標本固定液，對標本組織的穿透力差，且固定的標本組織鬆弛，特別是大組織標本的內層非常鬆弛，影響切片和組織染色鏡檢。該發明提供的甲醛分子膜化緩衝液，較好的解決了上述產品的不足，並且為組織細胞染色提供了衡定的PH值環境。
發明內容
專利目的
《甲醛分子膜化緩衝液及其製備方法》的目的在於：為了解決臨床病理學檢驗中，標本組織固定使用甲醛保存液存在的缺陷，提供一種既能有效抑制單分子甲醛的揮發，又能避免甲醛保存液在貯存運輸過程中因溫度變化易聚集沉澱，並為組織細胞染色提供衡定的PH值環境的甲醛分子膜化緩衝液。
技術方案
甲醛分子膜化緩衝液，包括下列重量份的原料：
多聚甲醛3-5 | 3-5 |
磷酸鈉 | 4-6 |
磷酸氫二鈉·十二分子水 | 21.8-21.9 |
磷酸氫二鈉·二分子水 | 6.1-6.2 |
聚乙烯醇縮乙醛 | 1.1-1.2 |
山梨醇1-2 | 3.53- |
乙二醇 | 1-2 |
丙三醇 | 1.8-2 |
脂肪醇聚氧乙烯醚 | 1-1.2 |
硬脂酸聚醚脂 | 1-1.5 |
吐溫-80 | 1-1.5 |
水 | 51.7-51.8 |
作為該發明的進一步最佳化，所述甲醛分子膜化緩衝液，包括下列重量份的原料：
多聚甲醛 | 4 |
磷酸鈉 | 5 |
磷酸氫二鈉·十二分子水 | 21.85 |
磷酸氫二鈉·二分子水 | 6.08 |
聚乙烯醇縮乙醛 | 1.05 |
山梨醇 | 3.4 |
乙二醇 | 1.5 |
丙三醇 | 1.9 |
脂肪醇聚氧乙烯醚 | 1.1 |
硬脂酸聚醚脂 | 1.2 |
吐溫-80 | 1.2 |
水 | 51.72 |
一種製備權利所述甲醛分子膜化緩衝液的方法，包括以下步驟：
（1）將聚乙烯醇縮乙醛溶于山梨醇、乙二醇和丙三醇混合液中，再將混合液加入到多聚甲醛中抑制甲醛再多聚，得到多聚甲醛溶液；
（2）加入磷酸鈉調節上述步驟中多聚甲醛溶液PH值為7.0；
（3）加入緩衝液磷酸鹽；
（4）加入非離子表面活性劑；
（5）加入水，溶解後定容，低溫超聲，促進膠束濃度平衡，在空氣-溶液界面鋪展成單分子膜，得到的溶液密閉保存。
所述中緩衝液磷酸鹽是由磷酸氫二鈉·十二分子水、磷酸二氫鈉·二分子水配製而成。
所述非離子表面活性劑是由脂肪醇聚氧乙烯醚、硬脂酸聚醚脂、吐溫-80配製而成。
改善效果
《甲醛分子膜化緩衝液及其製備方法》的有益效果：
（1）該發明將聚乙烯醇縮乙醛溶解于山梨醇、乙二醇和丙三醇，作為二聚或三聚等十聚以下的多聚甲醛溶液的阻聚劑，既用於甲醛阻聚劑，同時增加了溶液中極性分子的濃度，由於極性分子的電性分布不均勻，一端帶正電，一端帶負電，形成偶極的靜電和氫鍵作用等范德華力的協同效應，增加甲醛分子間摩擦力以阻止甲醛的揮發；
（2）非離子表面活性劑：脂肪醇聚乙氧烯醚、硬脂酸聚醚脂和吐溫-80，在超音波的作用下，多種表面活性劑的疏水基和親水基的雙親分子在水溶液中形成締合體，即膠束，其濃度大於臨界膠束濃度時，多種表面活性劑濃度在氣-液表面形成一種動態平衡，這種脂-水介質的膠束在液體表面快速形成透明的球狀膠束的分子膜，從而有效阻止甲醛揮發。
技術領域
《甲醛分子膜化緩衝液及其製備方法》涉及一種醫學病理檢驗中，組織標本和體液細胞標本進行組織化學染色、免疫細胞染色前，組織和細胞固定用的膜化緩衝液。
權利要求
1.甲醛分子膜化緩衝液，其特徵在於，包括下列重量份的原料：
多聚甲醛 | 4 |
磷酸鈉 | 5 |
磷酸氫二鈉·十二分子水 | 21.85 |
磷酸氫二鈉·二分子水 | 6.08 |
聚乙烯醇縮乙醛 | 1.05 |
山梨醇 | 3.4 |
乙二醇 | 1.5 |
丙三醇 | 1.9 |
脂肪醇聚氧乙烯醚 | 1.1 |
硬脂酸聚醚脂 | 1.2 |
吐溫-80 | 1.2 |
水 | 51.72 |
2.一種製備權利要求1所述甲醛分子膜化緩衝液的方法，其特徵在於，包括以下步驟：（1）將聚乙烯醇縮乙醛溶于山梨醇、乙二醇和丙三醇混合液中，再將混合液加入到多聚甲醛中抑制甲醛再多聚，得到多聚甲醛溶液；（2）加入磷酸鈉調節上述步驟（1）中多聚甲醛溶液PH值為7.0；（3）加入緩衝液磷酸鹽，緩衝液磷酸鹽是由磷酸氫二鈉·十二分子水、磷酸二氫鈉·二分子水配製而成；（4）加入非離子表面活性劑,非離子表面活性劑是由脂肪醇聚氧乙烯醚、硬脂酸聚醚脂、吐溫-80配製而成；（5）加入水，溶解後定容，低溫超聲，促進膠束濃度平衡，在空氣-溶液界面鋪展成單分子膜，得到的溶液密閉保存。
實施方式
甲醛分子膜化緩衝液，按下列重量份的準備原料：
多聚甲醛 | 4 |
磷酸鈉 | 5 |
磷酸氫二鈉·十二分子水 | 21.85 |
磷酸氫二鈉·二分子水 | 6.08 |
聚乙烯醇縮乙醛 | 1.05 |
山梨醇 | 3.4 |
乙二醇 | 1.5 |
丙三醇 | 1.9 |
脂肪醇聚氧乙烯醚 | 1.1 |
硬脂酸聚醚脂 | 1.2 |
吐溫-80 | 1.2 |
水 | 51.72 |
將聚乙烯醇縮乙醛溶于山梨醇、乙二醇和丙三醇混合液中，攪拌均勻，加入多聚甲醛中抑制甲醛再多聚（大於十分子以上的甲醛聚集）；用磷酸鈉調節上述甲醛溶液PH值為7.0；加入緩衝液（由磷酸氫二鈉·十二分子水、磷酸二氫鈉·二分子水配製的）磷酸鹽，攪拌均勻；加入非離子表面活性劑（由脂肪醇聚氧乙烯醚、硬脂酸聚醚脂、吐溫-80配製而成），加入水，溶解後定容，低溫超聲，促進膠束濃度平衡，在空氣-溶液界面鋪展成單分子膜，得到的溶液密閉保存備用。
《甲醛分子膜化緩衝液及其製備方法》將聚乙烯醇縮乙醛溶解於多元醇中（山梨醇、乙二醇、丙三醇），作為二聚或三聚等十聚以下的多聚甲醛溶液的阻聚劑，不採用市售福馬林（36—40％甲醛溶液，含有8—14％甲醇作為甲醛阻聚劑），因含有甲醇的福馬林配製甲醛固定劑在固定組織時，甲醇首先與組織蛋白結合，阻止甲醛浸入，造成固定的組織標本外緊內松，影響後續的切片和染色。而該發明首先採用的低濃度大分子多元醇既用於甲醛阻聚劑聚乙烯醇縮乙醛溶劑，同時增加溶液中極性分子的濃度，由於極性分子的電性分布不均勻，一端帶正電，一端帶負電，形成偶極的靜電和氫鍵作用等范德華力的協同效應，增加甲醛分子間摩擦力以阻止甲醛的揮發。
該發明甲醛揮發性測定：酚試劑法。
原理：甲醛與酚試劑反應生成嗪，嗪在酸性溶液中被高鐵離子氧化生成藍綠色化合物。在660納米波長比色吸光度與甲醛濃度正相關。
方法：按國家標準GB/T6324.2-2004測定揮發性有機化工液體產品在水浴上蒸發後乾殘渣測定的通用方法。取20隻大口的5毫升反應管，分成兩排，每排10隻。第1排加10％甲醛10毫升；第2排加該發明甲醛分子膜化緩衝液10毫升。37℃水浴24小時。測定各管揮發後的減少的百分含量。結論：兩組產品的揮發性有顯著性差異。見表1
反應管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
10%甲醛組（揮發減少量%） | 52 | 50.5 | 51.3 | 51.6 | 53.2 | 50.8 | 52.1 | 54.3 | 50.2 | 53.1 | 51.9 |
甲醛分子膜化液組（發減少量%） | 10.1 | 9.4 | 11.1 | 10.4 | 10.6 | 9.6 | 9.7 | 10.7 | 10.4 | 9.8 | 10.2 |
該發明非離子表面活性劑脂肪醇聚乙氧烯醚（AES）、硬脂酸聚醚脂（SG-100）和吐溫-80，在超音波的作用下，多種表面活性劑的疏水基和親水基的雙親分子在水溶液中形成締合體，即膠束。其濃度大於臨界膠束濃度（cmc）時，多種表面活性劑濃度在氣-液表面形成一種動態平衡，這種脂-水介質的膠束在液體表面快速形成透明的球狀膠束的分子膜，從而有效阻止甲醛揮發。
該發明甲醛分子膜化緩衝液臨界膠束濃度的測定（cmc）。
方法：光散射法：將該發明的甲醛分子膜化液進行吸收波長自動掃描，確定最大吸收峰為500納米。利用500納米下散射光強度與溶液濃度中的突變點測定（cmc）。為：2.4×10-5摩爾/升。
結論：多種非離表面活性劑的協同作用臨界膠束濃度小，達到平衡（分子膜化膠束）速度快的特點。
榮譽表彰
2020年7月17日，《甲醛分子膜化緩衝液及其製備方法》獲得安徽省第七屆專利獎優秀獎。
