國外分布，分布於美國、澳大利亞、印度尼西亞、關島、土耳其、馬利亞納群島等。
基本介紹
- 中文學名：瓜類果斑病菌
- 拉丁學名：Acidovorax avenae subsp. citrulli
- 別稱：燕麥噬酸菌西瓜亞種
- 界：細菌界
- 門：薄壁菌門
- 科：假單胞菌科
- 屬：噬酸菌屬
寄主範圍及危害特點,寄主範圍,危害情況,典型症狀,病原形態與生物學特性,形態特徵,病原生物學,發病條件與傳播途徑,發病條件,傳播途徑,檢測方法,檢疫措施與防治方法,
寄主範圍及危害特點
寄主範圍
除西瓜(Citrulluslanatus)外，還能侵染甜瓜、厚皮甜瓜(Cucuumis melo var.cantalupensis，包括哈密瓜，伽師瓜)、南瓜(cucurbita pepo)、黃瓜(Cucumis sativus L.)、西葫蘆(CuCurbita pepo)、蜜瓜(Cucuumis melo var..inodorus)和苦瓜等。
危害情況
1965年Webb和Goth首先報導西瓜果斑病的發生。西瓜細菌性果斑病後來在美國佛羅里達州發現，1989年蔓延至南卡羅來納、印第安那等州以及關島、提尼安島(Tinian)等地區的9個州，使當年的西瓜產量損失50%～90%。數千公頃的西瓜受到影響，80%的西瓜不能上市銷售，在美國被認為是西瓜上的毀滅性病害。1994西瓜果斑病大發生時，美國的許多種子公司都暫停了種子銷售。1998年以來，在新疆的阿勒泰地區哈密瓜每年都有發病，減產46%以上，病重的田塊，商品瓜率僅有1/3。
典型症狀
西瓜在子葉、真葉和果實上均可受感染而發病。幼苗期，子葉張開時感染此病後，病斑為暗棕色，且沿主脈逐漸發展為黑褐色壞死斑，隨後侵染真葉，病斑在幼真葉上很小，暗棕色，周圍有黃色暈圈，通常沿葉脈發展。開花後14～21d的果實容易感染。果實上症狀隨西瓜品種不同而異。典型的病症是在西瓜果實朝上的表皮，首先出現直徑僅幾毫米的水漬狀小斑點，隨後擴大成為不規則的較大的橄欖色水漬狀斑塊，病斑邊緣不規則，顏色加深，並不斷擴展，7～10d內便布滿除接觸地面部分的整個果面。發病初期病變只局限在果皮，果肉組織仍然正常，但將嚴重影響西瓜的商品價值。早期形成的病斑老化後表皮龜裂，常溢出黏稠、透明的琥珀色菌膿，果實很快腐爛。莖葉柄和根部通常不受此病菌侵染。
厚皮甜瓜感病：該病菌可侵染子葉、真葉和果實，引起葉枯和瓜腐，莖、葉柄、根很少受侵染。葉片上的症狀與黃瓜細菌性角斑病在黃瓜葉片上的症狀基本相似，但葉 脈也可侵染，並沿葉脈蔓延。子葉發病時病斑暗褐色，沿主脈逐漸發展為黑褐色壞死斑。真葉上病斑呈圓形或多角形，暗褐色，周圍有黃色暈圈，通常沿葉脈發展。 田間濕度大時病斑背面可溢出白色菌膿，葉基沿葉脈可見水浸狀斑點。在果實朝上的表皮，首先出現水浸狀墨綠色小斑點，逐漸變褐，稍凹陷。發病初期病變只局限 在果皮，果肉組織仍然正常，但已嚴重影響瓜的商品價值。有的具水浸狀暈圈，斑點通常不擴大；有的品種病菌侵入果肉組織造成水浸狀、褐腐或木栓化；有的品種 病斑只局限於表皮，中後期條件適宜時，病菌常隨同腐生菌蔓延到果肉，使果肉腐爛。病斑老化後表皮龜裂，常常溢出黏稠、透明的琥珀色菌膿。真葉上的症狀類似 霜霉病，病斑受葉脈限制呈深褐色水浸狀角斑，在高濕條件下可見病原細菌分泌出的乳白色菌濃的痕跡。
病原菌回接在哈密瓜和西瓜葉片上第3天出現症狀，第10天症狀表現為葉部病斑圓形至多角形、水浸狀、灰白色、後期中間變薄，可以脫落穿孑L。病斑背面常有細菌膿溢出，乾後變一薄層。甜瓜和西瓜的果實上病斑初為水浸狀斑、圓形或卵圓形，漸漸擴大，稍凹陷，綠褐色，有時數個病斑融合成大斑，色加深呈褐色至黑褐色。
病原形態與生物學特性
形態特徵
病原細菌屬革蘭氏陰性菌，菌體短桿狀，大小為0.2～0.8 m × 1.0～5.0m，極生單根鞭毛。在金氏B和NA培養基上形成奶白色、不透明、突起的菌落。菌落圓形光滑，略有扇形擴展的邊緣，中央突起，質地均勻。不產生色素及螢光，屬rRNA組工。在YDC培養基上，菌落圓形、突起、黃褐色，在30℃下培養5d直徑可達3～4mm。在KB培養基上，生長很慢，2d內只見到很少的菌落，菌落不產生螢光、圓形、半透明、光滑、微突起，在30℃下培養5d直徑可達2～3mm。
病原生物學
病原菌不水解明膠，脂酶、氧化酶和2—酮葡萄糖酸試驗為陽性，好氣性。精氨酸雙水解酶陰性，生長適溫28℃，在4～41℃間均能生長，能水解吐溫一80。能夠利用丙氨酸、L—阿拉伯糖、己醇、果糖、甘油、葡萄糖、羥甲基纖維素、D—羥基丁酸鹽、半乳糖、L—亮氨酸、海藻糖作為碳源；不能利用蔗糖、丙二酸、乳糖、山梨醇。DNA(G+C)mol%為66±1%。Schaad等分離鑑定的西瓜果斑病菌在菸草上無過敏反應，但是，在佛羅里達州、印第安納州及德拉瓦州分離的西瓜果斑病菌在菸草上有過敏反應，而其他性狀基本一致。用Spel酶切總DNA進行脈衝凝膠電泳和脂肪酸甲基酯氣相色譜分析，結果表明，燕麥噬酸菌西瓜亞種記憶體在小種的分化、可分為I組和Ⅱ組。工組包括了1989—1994年在佛羅里達州以及其他地方引起典型的西瓜果斑病症狀的菌種。Ⅱ組包括那些從糙皮甜瓜、西瓜、南瓜上分離的菌種及1965年在美國分離得到的模式菌種。
發病條件與傳播途徑
發病條件
在適宜種植西瓜和甜瓜的環境下，均可能受到感染而發病。高溫、高濕環境易發病，特別是炎熱季節伴之暴風雨的條件下，有利於病菌的繁殖與傳播，病害發生重，更有利於病害的流行。用帶菌種子播種育出的幼苗，大多發病；瓜葉發病後，幼瓜就會受到感染而發病。
傳播途徑
西瓜果斑病菌主要在種子和土壤表面的病殘體上越冬，成為來年的初侵染源。田間的自生瓜苗、野生南瓜等也是該病菌的宿主及初侵染源。病菌主要通過傷口和氣孔侵染。病害的遠距離傳播靠帶菌種子，種子表面和種胚均可帶菌。帶菌種子萌發後病菌即侵染子葉，引起幼苗發病。病斑上的菌膿借雨水、風、昆蟲及農事操作等途徑傳播，形成多次再侵染。田間病殘體翻人土中分解腐爛後，細菌隨即死亡。
檢測方法
1.現場取樣 從瓜類種子(西瓜或甜瓜種子)中隨機抽樣，每份樣品為500g左右，最低不少於300g。做好標記備用。
2.種植觀察 將待測的瓜類種子種植於溫室或實驗室內的育苗缽(紙杯或塑膠杯)中，每一育苗缽中種植2粒種子，每份種子樣品種植3000粒左右，最低不少於1000粒種子，生長環境溫度為25～35℃，相對濕度≥70%，種子出苗後20d內觀察幼苗發病情況。統計發病率，並採集可疑病葉作病原菌分離培養和鑑定，或直接進行PCR鑑定。西瓜細菌性果斑病在幼苗期的主要症狀為：子葉初生水浸狀、近圓形暗綠色的凹陷病斑，後乾枯呈褐色。真葉初為水浸狀、濃綠色小點，以後逐漸擴大為多角形或不規則形的黃褐色病斑，濕度大時，在病斑背面分泌出白色黏液狀菌膿，乾燥後為白色菌膠質。
3，種子中病原菌的分離培養 分別稱取待測瓜類種子樣品各100g，分裝於乾淨紙袋中，做好標記，供檢測用。將供試樣品置於0.1%升汞溶液中表面消毒30～80s(也可用含有效氯1%的次氯酸鈉溶液表面消毒2～4min)，用無菌水分別清洗3次，然後將種子移至無菌的小型電動粉碎機中，破碎種子，將處理好的種子裝入一滅菌的廣口瓶中，在瓶中加入200m1滅菌的pH7.2的0.1M磷酸鈉緩衝液，混勻，30min後用該浸出液在事先製備好的金氏B平皿培養基上劃線，每一樣品做2個皿，然後將這些皿置於28℃恆溫培養箱中培養48h。
4.病葉中病原菌的分離培養 用滅菌剪刀剪取病葉上的病斑，置於含有效氯1%的次氯酸鈉溶液中表面消毒40～60s，用無菌水分別清洗3次，然後將其移至一滅菌的培養皿中，加5～10滴無菌水，用滅菌玻棒將病斑研碎，使病組織液溶於無菌水中。用滅菌的移植環蘸取該液，在金氏B平皿培養基上劃線，每一處理做2個皿，然後將這些皿置於28℃恆溫培養箱中培養48h。
5.選擇性培養基培養觀察 將40℃培養下生長的供試菌株，在BFB—08或EBB等選擇性培養基所製備的平皿培養基上劃線，每一處理做2個皿，然後將這些皿置於40℃恆溫培養箱中培養48h，觀察細菌生長情況。
BFB08培養基配方是：氯化鈉5g，(NH4)3P041g，K2HP041g，MgS04·7H200.2g，酚紅0.01g，甲基紫0.01g，小檗鹼(2mg/mL)0.2mL，蒸餾水1000mL。將上述藥品先溶於蒸餾水中，用1N氫氧化鈉調節pH至7.2～7.4，然後振盪加入羧甲基纖維素26g，瓊脂粉5g。A.a.c在該培養基上產生紅褐色、凹陷、光滑的菌落。
EBB培養基：NH4P041g，KCl0.2g，MgS04·7H200.2g，酵母浸出汁0.3g，硼酸0.5g，16g，溴甲酚紫0.6mL(15mg/mL)，亮甲酚藍R1mL(10mg/mL)，無水乙醇10mL，放線菌酮0.2g，蒸餾水1000mL。A.a.c在該培養基上產生淡藍色、光滑菌落。
6.致病性測定 將培養48h左右的待測菌株，配成107～108CFU/mL的細菌懸浮液，用針刺法接種在預先培育的、具2～3片真葉的健康西瓜或甜瓜幼苗上，每一菌株接種3～5株，用無菌水做對照。接種後，使植株生長環境溫度為25～35℃，相對濕度≥70%(可用塑膠袋罩住植株保濕24h)，接種後第3d時開始觀察發病情況。若觀察到發病症狀，可將發病植株進行分離鑑定或做PCR鑑定。也可用西瓜果斑病菌接種番茄莖的皮層，在接種點的上部和下部幾毫米處有變色的症狀，但不同於被Pseudomo—nas solanacearum引起的外部水浸狀或萎焉症狀。
7.病原菌PCR法鑑定 分別從病葉或分離培養的細菌菌株中提取核酸，進行PCR鑑定。甜瓜種子用Aacf2/Aacr2作為引物可以擴增出特異性的片段。
檢疫措施與防治方法
西瓜果斑病在國內局部地區發生，各有關省區已經把這一病害列入官方控制之下，要求實施檢疫並加強防治。該病害也是我國限制入境的危險性有害生物之一。
1.加強檢疫 在 國內調種引種前，應該儘量到產地作實地考察，尤其在發病適期，對繁種田塊作產地檢疫並加強西瓜等葫蘆科作物種子的檢疫，杜絕帶菌種子進入和傳播蔓延。在田 間，可根據西瓜果斑病的症狀特點結合細菌溢膿的觀察，初步確定細菌性病害。但西瓜果斑病的症狀易與黃瓜角斑病混淆，必須進行病原分離鑑定。從病葉和病果上 的新鮮病斑邊緣切取部分組織，用常規方法分離培養病原細菌，從種子中分離，確定種子是否帶菌。
2.採用無病種子 無病田繁種，從健康植株的健康果實上採種。從苗期開始發現病株立即帶土摘除，移至田外燒毀。種苗生產過程中避免病菌污染，生產的種子應進行種子帶菌率測定。
3.種子處理 種子處理也是預防種子傳病的可行措施。實驗證實，採種時種子與果汁、果肉一同發酵24～48h後，隨即以1%的鹽酸浸漬種子5min，或以1%次氯酸鈣(CaOCl2)浸漬15min，立即用清水洗淨、風乾，都可以有效去除種子表面攜帶的病菌，大幅度降低田間發病率，對種子發芽無不良影響。
4.採取合理的田間管理方式 實行秋季深翻地，將病殘體、野生寄主及病菌等翻人土壤深處或破壞其生存環境，降低菌源數量，減少侵染幾率。設定通氣道，厚皮甜瓜定植前，在定植穴行的正下方挖一條寬750px、深1000px的溝，溝底鋪15～500px厚 的稻草，覆土，增加根部透氣性，保證植株健康，提高抗病能力，使瓜體均勻、粗壯、美觀。整地時清除田間病株、病果、雜草及野生寄主植物體，以減少浸染來 源，清除田間雜草，尤其是葫蘆科雜草。消毒農事用具，殺滅病菌。採用滴灌或軟管等管式灌溉，避免噴灌、頂灌等方式，以減少傳播。由於噴灌會傳播病菌且造成 果實上積水，有利於病菌侵入感染。病害一旦出現後，應隨時清除病苗和病果，以免遺留田間成為二次感染源。因病菌可從傷口侵入，不要在葉片露水未乾的感染田 塊中工作，也不要把感染田中用過的工具拿到未感染田中使用。
5.輪作倒茬 與非葫蘆科植物輪作，年限越長，防效越好。
6.選育和種植抗病品種 據美國的研究，西瓜不同晶系對本病的抗感性差異很大。在發病較重的地區應換掉原來的感病品種，改種抗病品種，如三倍體較二倍體抗病、皮色深綠的較淺的抗病。在我國新紅寶品種感病程度較高。
