牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用

《牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用》是合肥七星醫藥科技有限公司於2016年11月8日申請的發明專利，該專利申請號為2016109802149，公布號為CN106420698A，專利公布日為2017年2月22日，發明人是牛海軍、邵旭、李曉亮。

《牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用》屬於抗腫瘤藥物的技術領域，所述牡荊素的結構如概述圖所示，所述牡荊素製備的藥物具有很好的抗惡性腫瘤作用。

2020年7月17日，《牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用》獲得安徽省第七屆專利獎優秀獎。

（概述圖為《牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用》的摘要附圖）

基本介紹

• 中文名：牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用
• 公布號：CN106420698A
• 公布日：2017年2月22日
• 申請號：2016109802149
• 申請日：2016年11月8日
• 申請人：合肥七星醫藥科技有限公司
• 地址：安徽省合肥市高新區黃山路624號桑夏綜合樓214室
• 發明人：牛海軍、邵旭、李曉亮
• 代理機構：北京高沃律師事務所
• 代理人：王加貴
• Int.Cl.：A61K31/352(2006.01)I；A61K9/08(2006.01)I；A61K47/10(2006.01)I；A61P35/00(2006.01)I
• 類別：發明專利

專利背景

肺癌是發病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。2016年11月之前的技術中，肺癌治療過程常採用西醫化療藥物和中藥。常用的治療非小細胞肺癌療效好的中藥有參蓮膠囊、益肺清化顆粒、清肺散結丸等；常用的治療小細胞肺癌療效好的中藥有益肺清化膏、益肺清化顆粒、清肺散結丸等。

山楂葉（Crataegus pinnatifida）屬薔薇科植物，味酸，性平，歸肝經，主要功效為活血化瘀，理氣通脈，用於氣滯血瘀、胸悶憋氣、心悸健忘、眩暈耳鳴，是中藥活血化瘀藥中重要的藥物之一。現代醫學研究證明山楂葉具有強心、降壓、抗心絞痛及降血脂等作用。截至2016年11月，對山楂葉研究最多、最廣泛和最深入的是在心血管效應方面，在臨床上能用於治療冠心病、心絞痛、高脂血症、心律失常等。

山楂葉的化學研究表明，山楂葉中主要的活性成分為黃酮類物質。山楂葉中的主要黃酮有牡荊素、山柰酚、槲皮素、牡荊素鼠李糖甙和牡荊素葡萄糖甙等近20種。公開號為CN1300164的中國專利公開了一種牡荊素的提取方法、用途及製劑，從山楂葉中分離出單一有效成分牡荊素，使其純度達到98％以上，用於心血管疾病領域，效果顯著。但2016年11月之前的技術中並未報導牡荊素在治療惡性腫瘤，尤其是在肺癌、肉瘤中的套用。

發明內容

專利目的

《牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用》的目的在於提供一種牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用，牡荊素對於惡性腫瘤的治療效果好，作用速度快，毒副作用低，提供了一種牡荊素的新用途。

技術方案

《牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用》提供了一種牡荊素製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用，所述牡荊素的結構如式Ⅰ所示：

結構式

優選的是，所述惡性腫瘤為肺癌腫瘤、肉瘤。

優選的是，所述肺癌為小細胞肺癌腫瘤。

優選的是，所述藥物的劑型為注射劑。

優選的是，所述藥物還包括輔料，所述輔料包括甘露醇、氫氧化鈉、鹽酸。

優選的是，所述藥物的劑量為3毫克/次～60毫克/次。

改善效果

《牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用》能夠提供一種抗惡性腫瘤的有效藥物，對肺癌或肉瘤治療效果好，作用速度快，毒副作用低，實現了對牡荊素更好的套用。

技術領域

《牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用》涉及抗腫瘤藥物的技術領域，具體涉及一種牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用。

權利要求

1.具有式I所示結構的牡荊素作為唯一活性成分在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用，所述惡性腫瘤為肺癌腫瘤或肉瘤，所述肺癌腫瘤為小細胞肺癌腫瘤。

結構式

2.根據權利要求1所述的套用，所述藥物的劑型為注射劑。

3.根據權利要求1所述的套用，其特徵在於，所述藥物還包括輔料，所述輔料包括甘露醇、氫氧化鈉、鹽酸。

4.根據權利要求1所述的套用，其特徵在於，所述藥物的劑量為3毫克/次～60毫克/次。

實施方式

《牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用》提供了一種牡荊素製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用，所述牡荊素的結構如式Ⅰ所示：

結構式

在該發明中，所述牡荊素優選從山楂葉中提取、分離，得到單一有效成分牡荊素，使其純度達到98％以上。該發明對所述提取分離純化方法沒有特殊的限定，採用該領域技術人員熟知的牡荊素的提取分離純化方法即可，如優選通過水解、結晶、重結晶對牡荊素進行提取。

在該發明中，所述惡性腫瘤優選為肺癌腫瘤、肉瘤。

在該發明中，所述肺癌優選為小細胞肺癌。

在該發明中，所述藥物的劑型優選為注射劑。

在該發明中，所述藥物還包括輔料，所述輔料包括甘露醇、氫氧化鈉、鹽酸。

在該發明中，所述藥物的劑量為3毫克/次～60毫克/次。

該發明對所述注射劑藥物的製備沒有特殊的限定，採用該領域技術人員熟知的注射劑的製備方法即可。如所述注射劑的製備方法優選為：稱取甘露醇、牡荊素混合，加注射用水，攪拌均勻，再加氫氧化鈉溶液進行溶解，再用鹽酸調至pH值為8.0～9.0，加針用活性炭，攪拌10～15分鐘，微孔鈦過濾器減壓粗濾，脫炭，檢查含量、pH合格後，再經微孔濾膜終端過濾後，分裝於西林瓶中，低溫冷凍乾燥，進行後續預凍、乾燥和包裝，得到牡荊素注射劑成品。

下面結合具體實施例對該發明提供的牡荊素製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用做進一步詳細的介紹，該發明的技術方案包括但不限於以下實施例。

實施例1

牡荊素注射劑的製備

a、稱取牡荊素3克、甘露醇180克原料均勻混合，加600毫升注射用水，攪拌均勻，再加0.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液1500毫升，攪拌溶解，再用1摩爾/升的鹽酸溶液調至pH為8.5，加注射用水至3000毫升，加0.05％的針用活性炭，攪拌10分鐘，微孔鈦過濾器減壓粗濾，脫炭，檢查含量、pH合格後，再經0.22微米微孔濾膜終端過濾後，分裝於10毫升西林瓶中，每瓶裝3毫升，低溫冷凍乾燥。

b、預凍：把分裝好的藥品放入凍乾箱內隔板上預凍開始至+25℃～-40℃，2小時；-40℃，3小時。

c、升華乾燥：將冷凝器溫度下降至-45℃以下，啟動真空泵，待真空度達到一定數值後，緩緩打開蝶閥，當乾燥箱內的真空度達13.33帕（0.1毫米汞柱）以下關閉冷凍機，通過隔板下的加熱系統緩緩加熱，使凍結產品的溫度逐漸升高至-20℃，再由-20℃逐漸升高至25℃。整個升華乾燥過程約26小時。

d、再乾燥：在25℃下乾燥5小時，乾燥失重符合規定，在無菌條件下加蓋膠塞，軋蓋，包裝，檢驗，入庫。

• 實施例2

牡荊素注射劑的製備

a、稱取牡荊素30克、甘露醇180克原料均勻混合，加600毫升注射用水，攪拌均勻，再加0.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液1500毫升，攪拌溶解，再用1摩爾/升的鹽酸溶液調至pH為8.5，加注射用水至3000毫升，加0.05％的針用活性炭，攪拌10分鐘，微孔鈦過濾器減壓粗濾，脫炭，檢查含量、pH合格後，再經0.22微米微孔濾膜終端過濾後，分裝於10毫升西林瓶中，每瓶裝3毫升，低溫冷凍乾燥。

b、預凍：把分裝好的藥品放入凍乾箱內隔板上預凍開始至+20℃～-40℃，3小時；-40℃，4小時。

c、升華乾燥：將冷凝器溫度下降至-45℃以下，啟動真空泵，待真空度達到一定數值後，緩緩打開蝶閥，當乾燥箱內的真空度達13.33帕（0.1毫米汞柱）以下關閉冷凍機，通過隔板下的加熱系統緩緩加熱，使凍結產品的溫度逐漸升高至-15℃，再由-15℃逐漸升高至30℃。整個升華乾燥過程約30小時。

d、再乾燥：在25℃下乾燥4小時，乾燥失重符合規定,在無菌條件下加蓋膠塞，軋蓋，包裝，檢驗，入庫。

• 實施例3

牡荊素注射劑的製備

a、稱取牡荊素60克、甘露醇240克原料均勻混合，加600毫升注射用水，攪拌均勻，再加0.1摩爾/升的氫氧化鈉溶液1500毫升，攪拌溶解，再用1摩爾/升的鹽酸溶液調至pH為8.5，加注射用水至3000毫升，加0.05％的針用活性炭，攪拌10分鐘，微孔鈦過濾器減壓粗濾，脫炭，檢查含量、pH合格後，再經0.22微米微孔濾膜終端過濾後，分裝於10毫升西林瓶中，每瓶裝3毫升，低溫冷凍乾燥。

b、預凍：把分裝好的藥品放入凍乾箱內隔板上預凍開始至+25℃～-40℃，2小時；-40℃，3小時。

c、升華乾燥：將冷凝器溫度下降至-45℃以下，啟動真空泵，待真空度達到一定數值後，緩緩打開蝶閥，當乾燥箱內的真空度達13.33帕（0.1毫米汞柱）以下關閉冷凍機，通過隔板下的加熱系統緩緩加熱，使凍結產品的溫度逐漸升高至-20℃，再由-20℃逐漸升高至25℃。整個升華乾燥過程約26小時。

d、再乾燥：在25℃下乾燥約5小時，乾燥失重符合規定,在無菌條件下加蓋膠塞，軋蓋，包裝，檢驗，入庫。

• 實施例4

牡荊素注射劑對小鼠肉瘤S180的抑瘤作用，方法：

1、取腫瘤將腹腔接種小鼠肉瘤S180細胞後一周的昆明小鼠頸椎脫臼處死，用碘酒和75％（v/v）乙醇腹部局部消毒，在無菌條件下取出腹水，用生理鹽水稀釋3倍，得到瘤液。

2、接種瘤液給每隻小鼠腋窩皮下準確接種瘤液0.2毫升。注意接種位置各組應當一致，為防止瘤液接種後漏出皮下，一般是從胸部或背部皮膚進針，到達腋下。

3、分組給藥接種後次日，將動物隨機分組、稱重，牡荊素注射劑設三個劑量組，分別為3、6、12毫克/千克；同時設陽性對照（環磷醯胺）及陰性對照（生理鹽水），每組10隻動物。牡荊素注射劑按3、6、12毫克/千克三個劑量組以等體積（0.2毫升）不同濃度給動物腹腔注射，每天一次，連續給藥7天，陽性對照組於接種後次日以100毫克/千克劑量給動物腹腔注射環磷醯胺1次，每日一次，陰性對照組是每日1次，每次0.2毫升。

4、稱瘤重末次給藥後24小時，頸椎脫臼處死動物，分別稱體重，計算腫瘤抑制率，進行療效評價，並將各組結果進行統計學處理。實體瘤以每組動物的評價腫瘤重量作為療效指標。

計算對照組的平均瘤重及治療組的平均瘤重之比值（T/C-％），也可計算腫瘤生長抑制率（％），計算公式如下：

腫瘤生長抑制率％＝（對照組平均瘤重-治療組平均瘤重）/對照組平均瘤重×％

結果：牡荊素注射劑對小鼠肉瘤S180有較強的抑制作用，12毫克/千克的抑制率為55.7％（P＜0.05），結果見表1：

表1接種藥物對肉瘤S₁₈₀小鼠體重及瘤重的影響（）

表1

組別	劑量（毫克/千克）	體重		瘤重	抑制率
		給藥前	給藥後
陰性對照	-	21.3±1.07	25.4±1.90	1.61±0.489	-
環磷醯胺	100.0	21.2±0.72	23.3±6.71	0.31±1.102	50.2**
牡荊素注射劑	3	20.5±0.98	23.2±6.97	1.25±0.355	20.4*
牡荊素注射劑	6	20.7±1.36	24.5±2.01	1.16±0.345	29.1*
牡荊素注射劑	12	30.1±0.95	23.7±2.02	0.73±0.249	55.7*

與對照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

由表1可知，牡荊素對小鼠體重及瘤重的影響均有統計學意義，且在12毫克/千克劑量達到很好的效果，不低於陽性對照藥。

• 實施例5

牡荊素注射劑對小鼠Lewis肺癌生長的抑制作用

原理：同種動物移植性腫瘤模型系選擇三種或三種以上的小鼠、大鼠移植性腫瘤，進行實驗治療。實體觀察瘤重抑制率或T/C％，給藥途徑應與臨床一致，並設三個或三個以上劑量組。對每一種瘤株的實驗治療應獲得可重複性的結果，牡荊素注射劑對同種動物移植性腫瘤具有一定的生長抑制作用。

材料：動物：C57BL/6小鼠。瘤株：小鼠Lewis肺癌。器材：手術刀、剪、鑷子，注射器，玻璃勻漿器或套管針，超淨工作檯。藥品及試劑：牡荊素注射劑實驗前用生理鹽水將藥物配成所需濃度的溶液，氟尿嘧啶（5-Fu）試驗前用生理鹽水稀釋成所需濃度的溶液。

方法：

1.取瘤種用小鼠移植性腫瘤Lewis肺癌生長良好的瘤源，無菌條件下取荷瘤動物的實體瘤組織，用剪刀減成小碎塊，用套管針移植或玻璃勻漿器加無菌生理鹽水磨成勻漿，計數每1毫升勻漿液中的瘤細胞數。

2.接種瘤液給每隻動物皮下接種2×106細胞。

3.分組給藥接種後24小時分組給藥，每組10隻動物。實驗共分5組，①陰性對照組，②氟尿嘧啶陽性藥對照組，③牡荊素注射劑小劑量組3毫克/千克，④牡荊素注射劑中劑量組6毫克/千克，⑤牡荊素注射劑高劑量組12毫克/千克。氟尿嘧啶25毫克/千克隔日灌胃給藥，共給3次。牡荊素注射劑每天灌胃給藥1次，連續10天。

4.稱瘤重末次給藥後24小時處死動物、稱體重及剝瘤稱重，計算抑制率，並進行統計學處理數據。計算腫瘤生長抑制率（％），計算公式如下：

腫瘤生長抑制率％＝（對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重）/對照組平均瘤重×100％

結果：牡荊素注射劑在3毫克/千克、6毫克/千克、12毫克/千克的劑量時，對小鼠Lewis肺癌均有一定的抑制作用，且呈劑量效應關係。說明牡荊素注射劑具有一定的抗腫瘤作用，結果如表2所示。

表2小鼠Lewis肺癌生長抑制情況（）

表2

組別	劑量（毫克/千克）	體重（克）始/末	瘤重（克）	抑制率（％）
對照	-	20.2/+2.1	3.00±0.68	-
5-Fu	25	20.0/+5.7	1.50±0.62	50.0**
牡荊素注射劑	3	21.2+4.3	2.11±0.87	30**
牡荊素注射劑	6	20.4+7.3	1.62±0.94	46**
牡荊素注射劑	12	20.5+6.5	1.51±0.86	50**

與對照組比：**P＜0.01

由表2可知，牡荊素注射劑對小鼠Lewis肺癌生長抑制有明顯作用，有統計學意義，且在12毫克/千克劑量達到很好的效果，不低於陽性對照藥。

• 實施例6

牡荊素注射劑對人小細胞肺癌裸鼠移植瘤的生長抑制作用

原料：裸鼠又稱無胸腺小鼠，具有四個特點：①先天性胸腺缺失，②胸腺依賴性免疫功能缺乏，其T細胞功能接近於零，但B細胞功能大致正常；③人體腫瘤異種移植時無排斥反應，故可供人體腫瘤移植。異種移植後的人體腫瘤在裸鼠仍保持其原有的組織形態及免疫學特點以及特有的染色體組型和對抗腫瘤藥的原有敏感型。移植後的人腫瘤細胞仍保持其原有的性能。④裸鼠因皮膚無毛、操作方便，易於動態觀察腫瘤的生長狀態，牡荊素注射劑可抑制人小細胞肺癌在裸鼠的生長。

材料：動物：裸鼠BALB/C/nu。瘤株：人小細胞肺癌。器材：手術用刀、剪、鑷子，注射器，玻璃勻漿器或套管針、遊標卡尺、超淨工作檯。藥品及試劑：牡荊素注射劑實驗前用生理鹽水配成所需濃度的溶液，環磷醯胺實驗前用生理鹽水配成所需濃度的溶液。

方法：1.取瘤種並接種選擇腫瘤生長旺盛的人小細胞肺癌荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死。在超淨台用碘酒和酒精消毒動物皮膚，剪開皮膚剝離腫瘤，用勻漿器將瘤組織加無菌生理鹽水製成細胞懸液，接種於動物右上肢腋窩皮下，接種腫瘤細胞數約為5×104/只。 2.分組給藥接種後第6天分組給藥並測量腫瘤體積。試驗共設5組：①陰性對照組，②環磷醯胺陽性藥對照組，③牡荊素注射劑低劑量組3毫克/千克，④牡荊素注射劑中劑量組6毫克/千克，⑤牡荊素注射劑高劑量組12毫克/千克。環磷醯胺60毫克/千克腹腔注射1次。牡荊素注射劑灌胃給藥每天一次，連續11天，停藥後24小時處死動物，剝瘤稱重，並用統計學方法處理數據，進行療效評分。

相對瘤體積（立方毫米）＝1/2a2b（a為寬，b為長）；腫瘤生長抑制率％＝（對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重）/對照組平均瘤重×100％

結果：見表3和表4

表3人小細胞肺癌裸鼠移植瘤的生長抑制情況（雄性裸鼠）（）

表3

組別	劑量（毫克/千克）	體重（克）始/末	瘤重（克）	抑制率（％）
對照	--	20.8/+4.0	3.22±1.598	--
5-Fu	60	20.0/+3.0	0.12±0.068	96.3**
牡荊素注射劑	3	21.1+4.0	2.44±1.517	24.2
牡荊素注射劑	6	21.0+2.4	1.80±0.492	44.1**
牡荊素注射劑	12	20.0+1.8	1.45±0.579	54.9**

註：**P＜0.01

表4人小細胞肺癌裸鼠移植瘤的生長抑制情況（雄性裸鼠）（）

表4

組別	劑量（毫克/千克）	體重（克）始/末	瘤重（克）	抑制率（％）
對照	-	19.9/+1.3	2.89±1.312	-
5-Fu	60	19.4/+1.2	0.17±0.051	94.1**
牡荊素注射劑	3	19.6/+0.9	2.02±0.498	30.1**
牡荊素注射劑	6	19.9/-0.7	1.26±0.658	56.4**
牡荊素注射劑	12	20.4/-0.4	1.08±0.771	62.6**

註：**P＜0.01

由表3、表4可以看出，牡荊素注射劑在6毫克/千克、12毫克/千克劑量時，對荷瘤裸鼠人小細胞肺癌有較好的抑瘤作用，6毫克/千克劑量時，雄鼠抑瘤率為44.1％（P＜0.01），雌鼠抑瘤率為56.4％（P＜0.01）；12毫克/千克劑量時，雄鼠抑瘤率為54.9％（P＜0.01，雌鼠抑瘤率為62.6％（P＜0.01）。

榮譽表彰

2020年7月17日，《牡荊素在製備預防和/或治療惡性腫瘤藥物中的套用》獲得安徽省第七屆專利獎優秀獎。