《一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用》是合肥智匯醫藥科技有限公司於2016年12月26日申請的發明專利，該專利申請號為2016112147557，公布號為CN106727868A，專利公布日為2017年5月31日，發明人是黃順旺、彭纓、曹陽。
《一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用》公開了一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用。該發明發掘了柿葉提取物新的用途，擴大了其套用範圍。所述柿葉提取物可作為預防和治療老年痴呆的藥物；可和適當的藥用輔料製成各種劑型，適宜開發成中藥新藥。該發明通過對製得的柿葉提取物進行細胞實驗和動物實驗，結果表明柿葉提取物具有保護PC12細胞拮抗Aβ25‑35損傷的作用，可以用於腦神經的保護，柿葉提取物對於老年痴呆疾病具有一定的延緩作用；柿葉提取物對Aβ1‑42誘導的老年痴呆大鼠記憶功能損傷具有明顯的保護作用。
2021年8月16日，《一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用》獲得安徽省第八屆專利獎優秀獎。
概述圖為《一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用》的摘要附圖）
基本介紹
- 中文名：一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用
- 公布號：CN106727868A
- 公布日：2017年5月31日
- 申請號： 2016112147557
- 申請日：2016年12月26日
- 申請人：合肥智匯醫藥科技有限公司
- 地址：安徽省合肥市高新區望江西路539號鯤鵬產業園1-403
- 發明人：黃順旺、彭纓、曹陽
- Int.Cl.：A61K36/44(2006.01)I、A61P25/28(2006.01)I、A61K127/00(2006.01)N
- 類別：發明專利
- 專利代理機構：合肥市長遠專利代理事務所
- 代理人：崇鑫、劉希慧
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,附圖說明,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
據世界衛生組織統計，65歲以上老年人的阿爾茨海默病（alzheimer's disease，AD）的發病率在1-2％之間，且隨著年齡的增加AD的發病率也呈現增加的趨勢。AD是一種多病機異質性疾病，具有特徵性神經病理和神經化學改變，是常見的老年慢性退行性神經疾病。臨床表現為進行性記憶減退、認知障礙、並可伴有行為和個性的改變，這嚴重危害了老年人的生活質量，也給患者家庭帶來了沉重的負擔。截至2016年12月，AD的發病原因仍不清楚，但得到大家公認的是AD應是多種因素共同作用的結果，與其相關的危險因素主要有以下幾個方面：①人口學因素，②生活方式，③血管因素，④遺傳因素等。AD的發病機制尚未完全明確，主要有以下幾種假說[Brain research.2009,1280:137-147]：①Aβ級聯反應假說，②神經血管假說，③神經炎症反應和氧化應激，④膽鹼能假說，還有基因組假說、高膽固醇假說、雌激素假說、凋亡假說等。但所有的假說均不能單獨完全明確的解釋AD的發病機理。正因為AD的病變還未完全明確，現在關於AD的治療方法也是多方面的，其中膽鹼酯酶抑制藥，如他克林（tacrine）、多奈哌齊（donepezil）、利斯的明（rivastigmine）、加藍他敏（galantamine），此外，中國自行研製的天然藥物石杉鹼甲（huperzine A），仍然是臨床上首選的治療方法。但這些藥物只能改善患者的認知、記憶功能障礙等症狀，並且作用靶點單一，並不能從根本上阻斷AD的發展進程，因此尋找新的有效治療AD的藥物仍是廣大醫藥學者重要的研究目標。中醫理論認為老年痴呆症發病的關鍵是瘀痰阻竅，傳統中藥治療方法在中國已有幾千年的套用歷史，由於其含有多種有效成分，具有的多靶點、多環節、協同作用的特點，因而在治療AD方面成為最具潛力的方法之一。
柿葉藥用歷史悠久，收載於《中國藥典》2015年版一部、湖南省（1993年版）和廣西省（1990年版）中藥材標準中，柿葉為柿樹科植物柿Diospyros kaki Thunb.的乾燥葉子，味苦、酸、澀，性涼；能清肺止咳，涼血止血，活血化瘀，降血壓。用於咳喘，肺脹，各種內出血，高血壓，腦動脈硬化症，冠心病。現代研究表明，柿葉中主要含有黃酮類、三萜類、酚酸類和脂肪酸等化學成分，文獻報導從柿葉中一共分離得到90餘個化合物。其中，包括從柿葉中分離得到24個黃酮類化合物，分別以槲皮素（quercetin）、山柰酚（kampferol）、楊梅素（myricetin）、牡荊素（vitexin）中的一種為苷元；33個三萜化合物，分別以烏索烷（ursane）、齊墩果烷（oleanane）、羽扇豆烷（lupane）中的一種為苷元[Journal of Ethnopharmacology,2015,163,229-240]。Chen等研究表明：柿葉中分離得到的三葉豆苷、黃芪苷等5種黃酮化合物以及α-香樹脂醇、烏蘇醇等5種三萜化合物對人體嗜中性粒細胞中由N-甲醯基-甲二磺醯基-亮氨酸基-苯基丙氨酸（fMLP）誘導的過氧化物產生及蛋白質的酪氨酸殘基的磷酸化有抑制作用[Clinica Chimica Acat.2002,362（1-2）:169-175；Clinica Chimica Acat.2002,320（1-2）:11-16]。Sun等報導：柿葉總黃酮對腦缺血再灌注損傷、興奮性神經毒損傷具有較好的神經保護作用，並且此作用主要與調節氧化還原反應平衡及抗細胞凋亡有關[Food andChemical Toxicology.2011,49:2689-2696]。Bei等研究表明：柿葉總黃酮對谷胺酸和缺氧誘導的海馬神經元損傷具有明顯的保護作用，並且此效果與其抗氧化作用有關[Journalof Ethnopharmacology.2009,126:132-142]。表明柿葉中的黃酮、三萜化合物在氧化應激反應、神經保護方面具有潛在的藥用價值。自2016年12月以來，中國開展了一些針對柿葉在清除自由基、抗氧化、神經保護、抑制血栓形成、抗動脈粥樣硬化等方面[Journal of Ethnopharmacology.2015,163,229-240]與神經退行性疾病相關的中藥藥理研究，取得了階段性的成果，顯示柿葉特有的優勢，為擴大柿葉臨床套用範圍提供了寶貴的經驗。截至2016年12月，中國柿葉產品有腦心清片、膠囊等，皆為用於防治腦缺血中風等心腦血管的藥物，而對於抗AD作用的藥物開發研究並未見報導。
發明內容
專利目的
基於背景技術存在的技術問題，《一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用》提出了一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用，該發明發掘了柿葉提取物新的用途，擴大了其套用範圍。所述柿葉提取物可作為預防和治療老年痴呆的藥物；可和適當的藥用輔料製成各種劑型，適宜開發成中藥新藥。
技術方案
優選地，所述老年痴呆包括阿爾茨海默病、血管性痴呆和混合型痴呆。優選地，所述老年痴呆為阿爾茨海默病。優選地，所述藥物的劑型為片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、微丸劑、顆粒劑、凍乾粉針、注射劑和/或輸液劑。優選地，所述柿葉提取物的製備方法為：取乾燥柿葉，用乙醇水溶液浸泡，然後加入乙醇水溶液回流，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取，取水相，再加入乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相，濃縮，乾燥得到柿葉提取物。優選地，所述柿葉提取物的製備方法為：取乾燥柿葉，用以柿葉重量為基準1-1.5倍的乙醇水溶液浸泡2-5小時，然後加入以柿葉重量為基準8-12倍的乙醇水溶液回流2-3次，每次回流2-3小時，合併回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取2-5次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取2-5次，合併乙酸乙酯相，濃縮，乾燥得到柿葉提取物。優選地，乙醇水溶液的質量分數為60-90wt％。優選地，石油醚的沸程為60-90℃。優選地，乾燥為減壓乾燥，乾燥溫度為40-60℃。優選地，所述柿葉提取物中總黃酮的含量為30-50wt％，總三萜的含量為30-50wt％。上述柿葉提取物為淺黃色粉末，微溶於水，易溶於乙酸乙酯、乙醇、甲醇，氣微味苦。上述柿葉提取物的製備方法的收率為3-5wt％。上述柿葉提取物的製備方法中，水、石油醚、乙酸乙酯的作用是萃取，不規定他們的用量。上述乙醇、石油醚、乙酸乙酯均可回收再利用。
該發明人將所製得的柿葉提取物進行細胞實驗和動物實驗，細胞實驗結果如下：MTT法檢測結果顯示柿葉提取物明顯減輕Aβ25-35誘導的PC12細胞的凋亡；小時oec小時est33258染色和細胞流式實驗也驗證了上述結果；用Western-blot檢測凋亡相關蛋白的表達，結果顯示柿葉提取物能顯著降低凋亡蛋白Bax和Caspase-3表達水平、升高抗凋亡蛋白Bcl-2的表達水平，和模型組有顯著性差異；細胞實驗表明柿葉提取物具有保護PC12細胞拮抗Aβ25-35損傷的作用，可以用於腦神經的保護，柿葉提取物對於老年痴呆疾病具有一定的延緩作用。動物實驗結果如下：大鼠海馬區注射2微升的Aβ1-42（5微克/微升L，0.2微升/分鐘）建立老年痴呆模型，水迷宮實驗結果顯示，與模型組相比，柿葉提取物低、中、高劑量組均可明顯降低大鼠的潛伏期，增加通過目標象限的次數及延長在目標象限所待的時間。跳台實驗中，與模型組相比，柿葉提取物低、中、高劑量組均可明顯延長大鼠潛伏期，減少受到電擊的次數。動物實驗表明柿葉提取物對Aβ1-42誘導的老年痴呆大鼠記憶功能損傷具有明顯的保護作用。上述試驗結果表明：柿葉提取物可用於製備抗老年痴呆的藥物，以預防和治療老年痴呆。這種作用與柿葉提取物中的黃酮類和三萜類成分起協同作用有關。柿葉資源豐富，其有效部位總黃酮和總三萜含量之和大於60wt％，其具有確切的抗老年痴呆藥理作用，適宜將柿葉提取物開發為中藥新藥。
改善效果
《一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用》發掘了柿葉提取物新的用途，擴大了其套用範圍。所述柿葉提取物可作為預防和治療老年痴呆的藥物；可和適當的藥用輔料製成各種劑型，適宜開發成中藥新藥。
附圖說明
圖1為柿葉提取物對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡的影響的小時oc小時est染色法檢測圖，其中，a為對照組、b為模型組、c為柿葉提取物高劑量組、d為柿葉提取物中劑量組、e為柿葉提取物低劑量組。
圖2為柿葉提取物對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡的影響的細胞流式法檢測圖，其中，a為對照組、b為模型組、c為柿葉提取物高劑量組、d為柿葉提取物中劑量組、e為柿葉提取物低劑量組。
圖3為柿葉提取物對Aβ25-35誘導的PC12細胞蛋白表達水平的影響的蛋白免疫印跡法檢測圖，其中，a為Bax蛋白、b為Caspase-3蛋白、c為Bcl-2蛋白。
技術領域
《一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用》涉及醫藥技術領域，尤其涉及一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用。
權利要求
- 《一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用》特徵在於，所述老年痴呆包括阿爾茨海默病、血管性痴呆和混合型痴呆。
- 該發明特徵在於，所述老年痴呆為阿爾茨海默病。
- 該發明特徵在於，所述藥物的劑型為片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、微丸劑、顆粒劑、凍乾粉針、注射劑和/或輸液劑。
- 該發明特徵在於，所述柿葉提取物的製備方法為：取乾燥柿葉，用乙醇水溶液浸泡，然後加入乙醇水溶液回流，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取，取水相，再加入乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相，濃縮，乾燥得到柿葉提取物。
- 該發明特徵在於，所述柿葉提取物的製備方法為：取乾燥柿葉，用以柿葉重量為基準1-1.5倍的乙醇水溶液浸泡2-5小時，然後加入以柿葉重量為基準8-12倍的乙醇水溶液回流2-3次，每次回流2-3小時，合併回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取2-5次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取2-5次，合併乙酸乙酯相，濃縮，乾燥得到柿葉提取物。
- 該發明特徵在於，乙醇水溶液的質量分數為60-90wt％。
- 該發明特徵在於，石油醚的沸程為60-90℃。
- 該發明特徵在於，乾燥為減壓乾燥，乾燥溫度為40-60℃。
- 該發明特徵在於，所述柿葉提取物中總黃酮的含量為30-50wt％，總三萜的含量為30-50wt％。
實施方式
- 實施例1
柿葉提取物的製備：取乾燥柿葉，用以柿葉重量為基準1.3倍的質量分數為70wt％乙醇水溶液浸泡4小時，然後加入以柿葉重量為基準10倍的質量分數為70wt％乙醇水溶液回流2次，每次回流2小時，合併回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取3次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取3次，合併乙酸乙酯相，濃縮，調節溫度為50℃，減壓乾燥得到柿葉提取物，收率為3.2％。柿葉提取物的定性鑑別：以環己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、冰醋酸體積比為8:3.5:4.5:0.2的混合溶液為展開劑，用原位預處理-薄層色譜法對柿葉提取物中的齊墩果酸、熊果酸定性鑑別；以甲苯、甲酸乙酯、甲酸體積比為7:6:1.5的混合溶液為展開劑，用薄層色譜法對柿葉提取物中的蘆丁、金絲桃苷、槲皮素和山柰酚進行定性鑑別。柿葉提取物中的總黃酮、總三萜的含量測定：以0.1摩爾/升AlCl3·6H2O1.0毫升為顯色系統，以蘆丁為對照品，用紫外分光光度法測定柿葉提取物中總黃酮含量為38.5wt％；以0.5毫升的質量分數為5wt％香草醛冰醋酸溶液和1毫升高氯酸為顯色系統，以熊果酸為對照品，用紫外分光光度法測定柿葉提取物中總三萜含量為35.5wt％。
- 實施例2
柿葉提取物的製備：取乾燥柿葉，用以柿葉重量為基準1.5倍的質量分數為60wt％乙醇水溶液浸泡5小時，然後加入以柿葉重量為基準12倍的質量分數為60wt％乙醇水溶液回流3次，每次回流3小時，合併回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取4次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取4次，合併乙酸乙酯相，濃縮，調節溫度為60℃，減壓乾燥得到柿葉提取物，收率為3.7％，按實施例1的含量測定方法，測得柿葉提取物中總黃酮含量為35.5wt％，總三萜含量為31.2wt％。
- 實施例3
柿葉提取物的製備：取乾燥柿葉，用以柿葉重量為基準1.1倍的質量分數為80wt％乙醇水溶液浸泡3小時，然後加入以柿葉重量為基準8倍的質量分數為80wt％乙醇水溶液回流2次，每次回流2小時，合併回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取5次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取5次，合併乙酸乙酯相，濃縮，調節溫度為40℃，減壓乾燥得到柿葉提取物，收率為3.0％，按實施例1的含量測定方法，測得柿葉提取物中總黃酮含量為32.4wt％，總三萜含量為33.1wt％。
- 實施例4
柿葉提取物的製備：取乾燥柿葉，用以柿葉重量為基準1倍的質量分數為90wt％乙醇水溶液浸泡2小時，然後加入以柿葉重量為基準9倍的質量分數為90wt％乙醇水溶液回流3次，每次回流2.5小時，合併回流液，過濾取濾液，濃縮得到浸膏；將浸膏加入水中溶解，加石油醚萃取2次，取水相，再加入乙酸乙酯萃取2次，合併乙酸乙酯相，濃縮，調節溫度為45℃，減壓乾燥得到柿葉提取物，收率為2.9％，按實施例1的含量測定方法，測得柿葉提取物中總黃酮含量為32.8wt％，總三萜含量為31.3wt％。
- 實施例5
取實施例1製得的柿葉提取物，進行柿葉提取物的細胞實驗。柿葉提取物對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡的AD模型的保護作用實驗如下：1實驗材料：實施例1製得的柿葉提取物；PC12細胞（大鼠腎上腺髓質嗜鉻細胞瘤）株購於北京協和細胞資源中心；Aβ25-35（β樣澱粉蛋白25-35，大連美侖生物技術有限公司）；AnnexinV-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒[貝博（上海）公司]；BCA蛋白濃度測定試劑盒、PBS緩衝液、RIPA裂解液（弱）、SDS-PAGE蛋白上樣緩衝液、青黴素-鏈黴素溶液、胰蛋白酶（Trypsin）（江蘇碧雲天生物技術研究所）；DMEM高糖培養基、胎牛血清（FBS）（美國Gibco公司）；二甲基亞碸（DMSO）、四甲基偶氮唑藍（MTT）、Hoc小時est33258（美國Sigma公司）；聚偏二氟乙烯膜（PVDF）（美國Milliproe公司）；超敏感底物發光試劑盒（T小時ermo公司）；磷酸鹽緩衝液（PBS）、鼠抗β-actin抗體、山羊抗兔IgG/HRP和山羊抗鼠IgG/HRP（北京中杉金橋生物技術有限公司）；兔抗Bax抗體、兔抗Bcl-2抗體、兔抗Caspase-3抗體（北京Bioss公司）。2分組及處理：將PC12細胞分為5組，分別為對照組、模型組、柿葉提取物低劑量組（5微克/毫升）、柿葉提取物中劑量組（10微克/毫升）和柿葉提取物高劑量組（20微克/毫升），每組設3個副孔。細胞種板隔夜後，換液，各劑量組分別加入含有相應濃度柿葉提取物的培養基，對照組和模型組加等量的培養基，均孵育2小時，各劑量組和模型組中均加入終濃度為30微米的Aβ25-35繼續培養24小時。3檢測與結果：3.1採用MTT法測定不同濃度的柿葉提取物對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡的保護作用，結果見表1。
組別 | 柿葉提取物濃度（微克/毫升） | 吸光值A |
對照組 | - | 1.047±0.151 |
模型組 | - | 0.611±0.027 |
柿葉提取物低劑量組 | 5 | 0.758±0.047* |
柿葉提取物中劑量組 | 10 | 0.816±0.022* |
柿葉提取物高劑量組 | 20 | 0.971±0.038** |
上述##P<0.01,與對照組比較；*P<0.05,**P<0.01，均與模型組比較。由表1可以看出，與對照組相比，經Aβ25-35刺激後PC12細胞的活力明顯降低；與模型組比較，柿葉提取物中劑量組和高劑量組的細胞活力明顯增加；柿葉提取物對Aβ25-35誘導的PC12細胞凋亡具有保護作用。3.2採用小時oc小時est33258染色法，觀察低、中、高劑量的柿葉提取物對Aβ25-35（30微米）誘導PC12細胞凋亡的影響，結果參照圖1，圖1為柿葉提取物對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡的影響的小時oc小時est染色法檢測圖，其中，a為對照組、b為模型組、c為柿葉提取物高劑量組、d為柿葉提取物中劑量組、e為柿葉提取物低劑量組。由圖1可以看出，與對照組相比，經Aβ25-35處理後細胞凋亡明顯增多；與模型組相比，不同劑量的柿葉提取物處理後，細胞核形態異常的細胞數量明顯減少，且降低的程度與柿葉提取物的劑量呈現了明顯的正相關。由此表明柿葉提取物對Aβ25-35誘導的PC12細胞凋亡具有保護作用。3.3採用流式細胞儀檢測低、中、高劑量的柿葉提取物對Aβ25-35（30微米）誘導PC12細胞凋亡的影響，結果參照圖2，圖2為柿葉提取物對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡的影響的細胞流式法檢測圖，其中，a為對照組、b為模型組、c為柿葉提取物高劑量組、d為柿葉提取物中劑量組、e為柿葉提取物低劑量組。由圖2可以看出，Aβ25-35處理細胞24小時後，與對照組相比，細胞凋亡率達到50±7.85％，細胞明顯發生凋亡（P<0.01）；與模型組相比，柿葉提取物低、中、高劑量組的細胞凋亡率分別為35±3.10％，27±4.25％，20±2.35％。3.4採用蛋白免疫印跡法（western-blot法），檢測低、中、高劑量的柿葉提取物對Aβ25-35（30微米）誘導PC12細胞的Bax蛋白、Caspase-3蛋白和Bcl-2蛋白的表達水平的影響。結果參照圖3，圖3為柿葉提取物對Aβ25-35誘導的PC12細胞蛋白表達水平的影響的蛋白免疫印跡法檢測圖，其中，a為Bax蛋白、b為Caspase-3蛋白、c為Bcl-2蛋白。上述Bax蛋白和Caspase-3蛋白是促進凋亡蛋白，Bcl-2蛋白是抗凋亡蛋白。由圖3可以看出，與對照組比較，經Aβ25-35處理後PC12細胞的Bax蛋白、Caspase-3蛋白表達明顯升高，Bcl-2蛋白表達明顯下降；與模型組比較，柿葉提取物低、中、高劑量組中PC12細胞的Caspase-3蛋白和Bax蛋白表達均明顯減少，Bcl-2蛋白的表達均明顯增加，且與劑量呈現了一定的正相關。4細胞實驗結論上述Aβ25-35損傷PC12細胞是經典的體外模擬AD的方法，由上述細胞實驗結果可以看出，柿葉提取物具有保護PC12細胞拮抗Aβ25-35損傷的作用，可以用於腦神經的保護，柿葉提取物對於老年痴呆疾病具有一定的延緩作用。
- 實施例6
取實施例1製得的柿葉提取物，進行柿葉提取物的動物實驗。柿葉提取物對老年痴呆大鼠認知功能的影響實驗如下：1實驗動物與材料1.1實驗動物：SD大鼠，250-300g，雄性；購買於安徽醫科大學實驗動物中心，飼養條件：溫度＝22±4℃，濕度＝40-70％；動物合格證號：No.34000200000606。1.2實驗材料：實施例1製得的柿葉提取物；多奈哌齊（天津力生製藥股份有限公司，批號：20150528）；Aβ1-42（β樣澱粉蛋白1-42，Sigma公司）。2分組與處理大鼠海馬區注射2微升的Aβ1-42（5微克/微升L，0.2微升/分鐘）建立老年痴呆模型。實驗共分為6組，分別為假手術組，模型組，陽性對照組，柿葉提取物低、中、高劑量組。假手術組不造模；模型組造模後灌胃給生理鹽水，每日一次，連續30天；陽性對照組造模後灌胃給多奈哌齊1.5mg/kg，每日一次，連續30天；柿葉提取物低、中、高劑量組造模後分別灌胃給柿葉提取物100、200、400mg/kg，每日一次，連續30天。給藥30天后，各組動物進行水迷宮、跳台實驗，觀察各組大鼠認知功能。3實驗結果3.1柿葉提取物對水迷宮實驗中大鼠學習和記憶能力的影響，結果見表2和表3。表2水迷宮實驗中柿葉提取物對Aβ1-42誘導的大鼠認知損傷的影響（n＝10）
組別 | 劑量 （毫克/千克） | n | 潛伏期（S） | ||||
1天 | 2天 | 3天 | 4天 | 5天 | |||
假手術組 | / | 10 | 46.90±10.05 | 38.8±9.55 | 32.9±9.84 | 28.6±9.19 | 24.5±8.34 |
模型組 | / | 10 | 63.80±11.91** | 54.3±8.92** | 49.3±8.26 | 44±8.23** | 39.9±8.37** |
陽性對照組 | 1.5 | 10 | 50.4±10.55 | 43.8±8.23 | 38±9.18## | 33.9±9.1## | 30.1±8.24## |
柿葉提取物低劑量組 | 100 | 10 | 55.1±10.75 | 48.7±10.09 | 43.7±10.45 | 37.7±8.97 | 33.9±7.95 |
柿葉提取物中劑量組 | 200 | 10 | 51.4±8.45 | 45±8.68 | 40.1±8.82## | 34.5±9.07## | 31.3±8.22## |
柿葉提取物高劑量組 | 400 | 10 | 49.5±12.22 | 42.5±10.47 | 37.1±11.13## | 32.5±10.89## | 28.2±10.8 |
上述p<0.01與假手術組比較；p<0.01與模型組比較。
表3水迷宮實驗中柿葉提取物對Aβ1-42誘導的大鼠認知損傷的影響（n＝10）
組別 | 劑量 | n | 目標象限所待的時間 | 穿過目標象限次數 |
（毫克/千克） | （秒） | （次數/2分鐘） | ||
假手術組 | / | 10 | 30.5±7.41 | 10.5±3.27 |
模型組 | / | 10 | 12.1±3.98 | 3.7±1.16** |
陽性對照組 | 1.5 | 10 | 21.9±6.28## | 8.4±2.46## |
柿葉提取物低劑量組 | 100 | 10 | 164.92 | 4.7±1.25 |
柿葉提取物中劑量組 | 200 | 10 | 18.9±6/14## | 7.6±1.78## |
柿葉提取物高劑量組 | 400 | 10 | 22.6±6.36## | 8.2±2.49## |
上述p<0.01與假手術組比較；p<0.01與模型組比較。由表2、3可以看出，與假手術組比較，模型組大鼠在5天實驗中，找到平台的所需時間（潛伏期）明顯增加，穿過目標象限次數及在目標象限所待的時間明顯下降；與模型組比較，柿葉提取物低、中、高劑量組均可明顯降低大鼠的潛伏期，增加穿過目標象限的次數，延長在目標象限所待的時間，差異有顯著性（P＜0.01），柿葉提取物中、高劑量組的效果與陽性對照組相似。3.2柿葉提取物對跳台實驗中大鼠記憶能力的影響，結果見表4。表4跳台實驗中柿葉提取物對Aβ1-42誘導的大鼠認知損傷的影響（n＝10）
組別 | 劑量 | n | 潛伏期（S） | 錯誤次數 |
（毫克/千克） | （次數/3分鐘） | |||
假手術組 | / | 10 | 139.1±20.78 | 2.2±0.63 |
模型組 | / | 10 | 78.7±19.56 | 7.4±2.01** |
陽性對照組 | 1.5 | 10 | 117.3±26.01 | 4.8±1.4## |
柿葉提取物低劑量組 | 100 | 10 | 88±26.33 | 6.4±1.84 |
柿葉提取物中劑量組 | 200 | 10 | 101.5±24.9# | 5.5±1.72# |
柿葉提取物高劑量組 | 400 | 10 | 114.4±26.09## | 5.3±1.42## |
上述p<0.01與假手術組比較；p<0.05，p<0.01與模型組比較。由表4可以看出，與假手術組比較，模型組大鼠從平台跳下的潛伏期明顯縮短，受到電擊次數明顯增加；與模型組比較，柿葉提取物低、中、高劑量組均可明顯延長大鼠潛伏期，減少受到電擊的次數，差異有顯著性（P＜0.05，P＜0.01）。柿葉提取物高劑量組效果與多奈哌齊組相似。4動物實驗結論：由上述動物實驗結果可以看出，柿葉提取物對Aβ1-42誘導的老年痴呆大鼠記憶功能損傷具有明顯的保護作用。
- 實施例7
取上述實施例1製備的柿葉提取物製成抗老年痴呆藥物，根據臨床需要，柿葉提取物加入相應的藥用輔料，製成片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、微丸劑、顆粒劑、凍乾粉針、注射劑和/或輸液劑。
榮譽表彰
2021年8月16日，《一種柿葉提取物在製備防治老年痴呆的藥物中的套用》獲得安徽省第八屆專利獎優秀獎。
