牛布魯氏菌病高保護性、雙向分子標記疫苗的研究

《牛布魯氏菌病高保護性、雙向分子標記疫苗的研究》是依託吉林大學，由閆廣謀擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：牛布魯氏菌病高保護性、雙向分子標記疫苗的研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：閆廣謀
• 依託單位：吉林大學

項目摘要

自1990年起，牛布魯氏菌病的發病率在我國逐年攀升，每年造成數十億元的直接損失,預防該病的最佳方法是給牛接種疫苗。當前布魯氏菌弱毒活疫苗存在安全性低、保護性能弱，且不能用血清學方法區分感染的動物是自然感染還是接種免疫。本項目通過定向改造布魯氏菌弱毒活疫苗S19基因組的方法，用能增強T細胞免疫的外源基因，替換下布魯氏菌弱毒活疫苗S19的毒力基因，同時讓它具有正（血清學方法檢測呈陽性）、負（血清學方法檢測呈陰性）兩個方向的分子標記功能，構建出具有自主智慧財產權，安全性能好，免疫保護性強，並且用血清學方法，就能區別感染的牛是野毒感染還是接種了分子標記疫苗的疫苗。

結題摘要

自1990年起，動物布魯氏菌病的發病率在我國逐年攀升，每年造成數十億元的直接損失，防治該病的最佳方法是接種疫苗。當前布魯氏菌弱毒活疫苗存在安全性低、保護性能弱，且不能用血清學方法鑑別感染的動物是自然感染還是接種免疫。本項目是通過定向改造布魯氏菌弱毒活疫苗S19基因組的方法，構建基因突變的S19，以克服它的缺陷。 選擇了靶基因，並對靶基因進行了研究。通過構建了VirB 12基因缺失株△VirB12株，對布魯氏菌VirB12基因的毒力、免疫保護性進行了研究。結果表明△VirB12株與S19免疫保護性相當。表達純化了VirB12蛋白，用純化的VirB12蛋白能鑑別感染的小鼠是△VirB12感染還是S19株感染。 靶基因確定後，在前期構建的S19的Bp26基因缺失△Bp26株基礎上，用能增強T細胞免疫活性的結核桿菌KD38基因代替△Bp26的毒力VirB12基因，構建成工程菌△Bp26-38株。通過檢測感染小鼠的脾重量、細菌分離數、檢測外周血液中的細胞因子、抗體的消減規律，結果表明△Bp26-38毒力都較親本株較弱，安全性能好，引發的細胞免疫較親本株S19高。表達並純化了BP26、KD38、VirB12蛋白。並且能用純化了BP26、VirB12蛋白做抗原，建立了鑑別感染的小鼠是工程菌株感染還是S19株感染區分開的負向方法。並且能用純化的KD38蛋白做抗原，建立了把感染的小鼠是工程均株感染還是S19株感染區分開的正向方法。 構建了VirB5基因缺失株△VirB5株，能增強T細胞免疫活性的結核桿菌esat6基因代替S19的VirB5基因得基因突變株△V5-esat6。且能用純化了VirB5蛋白做抗原，建立了感染的小鼠是工程均株感染還是S19株感染區分開的方法。同時，建立了用VirB5蛋白檢測牛群布魯氏菌病檢測方法。 綜上所述，本項目通過定向改造布魯氏菌弱毒活疫苗S19基因組的方法，用能增強T細胞免疫的外源基因，替換布魯氏菌弱毒活疫苗S19的毒力基因。同時讓它具有正、負兩個方向的分子標記功能，構建出了2株具有自主智慧財產權，安全性能好，免疫保護性強，並且用血清學方法，能區別感染的牛是野毒感染還是接種了分子標記疫苗的潛在布魯氏菌疫苗，完成了基金項目所規定的任務。