熱啟動PCR

熱啟動PCR

熱啟動PCR(hot start PCR)是指使Taq DNA 聚合酶只有在樣品溫度至少超過70℃時才發揮作用的PCR,可提高反應的特異性。Taq DNA 聚合酶通常在比適宜溫度低得多的條件下仍有較強的活性。PCR 反應的最初加熱過程中,樣品溫度上升到70℃之前,在較低的溫度下引物可能與部分單鏈模板形成非特異性結合,並在Taq DNA 聚合酶的作用下延伸。結果會導致非靶序列的擴增,影響反應的特異性。熱啟動可減少非靶序列的擴增,提高反應的特異性。在引物設計時如果某位點因為遺傳元件的定位而受限,如site-directed 突變、表達克隆或用於DNA 工程的遺傳元件的構建和操作等情況,熱啟動PCR 尤為有效。

其基本方法是: 進行反應之前,將Taq DNA 聚合酶、dNTP 和引物等先不要加人樣品管內,而是將樣品加熱,待溫度升到70℃ 以上時,再將上述試劑加入,開始PCR反應。

基本介紹

  • 中文名:熱啟動PCR
  • 外文名:hot start PCR
  • 套用學科:分子生物學
熱啟動通過抑制一種基本成分延遲DNA合成,直到PCR 儀達到變性溫度。延緩加入Taq DNA 聚合酶的手工熱啟動方法十分煩瑣,尤其是對高通量套用。其他熱啟動方法使用蠟防護層將一種基本成分(鎂離子、酶、模板、緩衝液等) 隔離開。在熱循環時,蠟熔化把各種成分釋放出來並混在一起。蠟防護層法同樣比較煩瑣,易於污染,不適用於高通量套用。

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