濃度梯度紙條擴散法藥敏試驗

濃度梯度紙條擴散法藥敏試驗又稱E-試驗，是將受試菌株接種於瓊脂平板培養基後加貼E-試驗試紙條，孵育培養後根據說明書進行判讀，並按照美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）指南進行分析。此法結合了擴散法和稀釋法的原理設計的濃度梯度藥敏試驗，可進行直接定量檢測。可用於各種常見菌、苛養菌、分枝桿菌、厭氧菌和真菌等的藥敏試驗。尤其是酵母菌和黴菌的藥敏試驗是一項新的技術，由於影響因素較多，直接藥敏試驗較為困難，E試驗法由於結果準確、穩定，受到廣泛認同。

基本介紹

• 中文名：濃度梯度紙條擴散法藥敏試驗
• 試驗步驟：菌液製備、接種、貼放試紙條
• 臨床意義：對各種耐藥表型有測量效果

試驗原理

受試菌株接種於瓊脂平版培養基後加貼E-試驗試紙條，E-試驗試紙條在瓊脂上擴散，培養過夜後可見試紙條周圍橢圓形抑菌圈，其邊緣與試紙條交點的濃度刻度值即為受試菌的最低抑菌濃度（MIC）。E-試驗試紙條是5mmX50mm的無孔試劑載體，一面為製備好的濃度呈連續梯度的抗菌藥物，另一面為讀數和刻度。抗菌藥物梯度可覆蓋20個MIC倍比稀釋濃度範圍，其斜率和濃度範圍對判別有臨床意義的MIC範圍和折點有較好的相關性。

試驗步驟

1.菌液製備
挑取已培養18~24小時的3~5個待測菌落，用無菌生理鹽水配置成0.5麥氏濁度的菌懸液。
2.菌株接種
菌液接種應在菌液製備後15分鐘內進行，用無菌棉蘸取菌液，並在試管壁上擠壓除去多餘菌液，均勻塗布整個水解酪蛋白（MH）平板（真菌選擇MH+GMB平板）。重複2次，每次旋轉平板60°，使整個平板表面均勻塗布，最後塗布平板四周邊緣部分。塗布完成後室溫乾燥3~5分鐘。
3.貼放試紙條
打開試紙條包裝，用無菌鑷或E-試驗加樣器夾取試紙條柄端，將其輕放於培養基表面，並保證紙條與培養基平面之間無氣泡。
4.孵育培養
貼好試紙條後的培養基置於35℃空氣環境下培養16~24小時。

結果分析

觀察孵育後平板上試紙條周圍的抑菌圈，抑菌圈與試紙條橫向相交處所對應的刻度即為該藥對受試菌株的MIC。當無抑菌圈時，MIC應報告為大於讀數刻度的最高值；當無交點時，MIC應報告為小於讀數刻度的最低值。結果可按照CLSI指南進行解釋。

注意事項

1.抑菌圈與試紙條交點位於上下刻度之間時，取較高刻度值。
2.出現雙層抑菌圈或抑菌圈和試紙條相交處出現散在菌落時取生長完全受抑制的抑菌圈對應刻度值。
3抑菌圈和試紙條相交處呈凹陷延伸時，應讀取凹陷起始處對應的刻度值。
4.E-試驗試紙條一旦貼放與平板不可再移動，並應保證試紙條與培養基之間沒有氣泡。

臨床意義

E-試驗對各種耐藥表型可有測量效果，且由於其具有精確的梯度、操作簡單，可用於各種常見菌、苛養菌、真菌、分枝桿菌、諾卡菌及厭氧菌的藥敏試驗。此外，E試驗的耐藥性流行病學調查有助於建立有效的經驗治療。對大量使用抗生素的選藥監測，對新抗生素的評價也有重要的指導價值。