減法雜交

減法雜交，是是通過構建差減文庫(subtractive library)得以實現的雜交方法。

基本介紹

• 中文名：減法雜交
• 外文名：差減cDNA克隆
• 別稱：差減cDNA克隆
• 原理：通過構建差減文庫得以實現的。
• 屬於：雜交技術

簡介

mRNA減法雜交（subtractive hybridization）技術又叫做差減cDNA克隆。

定義

減法雜交是用過量的參照細胞的mRNA或cDNA與目的細胞的cDNA或mRNA(又稱目的序列)雜交，形成的RNA-cDNA雜交體是兩種細胞共有的，將其扣除。剩下的cDNA或mRNA可以標記成探針(稱減法或扣除探針)，從前述的目的細胞的cDNA文庫中篩選目的克隆；還可以用來構建文庫，即減法文庫。減法文庫實質上是除去了一大批高豐度非特異性的cDNA。文庫中含有的是特異表達的cDNA克隆及其他一些低豐度的mRNA的cDNA克隆。

原理

減法雜交的本質是除去那些普遍共同存在的cDNA序列，從而使欲分離的目的基因的序列得到有效的富集，提高了分離的敏感性。減法雜交工作原理：從表達目的基因的組織（以下簡稱[+]提取mRNA所轉錄為cDNA，然後與無目的基因表達的組織（簡稱[-]）提取的mRNA做過量雜交，在[+]、[-]組織中均表達的基因產物形成cDNA/mRNA雙鏈雜交分子，而特異mRNA反轉錄的cDNA仍保持單鏈狀態，將這種單鏈cDNA分離出來即為差異表達的序列。