《核酸適體的篩選機理及快速篩選方法研究》是依託中國科學技術大學，由羅昭鋒擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：核酸適體的篩選機理及快速篩選方法研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：羅昭鋒
- 依託單位：中國科學技術大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
核酸適體（aptamer）是一類能夠與特定靶標分子相結合的單鏈DNA或RNA，是一種功能性的高分子，類似抗體。適體的廣泛套用與適體篩選技術的相對落後必將推動篩選機理和快速篩選方法的研究。.本課題將通過多種定量技術手段，重點闡述2-3個關鍵因素對篩選成功率.的影響，並建立一種快速的適體篩選方法。擬通過Nanoorange蛋白定量試劑盒研究靶標濃度對篩選效率的影響；通過FRET方法研究pool內分子間的相互作用以及不同變性方法對pool分子摺疊的影響；結合微流分離、毛細管電泳和溫度梯度洗脫技術建立高效的篩選方法。並嘗試多種其它的篩選方法，利用Q-PCR技術對成熟篩選技術各個步驟進行定量追蹤，研究pool分子分配和富集的過程，深入理解篩選機理。.對於篩選機理的深入認識才可能從根本上推動篩選技術的進步，解決適體套用的瓶頸問題。最終推動適體在各個領域的廣泛套用。
結題摘要
本研究課題聚焦於適配體（aptamer）的篩選技術（SELEX），著力探討篩選機理並致力於建立快速高效的篩選方法。通過大量的探索、各種失敗與成功實驗的分析和相互驗證，找出了篩選成敗的幾個關鍵因素。這幾個關鍵因素是：1、所採用的篩選方法分離效率的高低；2、PCR擴增及污染的控制；3、子文庫的製備質量。我們建立了基於超微量磁珠的快速篩選方法、基於表面等離子共振晶片直接洗脫的SPR-SELEX、常規的CE-SELEX和基於分段收集的FCE-SELEX技術。在此過程中，我們對複雜模板的PCR擴增也有了不同於文獻報導的新認識。這些將為今後進一步發展SELEX技術，開發更穩定和更高通量的篩選技術奠定了堅實的理論基礎，為產業化提供了必要條件。
