核酸磷酸酯酶

簡介

本鹼性磷酸酯酶標記Streptavidin(AP-labeledStreptavidin)也稱AP-Streptavidin、Streptavidin-AP或鹼性磷酸酯酶標記鏈霉親和素，為進口分裝，可以用於生物素(Biotin)標記的抗體、核酸、蛋白或其它生物素標記分子的檢測。具體用途包括Western、ELISA、免疫組化或免疫細胞化學、原位雜、Southern、Northern、EMSA等。
本AP-Streptavidin用高純度的Streptavidin和超純的鹼性而成，確保產生極低的本底和非常高的靈敏度。本產品的濃度為1mg/ml。

Streptavidin的分子量為66kD，可以高度特異性地和生物素(Biotin)結合。Streptavidin和生物素的親和常數為Kd=10-15M。Streptavidin是一個4聚體蛋白，可以同時結合4個生物素分子。Streptavidin的中文名為鏈霉親和素，從Streptomycesadidinii中純化獲得，和雞蛋清來源的Avidin(親和素)在空間結構以及與生物素的親和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是，Streptavidin是一種非糖基化蛋白，並且基本不帶電荷。Avidin的pI=～10.5，在中性pH條件下呈鹼性。由於Streptavidin和Avidin相比在中性條件下不帶電荷，因此Streptavidin的非特異性結合比Avidin低很多，這樣檢測時的非特異性背景就低很多。因此目前在生物素檢測時通常使用Streptavidin替代Avidin。
鹼性磷酸酯酶即alkalinephosphatase(AP)，可以在Western、EMSA、Southern或Northern等檢測時催化BCIP/NBT等顯色試劑顯色或催化適當的化學發光試劑產生化學發光。

本鹼性磷酸酯酶標記Streptavidin用於各種常規用途的推薦稀釋比例參考下表，實際實驗操作過程中需根據具體情況適當調節鹼性磷酸酯酶標記Streptavidin的稀釋比例。對於Western，推薦的稀釋範圍為1:2000-10000。

相關資料

為水解磷酸單酯的酶，即狹義的磷酸（酯）酶。根據條件也可將磷酸基向其它醇類轉移。此酶有特異性低可對許多磷酸單酯發生作用者，也有隻對特異的底物發生作用者，後者冠以底物的名稱以與前者區別；前者更根據其最適pH和抑制和活性等性質，而分為下列四型。Ⅰ型（鹼性磷酸（酯）酶，EC3．1．3．1）：最適pH=8.6—9.4，pH=7.5—8.5最穩定。在一定程度上Mg2+或其它二價陽離子也可使其活化，可被半胱氨酸和硫化氫等抑制。對磷酸甘油（磷酸酯酶的標準的底物）的α-異構體比β-異構體可更快的分解。在動物組織中廣泛分布，特別是在骨、腸黏膜、腎、乳腺和乳汁中更多；在血清中所見到的認為是來自於肝、小腸及骨組織。在細胞中以與表面膜結合的形式存在；在小腸黏膜上皮細胞的微絨毛膜中具有較高的濃度；腎臟中腎小管上皮細胞也不少。生理功能尚不清楚。在少數的黴菌和也可看到，但高等植物和高等菌類中不存在。Ⅱ型〔酸性磷酸（酯）酶，EC3．1．3．2〕：最適pH=5.0—5.5，pH=5.0—6.0時最穩定。不為Mg2+所活化，氟化物有顯著的抑制作用，SH化合物無影響。對磷酸甘油的特異性與Ⅰ型相同。在高等動物體廣泛分布，但存在的組織與Ⅰ型不同。在人的前列腺中很多，也分泌到精液中；另外在高等植物和菌類具有活性高的酶，在細菌（例如丙酮丁醇梭菌Clostridiumacetobutylicum）中也有此酶。Ⅲ型：最適pH=3.0—4.2，在pH=4.5—5.5時最穩定，中性條件下很不穩定。關於抑制及其它諸性質，因酶原的不同而稍有不同，Mg2+具有抑制作用，氟化物無抑制作用，半氨酸有抑制作用；特異性與Ⅰ型相同。在動物組織中也廣泛存在，肝臟及脾臟中更多。在米糠、酵母菌和黴菌中也有。Ⅳ型：最適pH=5.0—6.0。在pH=6.5—7.5條件下最穩定。Mg2+及Mn2+有顯著的活化作用。對α-磷酸甘油比β異構體可更好地分解。在紅血球、下層酵母菌、麴黴以及許多細菌中均含有此酶。磷酸單脂酶還分：（a）己糖二磷酸（酯）酶；（b）5’-核苷酸酶；（c）醯基磷酸（酯）酶（acylphosphatase）：存在於肌肉及肝臟，作用於像乙醯磷酸那樣的低級脂肪酸的酸酐型高能磷酸鍵；（d）己糖-6-磷酸（酯）酶（Hexose－6－phos－phatase），存在於肝臟；（e）磷蛋白磷酸（酯）酶（phosphoproteinphosphatase），可特異地作用於酪蛋白等磷蛋白，存在於雞胚及胃黏膜等。另外也有從磷酸化酶a特異分離磷酶的酶，參與由修飾酶蛋白的活性調節。

核酸磷酸酯酶

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