核內小核糖核蛋白

核內小核糖核蛋白的目的體外研究特異的小干擾RNA（siRNA）對肺腺癌細胞A549hnRNPB1基因表達及生長的抑制作用。

產品介紹

核糖核蛋白（heterogeneousnuclearribonulcleoprotein，hnRNP）B1在肺癌病灶中的表達的特徵。方法套用電泳法檢測30例非小細胞肺癌及癌旁組織中的表達並分析其與肺癌臨床分期的關係。結果NSCLC組織中HnRNPB1的表達陽性率（80%）顯著高於癌旁組織（40%），在四種組織類型中的表達率為50%～100%，其中鱗癌表達率較高；30例手術標本進行臨床分期後發現HnRNPB1在Ⅰ～Ⅱ期陽性率達100%，Ⅲ期下降至85．7%，Ⅳ期的陽性率最低，為50%。結論HnRNPB1的過度表達與非小細胞肺癌有密切關係。在早期肺癌尤其是鱗癌中有較高的表達。檢測肺組織中HnRNPB1表達對NSCLC尤其鱗癌的早期診斷有一定的意義。

方法設計和構建由H1啟動子驅動產生的特異的hnRNPB1siRNA表達質粒,轉染至A549細胞,螢光定量PCR法及Westernblot檢測hnRNPB1基因的表達,MTT法檢測該表達質粒轉染後對A549細胞生長的影響。結果針對hnRNPB1基因構建的重組質粒具有明顯的干擾效果,受特異hnRNPB1siRNA干擾的A549細胞hnRNPB1mRNA及蛋白表達下調,細胞生長受到抑制。結論套用RNA干擾技術可阻止hnRNPB1基因的表達,有望成為腫瘤基因治療新的研究方向。

相關資料

目的在體內實驗中觀察所構建的核內不均一核糖核蛋白B1（hnRNPB1）特異性的siRNA真核細胞表達載體對肺癌組織hnRNPB1表達的干擾作用。方法選取轉染本課題組已構建並經體外實驗證實有較好乾擾效果的兩對hnRNPB1特異性的siRNA真核細胞表達載體（重組質粒A和B）的人肺腺癌細胞株A549,將其接種於BALB/Cnu/nu裸鼠右前腋下,構建肺癌動物模型。分別套用RT-PCR和免疫組織化學的方法檢測接種40、60d時腫瘤組織中的hnRNPB1mRNA和蛋白質表達水平。結果hnRNPB1特異性的siRNA真核細胞表達載體在體內表達40d時均能較穩定而明顯地抑制腫瘤組織中hnRNPB1mRNA的表達,免疫組織化學從蛋白表達方面也予以證實,而且重組質粒A和B兩組間的表達的差異無統計學意義。但是隨著時間的延長（接種60d時）,siRNA的干擾效果會逐漸減弱,與未轉染A549細胞比較無明顯差異。結論hnRNPB1特異性的siRNA在體內可以穩定的表達,並且能特異、高效地抑制肺腺癌細胞A549hnRNPB1基因的表達,有望成為肺癌基因治療的合理策略之一。

核糖核蛋白（hnRNP）B1調節肺腺癌細胞A549抑癌基因p53表達的作用。方法採用前期研究已構建並通過體外實驗證實具有較好乾擾效果的兩對hnRNPB1特異性的小干擾RNA（siRNA）真核細胞表達載體（重組質粒A和D）轉染的人肺腺癌細胞株A549作為實驗組,對照組為轉染空質粒的A549細胞和未轉染任何質粒的A549細胞。各組細胞均用10μmol/L順鉑作用24h收集細胞。實時螢光定量RT-PCR檢測p53mRNA的表達,Westernblot檢測P53及磷酸化P53蛋白表達的變化。結果各組細胞p53mRNA和蛋白表達量無明顯差異,說明hnRNPB1特異性siRNA對A549細胞p53基因mRNA和蛋白表達無影響。轉染hnRNPB1siRNA細胞磷酸化P53蛋白表達率分別為0.87±0.06、0.75±0.06,與空質粒轉染組（0.30±0.08）和未轉染組（0.21±0.04）相比明顯增高（P〈0.01）。結論hnRNPB1siRNA可上調肺腺癌細胞A549P53活性,參與肺癌的發生髮展。