柱色譜分離

所用色譜管為內徑均勻、下端縮口的硬質玻璃管,下端用棉花或玻璃纖維塞住,管內裝有吸附劑。色譜柱的大小,吸附劑的品種和用量,以及洗脫時的流速,均按各單體中的規定。吸附劑的顆粒應儘可能保持大小均勻,以保證良好的分離效果,除另有規定外通常多採用直徑為0.07-0.15mm的顆粒。吸附劑的活性或吸附力對分離效果有影響,應予注意。

柱色譜分離
吸附劑的填裝乾法:將吸附劑一次加入色譜管,振動管壁使其均勻下沉,然後沿管壁緩緩加入開始層析時使用的流動相,或將色譜管下端出口加活塞,加入適量的流動相,旋開活塞使流動相緩緩滴出,然後自管頂緩緩加入吸附劑,使其均勻地潤濕下沉,在管內形成鬆緊適度的吸附層。操作過程中應保持有充分的流動相留在吸附層的上面。濕法:將吸附劑與流動相混合,攪拌以除去空氣泡,徐徐傾入色譜管中,然後再加入流動相,將附著於管壁的吸附劑洗下,使色譜柱表面平整。俟填裝吸附劑所用流動相從色譜柱自然流下,液面將柱表面相平時,即加試樣溶液。
試樣的加入除另有規定外,將試樣溶於層析時使用的流動相中,再沿色譜管壁緩緩加入。注意勿使吸附劑翻起。或將試樣溶於適當的溶劑中。與少量吸附劑混勻,再使溶劑揮發去盡後使呈鬆散狀;將混有試樣的吸附劑加在已製備好的色譜柱上面。如試樣在常用溶劑中不溶解,可將試樣與適量的吸附劑在乳缽中研磨混勻後加入。
洗脫除另有規定外,通常按流動相洗脫能力大小,遞增變換流動相的品種和比例,分別分部收集流出液,至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時,再改變流動相的品種和比例。操作過程中應保持有充分的流動相留在吸附層的上面。

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