染色鏡檢

革蘭氏染色鏡檢法是1884年由丹麥病理學家C.Gtam所創立的，此方法可將所有的細菌分G+和G-兩大類，G-菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質，而且肽聚糖層較薄，交聯度低，故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質，增加了細胞壁的通透性，使初染的結晶紫和碘的複合物易於滲出，結果細菌就被脫色，再經蕃紅復染後就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯度高，類脂質含量少，經脫色劑處理後反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細菌仍保留初染性的顏色。

基本介紹

• 中文名：染色鏡檢
• 外文名：Dyeing microscopy
• 拼音：rǎn sè jìng jiǎn
• 器材：載玻片、接種環等
• 目的：將細菌分為G+和G-兩類
• 注意：脫色時間

實驗器材

載玻片、接種環、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡。

實驗步驟

（1）取乾淨的載玻片，用記號筆在其一面做好正反面標記，再在載玻片另一面中央滴上一小滴蒸餾水。

（2）將接種環在火焰上滅菌，待冷卻後，在酒精燈旁從標記的單個小菌落中取少許細菌置於蒸餾水中混勻（同時蓋好平板倒扣置於一旁），用接種環塗成直徑約1.5cm的菌膜，再在酒精燈火焰上方以鐘擺速度通過固定好細菌，待冷卻進行染色。

（3）先滴加草酸結晶紫溶液染色1~2min，再水洗；然後滴加革蘭氏碘液溶液染色1~2min，再水洗；隨後滴加95%的酒精脫色30~60s，再水洗；最後滴加稀釋的品紅進行復染30~60s，再水洗；待乾燥或吸水紙吸乾後鏡檢。

（4）將乾燥的載玻片放在1000倍油鏡下，滴加一滴松柏油進行鏡檢，觀察其形態特徵，判斷細菌的種屬。

注意事項

標本塗片不能太厚，若塗片較厚，應延長脫色時間，直至不在出現紫色為止。染色過程中勿使染色液乾涸。用水沖洗後，應吸去玻片上的殘水。革蘭氏染色成敗的關鍵是脫色時間。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受塗片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響。