《旋毛蟲侵入宿主腸上皮細胞相關因子的篩選與鑑定》是依託鄭州大學，由崔晶擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：旋毛蟲侵入宿主腸上皮細胞相關因子的篩選與鑑定
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：崔晶
- 依託單位：鄭州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
旋毛蟲病是一種嚴重的食源性寄生蟲病，也是屠宰動物首檢和強制性檢疫的人獸共患病。旋毛蟲幼蟲侵入小腸黏膜繼續發育或是從腸道排出是能否建立感染的關鍵。由於幼蟲口孔無齒狀和矛狀結構，幼蟲侵入腸上皮細胞很可能不是簡單的機械性損傷，目前對幼蟲附著與侵入腸上皮細胞的機制尚不清楚。該課題擬套用蛋白質組學與免疫組學從旋毛蟲幼蟲分泌蛋白與表面蛋白中篩選幾種典型的功能蛋白，進行質譜分析、分子克隆、體外表達及純化，製備重組蛋白與抗重組蛋白抗體，通過旋毛蟲幼蟲-腸上皮細胞模型及動物實驗，篩選出對幼蟲侵入腸上皮細胞有明顯促進作用的蛋白即為旋毛蟲侵入相關因子；套用生化、RNA干擾及免疫組化技術對旋毛蟲侵入相關因子的蛋白性質、酶活性、基因功能及部位進行鑑定。該項目為闡明旋毛蟲侵入腸黏膜的分子機制、尋找旋毛蟲病疫苗的高保護性抗原、研究抗旋毛蟲新藥及殺蟲機制等奠定基礎。
結題摘要
本項目將旋毛蟲感染性幼蟲與大鼠、小鼠腸上皮細胞進行培養，在光鏡、螢光顯微鏡下觀察了幼蟲對腸上皮細胞的侵入以及在細胞單層中移行與發育情況，成功建立旋毛蟲幼蟲-腸上皮細胞體外侵入模型。套用SDS-PAGE及Western blotting對旋毛蟲肌幼蟲經膽汁激活或與腸上皮細胞孵育後幼蟲與細胞蛋白的變化進行了分析；套用實時定量PCR對旋毛蟲肌幼蟲經膽汁激活及與細胞孵育後增加的10個蛋白基因mRNA轉錄水平進行了觀察；套用2-DE、MALDI-TOF/TOF-MS及shotgun LC-MS/MS對旋毛蟲幼蟲ES蛋白、幼蟲與腸上皮細胞培養後增加的蟲體蛋白及細胞中的旋毛蟲蛋白進行了鑑定與分析。結果表明，在膽汁或細胞刺激下旋毛蟲幼蟲表達與合成了一些新蛋白（如絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、腺苷脫氨酶、5’-核苷酸酶以及烯醇酶等），其中具有水解酶與轉移酶活性的一些蛋白酶可進入腸上皮細胞內；這些蛋白酶可能是旋毛蟲侵入腸上皮細胞的相關因子。對編碼旋毛蟲絲氨酸蛋白酶基因TspSP進行了克隆、表達及鑑定，體外與動物實驗證實，抗旋毛蟲重組TspSP蛋白抗體對旋毛蟲幼蟲的侵入、移行及發育均有明顯的阻斷與抑制作用，表明絲氨酸蛋白酶是旋毛蟲幼蟲的侵入相關因子。免疫複合物在幼蟲頭端形成的帽樣結構可能是阻止幼蟲侵入腸上皮細胞的主要機制。
