新的胃癌MDR相關分子編碼基因的克隆鑑定及功能研究

《新的胃癌MDR相關分子編碼基因的克隆鑑定及功能研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由丁傑擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：新的胃癌MDR相關分子編碼基因的克隆鑑定及功能研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：丁傑
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

多藥耐藥（MDR）是胃癌化療失敗的主要原因，MDR的逆轉有賴於發現參與MDR的關鍵分子並闡明其耐藥機理。目前雖然已經發現一些MDR相關分子，但仍不能完全解釋胃癌MDR現象。前期工作中，我們通過噬菌體肽庫篩選得到能夠特異結合於胃癌耐藥細胞的短肽GMBP1（正在申請專利），其結合受體在MDR細胞高表達提示它可能與胃癌MDR密切相關。本研究擬利用蛋白電泳、免疫酶印跡等方法初步鑑定GMBP1結合受體的理化性質及免疫學特性；以GMBP1為探針篩選胃癌耐藥細胞cDNA表達文庫，克隆、鑑定其結合受體的編碼基因；通過生物信息學分析、siRNA技術、藥物敏感實驗、動物實驗等方法，進一步驗證它在胃癌MDR中的功能；採用基因晶片、EMSA、報告基因及CHIP等技術，尋找與其相互作用的分子及其信號通路，闡明其參與MDR的分子機制。本課題的開展有可能發現參與胃癌MDR的新分子，為耐藥性胃癌的分子靶向治療提供新靶標。

結題摘要

多藥耐藥(MDR)是導致胃癌患者化療失敗的主要原因，其分子機制仍不清楚。前期我們通過噬菌體肽庫結合MTT實驗篩選得到能夠特異結合於胃癌耐藥細胞的短肽GMBP1，ETAPLSTMLSPY，本課題擬試圖闡明該短肽在胃癌MDR中的功能、鑑定短肽結合受體的編碼基因、尋找與其相互作用的分子及其信號通路，進而發現參與胃癌 MDR 的新分子為耐藥性胃癌的分子靶向治療提供新靶標。研究證實GMBP1特異性結合的受體分子亞細胞定位於耐藥細胞胞漿及胞膜；MTT、藥物敏感實驗及流式等分子生物學實驗發現GMBP1本身對胃癌細胞生長不發生影響，但其能夠逆轉胃癌多藥耐藥增加胃癌耐藥細胞對化療藥物的敏感性，且western blot結果顯示，GMBP1能降低胃癌耐藥細胞耐藥相關分子p-gp及凋亡相關分子Bcl-2/Bax的改變；為研究短肽在逆轉胃癌耐藥中所發揮的作用，我們通過western blot、蛋白組學及質譜測序等方法初步獲得了GMBP1特異性結合的受體為分子量為78KD的葡萄糖調節蛋白GRP78；為驗證受體GRP78是否為短肽特異性結合的靶分子，我們採用雷射共聚焦及western blot 分析發現，GRP78與GMBP1在耐藥細胞的亞細胞定位及其蛋白表達水平一致且GRP78在胃癌耐藥細胞系高表達。採用免疫共沉澱方法孵育獲得GMBP1在耐藥細胞系特異結合蛋白，並用siRNA技術下調GRP78表達，經western blot分析顯示GRP78與GMBP1能互相識別對方受體，證實GMBP1特異性結合的受體為葡萄糖調節蛋白GRP78，western blot及siRNA等實驗初步表明GMBP1-GRP78複合物能通過調節耐藥相關分子P-gp發揮逆轉胃癌耐藥的功能。這一發現為我們研究胃癌多藥耐藥相關分子及機制等工作奠定了基礎。