新城疫病毒末端序列與毒力相關性研究

《新城疫病毒末端序列與毒力相關性研究》是依託吉林大學，由丁壯擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：新城疫病毒末端序列與毒力相關性研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：丁壯
• 依託單位：吉林大學

項目摘要

新城疫是危害世界養禽業最嚴重的動物傳染病之一，OIE已將其列為必報名錄中的重要動物疫病。深入研究不同禽源新城疫病毒株的毒力差異與致病分子機制以及新型活疫苗創製已成為亟待解決的重大科學問題。鑒於目前國內外對新城疫病毒基因組非編碼區尤其是末端序列功能的研究甚少以及末端序列結構與功能的關係，本項目擬利用反向遺傳操作技術構建不同禽源株、不同毒力新城疫毒株的全長cDNA感染性克隆，分別進行同源/異源末端序列的替換以及外源基因的插入，再進行重組病毒株的拯救和相關生物學特性鑑定。通過本項目的研究，不僅將闡明末端序列對新城疫病毒毒力的影響，同時將明確同源/異源新城疫病毒末端序列對同源/異源毒株的複製、調控轉錄、遺傳穩定性的影響以及對內源/外源蛋白表達的調控作用，評估各株重組病毒作為疫苗候選種毒的潛力。對於研究新城疫病毒不同禽源株毒力差異及致病分子機制、篩選新型弱毒疫苗候選株以及防控新城疫具有重要科學意義。

結題摘要

本研究為闡明新城疫病毒末端序列與毒力的相關性，將鵝源NA-1株3’/5’末端非編碼區單獨和同時替換為La Sota株3’/5’末端，構建了3株全長cDNA感染性克隆，並成功拯救出有感染活性的病毒粒子（分別命名為rNA-L、rNA-T及rNA-LT株）。體外試驗及生長動力學曲線表明，3株突變病毒中rNA-L的複製能力與親本野毒株NA-1相似，而rNA-T和rNA-LT複製能力有輕微減弱；生物學特性分析結果顯示3株獲救突變病毒遺傳穩定性良好。3’/5’末端序列同時替換和5’末端單獨替換的毒株，較野毒株致病性稍有減弱但沒有完全致弱為同La Sota一樣的緩髮型毒株，而3’末端單獨替換毒株的致病性與NA-1相似。在此基礎上，為進一步探究和開發更加有效的新型疫苗，通過將NA-1株的F蛋白裂解位點胺基酸序列替換為La Sota株F蛋白裂解位點相應序列成功拯救出突變致弱株rmNA-1。rmNA-1致病力顯著降低，但依然保持親本株相似的生長特性並具有良好遺傳穩定性，表明rmNA-1具有作為基因Ⅶ型NDV弱毒疫苗侯選株及候選疫苗載體的潛力。以rmNA-1為載體，構建了表達GPV VP3蛋白重組新城疫病毒rmNA-VP3，VP3基因在NDV基因組中可穩定遺傳，F裂解位點修飾鹼基也保持穩定不變，以重組病毒rmNA-VP3免疫雛鵝可同時誘導堅實的GPV和NDV中和抗體，為今後外源基因的表達、活病毒載體疫苗、分子標記疫苗以及新型活疫苗的創製奠定了基礎。