《新城疫病毒I 系苗(Mukteswar)的進化及其毒力增強的分子機制》是依託揚州大學，由劉曉文擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：新城疫病毒I 系苗(Mukteswar)的進化及其毒力增強的分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉曉文
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
前期研究中獲得了I系苗Mukteswar的毒力增強毒株JS/7/05/Ch，但其毒力增強的原因目前還尚不清楚。為了研究I系苗毒力增強的分子機制，本項目將對I系苗及其強毒株的全基因組序列和致病性進行分析，系統研究它們各基因的遺傳變異、結構蛋白胺基酸的位點差異以及致病性差異。同時以I系苗經雞體內反覆傳代，測定不同代次毒株的生物學特性及基因組序列，研究雞體內I系苗基因進化與毒力變異之間的關係。利用反向遺傳技術構建Mukteswar全基因組cDNA感染性克隆，將強毒株JS/7/05/Ch變異基因分別或同時替換到Mukteswar全長基因組中，並進行突變株的拯救，通過突變株的細胞感染試驗和動物致病試驗，分析引起I系苗毒力變化的關鍵基因及胺基酸位點，最終確定決定I系苗毒株毒力增強的基因和胺基酸位點，進而明確I系苗毒力增強的分子機制。
結題摘要
通過評估兩株不同毒力的基因III型NDV JS/7/05/Ch株和Mukteswar株在感染4周齡SPF雞後的脾臟、法氏囊、胸腺和肺臟中病毒的複製能力，以及免疫相關細胞因子的表達情況表明，與Mukteswar相比，JS/7/05/Ch在機體內的高效複製及其誘導的促炎性細胞因子早期的大量表達，是造成機體嚴重損傷的主要原因。 通過反向遺傳操作成功拯救出了四株NDV。MDT和IVPI測定結果顯示拯救的病毒與原始母本病毒相似，但表達JS-7122株HN蛋白病毒的IVPI值要明顯高於表達Muk-4株HN蛋白的毒株，結果表明HN基因是Mukteswar株毒力增強的主要分子基礎。 基因 Ⅲ 型NDV臨床分離株JS/7/05/Ch為典型的強毒，但其基因組卻與Ⅰ系苗Mukteswar株具有99%以上的相似性，據此分析該強毒應該由Ⅰ系苗Mukteswar株進化而來。對得到的四株空斑純化株進行IVPI值的測定。結果顯示JS-7122和JS-1217的IVPI值分別是2.2和2.15，而Muk-4和Muk-5的IVPI值分別為0.03和0.09。為了探索影響Mukteswar株NDV毒力增強的關鍵性基因，我們對JS-7122和Muk-4進行全基因組測序並對所測序列進行比對分析，結果顯示兩株病毒的差異位點主要集中在NP、HN和L基因上，P、M和F基因則完全一致。NP基因有3個核苷酸的差異，其中第1433nt變異引起胺基酸位點的變化；HN基因有6個核苷酸位點的差異並均引起胺基酸的變化；L基因有5個核苷酸位點的差異，但均未引起胺基酸的突變。通過三維結構模擬可以發現HN蛋白的4個差異位點均在HN蛋白的表面，並且494和495位的胺基酸正處於HN蛋白的抗原表位site12內，我們推測該基因很可能是導致這兩株 Ⅲ 型NDV毒力差異主要因素。
