《抗NRP-1b1/b2單克隆抗體抗腫瘤活性與機理研究》是依託廈門大學，由顏江華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：抗NRP-1b1/b2單克隆抗體抗腫瘤活性與機理研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：顏江華
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
NRP-1是一個多功能受體，在腫瘤新生血管形成與腫瘤細胞遷移黏附侵襲等方面起非常重要調控作用，是一個很有希望的新靶標。本項目旨在發展靶向NRP-1的抗體藥物，擬在前期已獲得一組抗人源NRP-1b1/b2單克隆抗體基礎上，篩選可以選擇性阻斷VEGF165結合NRP-1的功能性抗體，分析該抗體與NRP-1結合的位點，檢測其對血管內皮細胞和腫瘤生物學行為的影響，分析抗體對NRP-1相關信號通路調控的分子機制，觀察其對腫瘤動物模型的治療作用，探討其抗腫瘤機理。本研究結果將進一步豐富有關NRP-1抗原表位組學和抗體藥物組學的理論知識，為新靶標NRP-1的抗體藥物發展提供新思路。
結題摘要
NRP-1是一個多功能受體，在腫瘤新生血管形成與腫瘤細胞遷移、黏附和侵襲等方面起非常重要調控作用，是一個很有希望的腫瘤治療新靶標。本項目研究靶向NRP-1b1b2結構域的功能性抗體及其抗腫瘤作用的分子機制。RT-PCR從胃癌BGC-823細胞株中獲取NRP-1b1b2基因， NRP-1b1b2-pET22b(+)重組載體表達於E.coli Rosetta細胞，純化的NRP-1b1b2融合蛋白作為免疫原。細胞融合技術建立抗NRP-1b1b2單克隆抗體雜交瘤庫，ELISA篩選獲取一株能選擇性阻斷VEGF165結合NRP-1的功能性抗體（A6），ELISA、Western blot、co-IP和IHC結果顯示A6可特異、高親和力地結合rhuNRP-1b1b2；同時，也能捕獲野生型NRP-1，並可用於腫瘤組織細胞NRP-1的定位與定量檢測。競爭ELISA和Dot-ELISA分析顯示NRP-1b1b2肽段不能抑制A6與NRP-1b1b2蛋白結合，提示A6結合位點不是NRP-1b1b2抗原的線性表位，而是構象表位。 大鼠角膜新生血管模型實驗顯示A6對新生血管的生成具有抑制作用，並呈量效和時效關係。抗腫瘤活性實驗證明A6對膠質瘤U87、胃癌BGC-823、乳腺癌MCF-7和結腸癌SW480細胞株的生長、遷移、侵襲均有顯著抑制作用；動物人移植瘤模型治療實驗顯示A6能抑制膠質瘤和胃癌裸鼠移植瘤的生長。生長抑制與凋亡實驗證明A6可誘導SW480細胞凋亡、阻滯細胞周期於S期。Western blot揭示A6處理後SW480細胞的Bax、caspase-3蛋白表達上調，Bcl-2、PI3K(85)、p-Akt表達下調。結果表明A6對SW480的生長抑制與凋亡作用與下調PI3K/Akt信號通路相關。細胞粘附實驗證明A6對MCF-7的粘附有顯著抑制作用，共聚焦螢光顯微鏡觀察和Western blot發現A6抗體能抑制粘附的MCF-7細胞應力纖維的重排、抑制NRP-1與整合素α5β1形成複合物、下調FAK、p130cas和Erk1/2的磷酸化水平。實驗結果表明A6對MCF7粘附的抑制與其阻斷α5β1-NRP-1/FAK/p130cas的信號通路有關。 本項目研究結果闡明了靶向NRP-1b1b2抗體的抗腫瘤活性與分子機制，也為新靶標NRP-1的抗體藥物發展提供了新思路。
