《干預免疫識別抑制大鼠肝移植排斥反應的實驗研究》是依託天津醫科大學，由劉剛擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：干預免疫識別抑制大鼠肝移植排斥反應的實驗研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉剛
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
如何兼顧抑制移植排斥反應和保護受體免疫功能是器官移植面臨的重大問題。受體針對移植物的免疫識別是排斥反應的始動因素，有效干預免疫識別將有助於更好控制排斥反應。項目組前期研究確定了CⅡTA和MyD88作為免疫識別的關鍵基因，並初步驗證了通過干預免疫識別減輕排斥反應研究思路的可行性；納米載體具有轉染效率高和生物安全性的優勢，且在體內轉染中有肝臟富集的特性，項目組已構建針對靶基因的載shRNA納米陽離子高分子脂質體。據以上基礎，本項目針對排斥反應最初免疫識別階段，採用納米載體介導的RNA干擾技術，通過基因轉染沉默移植物CⅡTA 和MyD88基因表達，獲得持久、高效、穩定的干預免疫識別效果，建立高應答大鼠同種異體原位肝移植模型，不干預受體，觀察對排斥反應的抑制作用。通過本研究可望獲得更理想的排斥反應抑制效果，改變當前以犧牲受體免疫功能為代價的免疫抑制治療，為臨床提供新的研究方向和治療方案。
結題摘要
本項目按預期進度順利進行，取得了相應的研究結果，現匯報總結如下： 體外實驗部分：項目組確定了CⅡTA和MyD88作為免疫識別的關鍵基因，並通過納米陽離子高分子脂質體載體介導的RNA干擾技術及基因轉染技術顯著沉默大鼠骨髓源樹突狀細胞（DC）的CⅡTA和MyD88基因表達，獲得持久、高效、穩定的干預效果，為後續體內實驗提供了依據。 體內實驗部分：通過納米陽離子高分子脂質體介導的RNA干擾技術，經門靜脈注射方法體內轉染大鼠肝臟，通過RT-PCR及蛋白印跡等分子生物學手段檢測轉染後大鼠肝臟CⅡTA和MyD88基因的表達水平。研究結果顯示實驗組CⅡTA和MyD88基因的表達水平顯著下降，表明靶向陽離子高分子脂質體載體經門靜脈注射方法體內轉染大鼠肝臟，可顯著抑制目標基因的表達，本部分實驗為後續動物模型實驗奠定了基礎。 動物模型部分：構建高應答大鼠同種異體原位肝移植模型，採用經門靜脈注射的方法干預供體大鼠肝臟，干預後3天取肝臟進行肝移植，通過分子生物學方法檢測移植後相關細胞因子水平，並檢測移植後大鼠肝功能、排斥反應病理分級及大鼠存活時間。實驗結果顯示，大鼠血液CD4/CD8比例以及細胞因子IL-2和IFN-γ水平均顯著降低，ALT、AST和TBIL也顯著降低，排斥反應病理分級明顯減低，大鼠存活時間明顯延長。研究結果表明高應答大鼠同種異體原位肝移植模型是研究肝移植排斥反應的理想動物模型，依此方法干預供體移植物，降低了供體肝臟的免疫原性和移植物本身固有免疫能力，進而減輕了移植肝臟的排斥反應，延長了受體大鼠的生存期，為移植排斥研究和臨床治療提供了新思路。
