差示式聚合酶鏈反應是利用組織細胞間基因表達的差異並結合聚合酶鏈反應技術來篩選和克隆新基因的方法。即先主觀設定一對引物(稱武斷引物)，提取兩種或多種待比較細胞的mRNA，用3′端武斷引物逆轉錄成cDNA，再PCR擴增，產物用凝膠電泳顯示，逐一比較來自各細胞PCR的條帶差異，回收差異條帶，進行兩次PCR，再通過雜交等方法來確認差異表達基因。
差示式聚合酶鏈反應是利用組織細胞間基因表達的差異並結合聚合酶鏈反應技術來篩選和克隆新基因的方法。即先主觀設定一對引物(稱武斷引物)，提取兩種或多種待比較細胞的mRNA，用3′端武斷引物逆轉錄成cDNA，再PCR擴增，產物...
差示聚合酶鏈反應是2008年公布的生物化學與分子生物學名詞。定義 利用組織細胞間基因表達的差異並結合聚合酶鏈反應技術來篩選和克隆新基因的方法。即先主觀設定一對引物(稱武斷引物)，提取兩種或多種待比較細胞的mRNA，用3′端武斷引物逆轉錄成cDNA，再PCR擴增，產物用凝膠電泳顯示，逐一比較來自各細胞PCR的條帶差異...
DNA的變性和復性原理，現已在醫學和生命科學上得到廣泛的套用。如核酸雜交與探針技術，聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）技術等。3.分子雜交：（hybridization）不同來源的核酸變性後，合併在一處進行復性，這時，只要這些核酸分子的核苷酸序列含有可以形成鹼基互補配對的片段，復性也會發生於不同來源的核酸...
馬路等用巢式聚合酶鏈反應（NPCR）檢測活組織中結核分支桿菌DNA，該法用內引物和第二次放大時循環次數少，結果減少背景帶增加了特異性。最後產物以內引物特異性為基礎放大，克服了污染。110例標本中陽性率達76%，明顯高於組織病理學的13%、刷檢塗片的19%、術後痰檢的22%和培養的15%。43例確診為肺癌者，NPCR無...
基於聚合酶鏈式反應（PCR）的分子指示劑 聚合酶鏈式反應（PCR）是一種分子生物學技術，用於擴增特定的DNA片段，傳統的分子生物學方法是在該技術的基礎上建立和發展起來的，給隨後的科研帶來的革命性的突破。該技術憑藉著強大的生命力被廣泛的運用到了生物學以及醫學方面的分子生物學領域的研究。PCR技術實現了對基因組...
T4 RNA 連線酶 ３.１３ DNA 片段的亞克隆 3.13.1 基本方案 DNA 片段的亞克隆 3.13.2 備擇方案 凝膠塊中DNA 片段的連線 ３.１４ 聚合酶鏈反應構建重組DNA 基本方案 DNA 片段亞克隆 ３.１５ 非同位素探針的標記和比色檢測 3.15.1 基本方案1 用切口平移法製備生物素醯化的探針 3.15....
二、聚合酶鏈反應 三、基因組DNA文庫 四、cDNA又庫 第三節 目的基因序列測定 一、目的基因序列測定的意義 二、目的基因測序方法 三、長鏈DNA測序的策略 第四章 重組載體的構建與篩選 第一節 克隆載體的基本結構和功能 一、基本結構 二、功能 三、克隆載體的種類 四、表達載體的種類 第二節 重組載體的構建 一...
②分子生物學檢查：根據恙蟲病立克次體編碼其分子量為56×103的主要表膜蛋白抗原的基因核苷酸序列，有人設計了各血清型間共同和不同的引物，用套式聚合酶鏈反應(nested polymerase chain reaction，nested-PCR)檢測Gilliam，Karp，kato，kawasaki和kuroki五個血清型的相應基因，具敏感度高，特異性強的特點，認為可用於...
Dahan等人通過限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應（PCR-RFLP）技術以及CEQ的分型研究了與用於治療結腸直腸癌的西妥昔單抗藥效相關的潛在基因EGFR、EGF、CCND1、FCGR2A和FCGR3A的多態性，研究發現FCGR3A F158V以及CCND1 A870G的多態性對預測藥效、總生存數具有獨立重大的意義。Drew等人利用GeXP多重基因表達分析系統、微...
3.13.3 核糖核酸酶T1 3.14 DNA連線酶 3.14.1 T4噬菌體DNA連線酶 3.14.2 大腸桿菌DNA連線酶 3.15 RNA連線酶 3.16 DNA片段的亞克隆 3.16.1 基本方案 3.16.2 備擇方案凝膠塊中DNA片段的連線 3.17 聚合酶鏈式反應構建重組DNA 基本方案DNA片段亞克隆 3.18 非同位素探針的標記和比色檢測 3....
聚合酶鏈反應 21世紀，基因分析和基因工程技術有了革命性的突破，這主要歸功於聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction,PCR）的發展和套用。套用PCR技術可以使特定的基因或DNA片段在短短的2－3小時內體外擴增數十萬至百萬倍。擴增的片段可以直接通過電泳觀察，也可用於進一步的分析。這樣，少量的單拷貝基因不需通過...
②聚合酶鏈式反應寡核苷酸探針雜交方法PCR-SSO(sequence specifie oligonucleotide，SSO)。原理是PCR基因片段擴增後利用序列特異性寡核苷酸探針，通過雜交的方法進行擴增片段的分析鑑定。③聚合酶鏈式反應單鏈構象多態性分析(PCR- single strand conformational polymorphism，PCR-SSCP)。PCR產物經變性為DNA單鏈，用聚丙烯醯胺...
聚合酶鏈反應－單鏈構象多態性分析 濟南軍區軍事醫學研究所靳曉紅等利用該技術對分枝桿菌進行菌株鑑定，並用PCR直接測序法分析結核桿菌Kat G基因突變。認為該方法對結核分枝桿菌複合群及非結核分枝桿菌的鑑別，比細菌學方法快速，與細胞學方法有良好的一致性。優點為能快速對結核分枝桿菌和非結核分枝桿菌進行鑑別。PCR－...
生物學與食品安全，PCR（PolymeraseChainReaction）技術即聚合酶 鏈式反應，也稱無細胞克隆系統，是1985年誕生的一項DNA體外擴增技術，該技術自問世以來，就以驚人的速度廣泛地套用於生命科學的眾多領域。PCR技術 PCR（PolymeraseChainReaction）技術即聚合酶 鏈式反應，也稱無細胞克隆系統，是1985年誕生的一項DNA體外擴增技術...
由於HCV核心抗體出現較早，因此，最近美國第二代酶聯免疫試驗法（ELISA）檢測抗HCV。該試劑盒採用HCVC區編碼蛋白C-22-3和非結構區NS3編碼蛋白C-33-3和C-100-3包被載體。用本法檢測抗HCV，其檢出率可提高25～30%，且檢出抗HDV的時間也可提早16～42天。HCV cDNA/聚合酶鏈反應 （HCV cDNA/Polymerase Chain ...
企業應對每項精密度指標的評價標準做出合理要求，如標準差或變異係數的範圍等。針對本類產品的精密度評價主要包括以下要求：5.1對可能影響檢測精密度的主要變數進行驗證，除申報試劑（包括提取組分和聚合酶鏈反應組分）本身的影響外，還應對PCR分析儀、操作者、地點等要素進行相關的驗證。5.2合理的精密度評價周期，例如...
近來使用聚合酶鏈反應（PCR）結合高效液相層析（high performance liquid chromatography HPLC）檢測雜合子型。通過免疫測定分析因子Ⅸ蛋白遺傳表型的外顯多型性也已用於測定攜帶狀態。以上技術的統一標準化，將能更精確地診斷攜帶者並使遺傳諮詢更為可靠。遺傳特點，血友病乙遺傳特點與血友病甲相同，血友病乙患者的所有...
第八章 聚合酶鏈反應 第一節 PCR的基本原理和影響因素 一、PCR的基本原理 二、PCR引物的設計原則 三、典型PCR的反應步驟 四、PCR反應條件 五、PCR注意事項 第二節 PCR擴展技術 一、反轉錄PCR 二、mRNA差示PCR 三、免疫PCR 四、重組PCR 五、原位PCR 六、固著PCR 七、不對稱PCR 第三節 PCR的套用 一、...
在腫瘤病理方面圖像分析主要套用於核形態參數的測定（區別癌前病變和癌；區別腫瘤的良惡性；腫瘤的組織病理分級及判斷預後等），DNA倍體的測定，顯色反應（如免疫組織化學）的定量等方面。5.分子生物學技術 十餘年來分子生物學腫瘤研究領域引起了一場革命。重組DNA技術、核酸分子雜交技術、聚合酶鏈反應（polymerase ...
體外基因擴增技術聚合酶鏈式反應 隨著腫瘤分子遺傳學的研究，體外基因擴增技術聚合酶鏈式反應(PCR)的發展與套用，為腫瘤基因診斷提供了可能，已開展的有以聚合酶鏈式反應——限止片段長度多態分析(PCR—RFLP)方法，可檢測到單分子DNA 或每10 萬個細胞中僅含1 個靶DNA 分子的樣品。 (1)測定大腸腫瘤及腫瘤旁組織ki-...
但是，當探針與目標DNA結合時，它被DNA聚合酶切割，釋放出螢光分子，導致螢光信號的增強。這個螢光信號的強度與PCR反應中的目標DNA數量成正比。將標記有螢光素的Taqman探針與模板DNA混合後，完成高溫變性，低溫復性，適溫延伸的熱循環，並遵守聚合酶鏈反應規律，與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷，螢光素游離於反應...
PCR的中文名為聚合酶鏈式反應，簡單的說，PCR擴增這一步就是把我們所需要的片段通過酶促反應，在PCR儀上進行大量複製，放大到通過某些專用儀器可以看到的程度。第三步：後PCR反應 這一步主要是上ABI測序儀檢測的準備階段，將雙鏈的DNA打開，加一些檢測用的的內標，主要是用來標記檢測的片段長度。第四步：毛細管測序...
最早是用Southern Blot/RFLP方法檢測，後來採用聚合酶鏈反應（PCR）與限制酶酶切相結合的方法。現在多採用PCR-RFLP法進行研究基因的限制性片段長度多態性。2．單鏈構象多態性（SSCP）：是一種基於單鏈DNA構象差別的點突變檢測方法。相同長度的單鏈DNA如果順序不同，甚至單個鹼基不同，就會形成不同的構象。在電泳時泳...
cDNA-AFLP（cDNA-amplified fragment length polymorphism）是一種結合了RT-PCR（反轉錄聚合酶鏈反應）和AFLP（擴增片段長度多態性）技術的分子生物學實驗方法。cDNA-AFLP技術結合了RT-PCR和AFLP技術，其基本原理：以純化的mRNA為模板，反轉錄合成cDNA。用識別序列分別為6-bp和4-bp的兩種限制性內切酶酶切雙鏈...
用全自動血紅蛋白分析儀及其配套試劑對 5738 例受檢樣本進行血紅蛋白分析， 對篩查出的830 例異常結果的樣本採用多重聚合酶鏈反應（PCR）和反向斑點雜交法（RDB）進行地貧基因檢測，比較其符合率。 結果發現5738 例受檢者中，共篩查出 830 例異常，檢出率為 14.46%；其中，擬診 α 地貧 480 例，占 57.83%；...
三．分子生物學診斷方法如聚合酶鏈反應（PCR）：研究結果顯示 : 痰液 PCR +探針檢測可獲得比塗片鏡檢明顯高的陽性率和略高於培養的陽性率 , 且省時快速 , 成為結核病病原學診斷重要參考 , 但臨床套用中也存在少數假陽性和假陰性一些技術問題。四．血清抗結核抗體檢查：已成為結核病快速輔助診斷手段 , 但臨床...
（2013 版）推薦，目前針對 ALK 融合基因檢測常用的方法主要有 3 種：螢光原位雜交（FISH）、基於聚合酶鏈反應（PCR）擴增基礎上的技術和針對融合蛋白表達的免疫組織化學法（IHC）。應根據目 前 ALK 融合基因檢測各種方法的優缺點、臨床樣本的特點和實驗室的條件，按合理的檢測流程，選擇合適的檢測方法。在選擇使用...
免疫診斷技術如免疫螢光技術、免疫酶技術和單克隆抗體技術在寄生蟲病的診斷和流行病學調查中已經比較普遍的套用。核算探針和聚合酶鏈反應技術亦已套用於一些原蟲病的病原診斷及其分類鑑定。寄生蟲生理和生物化學的研究成果，使抗寄生蟲藥的研製擺脫了過去那種“撞運氣”的篩選方式，科學家們可以從如何阻斷寄生蟲營養代謝...
有研究顯示HLA-G多態性在高加索人群和美國黑人間的分布差異有顯著性,在美國黑人女性群體中的雜合度可達67%,其中大多數多態性出現於編碼α2結構域的序列中[4].有人藉助逆轉錄-聚合酶鏈式反應分析HLA-GmRNA多態性,發現在高加索和非洲加勒比海人群中,其多態性遠低於上述報導,其原因可能是前者的引物選在外顯子區,而...
《基因工程原理（第二版）》除緒論外，共分9章：基因工程的分子遺傳學基礎，原核生物分子克隆的宿主和載體系統，基因文庫的構建和篩選，基因組DNA的分析，聚合酶鏈反應與連線酶反應，培養細胞中克隆基因的表達，轉基因動植物，人類基因鑑定和基因診斷，基因治療。在每章後都配有習題，供讀者練習，並在書後附有索引...
