定位型克隆

定位型克隆是根據目的基因在染色體上的位置進行基因分離,即通過分析突變位點與已知分子標記的連鎖關係確定突變基因在染色體上的位置。①通過家系連鎖分析資料或染色體微小缺失(雜合性丟失,LOH)等數據,確定基因在染色體上的位置;②通過染色體步移、染色體區帶顯微切割等技術,獲得基因所在區段的DNA片段疊連群(contig),繪製出更精細的染色體圖譜;③確定含有候選基因的染色體片段。

基因組定位提供的信息包含一定的分子標記,可用PCR或雜交的方法直接從YAC庫,或從BAC庫、PAC庫中篩選相對應的克隆。YAC庫的嵌合性嚴重且操作難度較大,已逐步為PAC庫和BAC庫取代。PAC系統是以噬菌體P1為基礎的克隆系統,它可容納70~100kb的插入片段,並可選擇性地區分重組子和非重組子,且同時有兩套複製機制。

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