《基於iTRAQ-2DLC-MS/MS的肺癆證候標誌性血清蛋白質篩選與鑑定》是依託浙江大學，由李繼承擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於iTRAQ-2DLC-MS/MS的肺癆證候標誌性血清蛋白質篩選與鑑定
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：李繼承
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我國肺癆發生率居世界第二位，耐藥肺癆居世界首位，西醫治療非常棘手。中醫基於患者機體正虛和癆蟲感染辨證施治，對肺癆治療具有一定療效。然而，由於中醫證候辨證標準不統一，治法治則不規範，導致療效低，未能發揮中醫對肺癆的治療作用。課題組曾用SELDI-TOF-MS法研究肺癆證候，發現了多個差異蛋白，建立了肺癆證候血清蛋白質指紋圖譜。但該技術只能捕獲少量蛋白質，無法鑑定證候差異蛋白。為此，本課題套用同位素標記相對和絕對定量（iTRAQ）法結合二維液相色譜串聯質譜（2DLC-MS/MS）研究肺癆證候，對血清蛋白質進行同位素標記，經2DLC-MS/MS分離，直接鑑定證候標誌性蛋白質，建立肺癆證候分型血清蛋白質圖譜模型。本課題套用定量蛋白質組學技術，研究肺癆的證候分型，有助於規範肺癆中醫治療的辨證施治，提高中醫療效，推動中醫防癆抗癆作用，並為闡明中醫證候的生物學本質奠定科學依據。
結題摘要
臨床上肺結核病的治療以西醫抗結核藥物治療為主，由於治療時間長，易產生藥物耐受、肝損傷、藥物過敏等副作用。套用中醫藥物進行輔助治療，可達到良好的減毒增效作用。中醫治療的前提是辨證，基於患者機體正虛、癆蟲感染程度和臟腑受累程度，進行辨證。但是，由於中醫證候辨證標準不統一，治法治則不規範，導致中醫對肺癆的治療效果低。本課題納入初治肺結核病患者，通過中醫辨證分為肺陰虛證、陰虛火旺證、氣陰兩虛證，採用iTRAQ-2DLC-MS/MS蛋白質組學技術研究證候差異蛋白質圖譜。獲得了差異蛋白質γ-谷氨醯水解酶（GGH）、IgG3恆定區（IGHG3）、觸珠蛋白（HPT）分別是肺陰虛證、陰虛火旺證、氣陰兩虛證的特異性蛋白質。通過SELD-TOF-MS-MS技術和生物信息學方法，建立了4679.7、3961.7、8891.2、5646.4、9416.7 m/z 蛋白峰構建的肺結核中醫證候診斷模型；該診斷模型對肺陰虛、陰虛火旺證、氣陰兩虛證具有良好的診斷價值。經臨床病理分析，發現了肺結核中醫證候與臨床病理的相關性，即肺陰虛證以結核結節等增生性病變為主；陰虛火旺證以空洞、乾酪樣壞死等變質性病變為主；氣陰兩虛證以重症肺結核病為主。並發現了肺結核中醫證候在病程中的演變規律，即：證候從肺陰虛證→陰虛火旺證→氣陰兩虛證轉歸，臨近死亡為陰陽兩虛證；治療後患者的證型從氣陰兩虛證→陰虛火旺證→肺陰虛證轉歸。早期、輕度肺結核病為肺陰虛證，重症、晚期肺結核病為氣陰兩虛證。此外，本課題還獲得了肺結核病早期診斷標誌性蛋白質胞外超氧化物歧化酶（SOD3）、蛋白S100-A9（S100A9）和基質金屬蛋白酶9（MMP9），在肺結核病患者中表達與正常人、肺炎、肺癌患者均有顯著差異，並建立了早期診斷模型。獲得了肺結核病理變化的蛋白質標誌物補體C4b、纖連蛋白（FN）和脯氨酸肽酶（PEPD）。通過本實驗研究，建立iTRAQ-2DLC-MS/MS篩選-GO/KEGG分析- Western blot-ELISA技術平台，最佳化了肺結核中醫證候學研究技術，服務臨床肺結核中醫證候研究。本課題對於完善肺結核辨證規範和辨證方法，指導臨床肺結核證候分型和評價具有重要意義。
