《基於核酸連線等溫擴增反應的癌症早期診斷新方法研究》是依託陝西師範大學，由李正平擔任項目負責人的重點項目。
基本介紹
- 中文名：基於核酸連線等溫擴增反應的癌症早期診斷新方法研究
- 項目類別：重點項目
- 項目負責人：李正平
- 依託單位：陝西師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
癌症是一類與基因密切相關的重大疾病，其治療的關鍵是實現早期診斷。利用基因分析進行癌症早期診斷的瓶頸是沒有確證的基因標誌物。根據與癌症發生、發展密切相關的多種因素，本項目提出以關鍵基因的突變、甲基化及相關的mRNA與microRNA作為綜合的基因標誌物研究癌症的早期診斷。同時本項目擬基於DNA探針連線形成的等溫指數擴增反應，創新性地研究建立適合於基因突變、甲基化及mRNA、microRNA檢測的分析技術平台。該分析技術儀器簡單、操作方便，靈敏度達到能完全滿足實際臨床樣品分析的水平；選擇性達到有效檢測單鹼基差別核酸序列的水平。套用該項新技術，通過檢測癌細胞與正常細胞中各種基因標誌物的差別，確立適合癌症診斷的基因標誌物；進一步通過實際臨床診斷的檢驗，最後形成具有自主智慧財產權的癌症診斷試劑盒。
結題摘要
按照申請書所提出的研究任務，本研究項目以癌症相關的基因標誌物（包括癌症相關的基因突變、DNA甲基化以及信使RNA（mRNA）和microRNA）為研究對象，基於特異性連線酶所催化的DNA探針連線反應、DNA探針創新性設計與修飾，解決了高特異性識別基因標誌物單鹼基差別的關鍵科學問題；利用對DNA探針連線產物的高效擴增反應（包括環介導等溫核酸擴增（LAMP）、連線酶鏈式反應（LCR）、滾環擴增（RCA）、等溫指數擴增（EXPAR）及聚合酶鏈式反應（PCR）等），系統研究了各類基因標誌物的分析方法。以基於連線酶反應的環介導等溫擴增（Ligation-based LAMP）和連線酶鏈式反應 （LCR），研究實現了各類基因標誌物的高靈敏度、高特異性分析檢測，可檢測低至10 aM的DNA目標物及100 aM的RNA目標物，可定量分析0.1%的基因突變、mRNA突變及DNA甲基化。所研究建立的分析方法儀器簡單、操作簡便，選擇性和靈敏度能滿足臨床分析檢測實際樣品的要求；並將所建立的分析方法套用於各類癌細胞（包括乳腺癌、結腸癌、肺癌、肝癌、卵巢癌細胞）的實際樣品分析，取得了滿意的結果。在以上研究基礎上，我們創新性地研究建立了基於單個微球的生物標誌物分析平台，實現了基因、蛋白生物標誌物的單分子、單細胞分析。根據近年來癌症標誌物研究進展，該研究項目擴展到了mRNA剪接變體、RNA甲基化以及重要的癌症蛋白標誌物（包括蛋白激酶、端粒酶、T4多聚磷酸激酶等）的高靈敏度、高選擇性分析研究，取得了一系列創新性研究成果。
