基於廣譜性抗體的獸藥多殘留免疫分析研究

《基於廣譜性抗體的獸藥多殘留免疫分析研究》是依託中國農業大學，由沈建忠擔任項目負責人的重點項目。

基本介紹

• 中文名：基於廣譜性抗體的獸藥多殘留免疫分析研究
• 依託單位：中國農業大學
• 項目負責人：沈建忠
• 項目類別：重點項目

項目摘要

養殖業中獸藥的廣泛套用甚至不規範套用，造成了動物源食品中獸藥殘留的多樣化和複雜性，給監控工作帶來了極大挑戰。研究建立可同時檢測同類或不同類多種獸藥殘留的免疫分析技術是解決這一問題的有效途徑，而獸藥多殘留快速免疫分析技術的突破有賴於獸藥分子廣譜性抗體的獲得。圍繞上述問題，本項目擬選用磺胺類、喹諾酮類等獸藥，確定同類獸藥分子的共有抗原決定簇；通過獸藥分子結構改造，獲得最佳半抗原；研製出廣譜性單克隆抗體和天然基因重組抗體；建立獸藥分子-抗體的定量構效關係（QSAR）以評價廣譜性抗體的親和力和特異性；套用QSAR、胺基酸序列對比和蛋白質同源模擬技術，建立獸藥分子-抗體互作虛擬模型，以指導天然基因重組抗體結構改造，獲得改良的廣譜性重組抗體；建立靈敏度高、檢測譜廣的量子點螢光、螢光偏振和化學發光等獸藥多殘留快速免疫分析檢測技術，為我國動物源食品中獸藥殘留檢測提供理論依據和技術保障。

結題摘要

設計合成了磺胺類、大環內酯類和β-興奮劑類等獸藥半抗原23種，篩選出最佳半抗原7種。製備出上述獸藥的廣譜性單克隆抗體和重組抗體9種，其中單克隆抗體4D11可以識別22種磺胺類藥物，重組抗體anti-NOR scFv可以識別17種喹諾酮類藥物。建立了基於廣譜性抗體的磺胺類和阿維菌素的多殘留快速檢測ELISA法、喹諾酮類藥物的多殘留快速檢測螢光偏振免疫分析法和基於喹諾酮類藥物基因重組抗體的化學發光免疫法各1個；建立了基於多元標記的免疫分析檢測技術3個，包括辣根過氧化物酶、量子點標記的可同時檢測磺胺類、喹諾酮類和三聚氰胺的雜合免疫分析技術、四種螢光素標記的可同時檢測磺胺類、喹諾酮類、鏈黴素和頭孢氨苄的螢光偏振免疫分析技術和辣根過氧化物酶和鹼性磷酸酶標記的可同時檢測磺胺類和喹諾酮類藥物的雙顯色ELISA技術，上述方法的靈敏度和穩定性均達到了動物源性食品中獸藥殘留的檢測要求。同時，研究了磺胺類和喹諾酮類抗體與抗原的分子識別機制，建立了抗原-抗體結合的定量構效關係模型和互作虛擬模型，根據獲得的相互作用力類型和作用關鍵位點，指導了喹諾酮類藥物單鏈抗體的定點突變，獲得的突變體對沙拉沙星和二氟沙星的親和力提高了10倍。