《同時識別多種獸藥的重組ScFv抗體的分子作用機制研究》是依託中國農業大學，由江海洋擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：同時識別多種獸藥的重組ScFv抗體的分子作用機制研究
- 依託單位：中國農業大學
- 項目負責人：江海洋
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
獸藥殘留已成為影響食品安全的重要因素，開展相關檢測技術的基礎研究迫在眉睫。多特異性重組單鏈可變區（ScFv）抗體具有同時與多種不同獸藥小分子結合的特點，它的研究是解決同時檢測不同類獸藥殘留免疫分析技術這一問題的一條新途徑。本項目擬通過確定磺胺類、喹諾酮類、阿維菌素類等單克隆抗體輕鏈和重鏈可變區關鍵胺基酸位點的基因序列，進行擴增、克隆、測序、表達和鑑定；將獲得的針對單類獸藥小分子的重組ScFv抗體進一步進行結構解析，引入連線臂基因定向改造，構建表達載體，獲得同時識別兩類以上獸藥的多特異性重組ScFv抗體；建立獸藥-抗體的定量構效關係以評價抗體的親和力和特異性，同時建立獸藥-抗體分子互作虛擬模型，分析對接構象，預測其結合位點及相互作用力，並揭示二者結合的分子作用機制，為製備識別多類獸藥的廣譜性抗體和建立多殘留檢測技術奠定科學基礎。
結題摘要
本項目圍繞磺胺類、喹諾酮類等獸醫臨床上的主要抗菌藥物，研究製備相應的廣譜性單鏈抗體，確定了單鏈抗體重鏈和輕鏈基因序列，通過重疊延伸PCR技術將磺胺類和喹諾酮類兩個單鏈抗體的基因拼接，構建了一個雙特異抗體基因。通過克隆和轉化，構建了雙特異抗體基因表達載體，並在大腸桿菌中表達和鑑定。雙特異抗體生物活性和親本單鏈抗體幾乎保持一致。建立獸藥-抗體的定量構效關係評價了雙特異性抗體的親和力和特異性，同時建立獸藥-抗體分子互作虛擬模型，分析對接構象，預測其結合位點及相互作用力，並揭示二者結合的分子作用機制，為製備識別多類獸藥的廣譜性抗體和建立多殘留檢測技術奠定科學基礎。 基於上述高性能抗體，本研究分別合成磺胺類螢光標記物和喹諾酮類螢光標記物。利用這兩種螢光標記物的激發波長和發射波長不同，建立了一種雙標記螢光偏振免疫方法，可同時檢測13種磺胺類和19種喹諾酮類藥物殘留。 在本項目的資助下，以辣根過氧化物酶標記羊抗兔二抗來識別磺胺類多克隆抗體，以鹼性磷酸酶標記羊抗鼠二抗來識別喹諾酮類單克隆抗體，從而實現在同一個反應體系中建立雙顯色酶聯免疫吸附試驗方法同時檢測牛奶中22種磺胺類和13種喹諾酮類藥物殘留。
