《基於光解籠鎖的靶向控釋olomoucine治療脊髓損傷的研究》是依託華中科技大學，由曾憲林擔任項目負責人的專項基金項目。
基本介紹
- 中文名：基於光解籠鎖的靶向控釋olomoucine治療脊髓損傷的研究
- 項目類別：專項基金項目
- 項目負責人：曾憲林
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
脊髓損傷後，星形膠質細胞過度活化、增殖，形成膠質瘢痕與其分泌的以硫酸軟骨素蛋白多糖為主的大量抑制因子，嚴重阻礙了軸突再生。靶向性藥物控釋系統能在局部維持有效濃度有望提供有利於軸突生長的微環境。本項目以前期籠鎖化合物篩選、合成和留置光纖導光技術的研究為基礎，擬設計、合成包有細胞周期素依賴性蛋白激酶抑制劑奧羅莫星（olomoucine）的籠鎖化合物，構建2-bromo-α-carboxyl-2-nitrophenyl methyl ester/ olomoucine的光解籠鎖控釋體系，使其具有良好的可控性、安全性及有效性；將靶向性光解籠鎖控釋olomoucine，聯合神經幹細胞移植至大鼠脊髓損傷處，抑制脊髓損傷後膠質細胞的活化、增殖和膠質瘢痕形成，修復脊髓損傷。此設計從多角度來促進軸突再生，為脊髓損傷的治療探索提供了一個嶄新的思路，因而具有重要的科學意義和廣泛的套用前景。
結題摘要
本項目以前期籠鎖化合物篩選、合成和留置光纖導光技術的研究為基礎，設計、合成包有細胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）抑制劑奧羅莫星（olomoucine）的籠鎖化合物，構建2-bromo-α-carboxyl-2-nitrophenyl methyl ester/ olomoucine的光解籠鎖控釋體系，具有良好的可控性、安全性及有效性。我們委託上海厚璞化學科技有限公司來合成此化合物，但是在擬定的試驗條件下，2-溴-α-羧基-2-硝基苯基甲酯和N9-異丙基奧羅莫星反應後，生成物量少且穩定性較差。因此，為了提高反應物的產量及穩定性，利於後期實驗進行，經過對比分析，調研以及預實驗，提出新的籠鎖化合物分子的cage光切保護方案。首先，在細胞毒性檢測方面，套用多重螢光染料檢測細胞核形態學、細胞膜通透性、溶酶體內的物質和細胞密度等指標，證實新型籠鎖化合物的安全性較好，對脊髓神經源性幹細胞無毒性。其次，在細胞凋亡檢測方面，依次向各細胞株加入不同劑量的籠鎖化合物，孵育後再加入Hoechst 33342和螢光素標記探針，檢測細胞凋亡相關參數。實驗發現包括染色質結構、核仁結構和線粒體膜均未受到破壞，完整性存在。最後，在olomoucine對脊髓損傷後軸突再生的影響方面，採用Western印跡分析與免疫螢光技術檢測了脊髓損傷後細胞周期相關蛋白、膠質纖維酸性蛋白（GFAP）、硫酸軟骨素蛋白多糖（CSPG）以及生長相關蛋白-43（GAP-43）的表達。本項目將靶向性光解籠鎖控釋olomoucine，還將聯合神經幹細胞移植至大鼠脊髓損傷處，抑制脊髓損傷後膠質細胞的活化、增殖和膠質瘢痕形成，修復脊髓損傷。此設計從多角度來促進軸突再生，為脊髓損傷的治療探索提供了一個嶄新的思路，因而具有重要的科學意義以及廣泛的套用前景。
