固相萃取技術

固相萃取（Solid Phase Extraction）就是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標化合物吸附，與樣品的基體和干擾化合物分離，然後再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達到分離和富集目標化合物的目的。固相萃取作為樣品前處理技術，在實驗室中得到了越來越廣泛的套用。

基本介紹

• 中文名：固相萃取技術
• 外文名：Solid Phase Extraction
• 表達式：固體吸附劑將液體樣品中的目標化合物吸附
• 套用學科：化學
• 適用領域範圍：將標的物提純

概述

它利用分析物在不同介質中被吸附的能力差將標的物提純，有效的將標的物於干擾組分分離，大大增強對分析物特別是痕量分析物的檢出能力，提高了被測樣品的回收率。SPE技術自上世紀70年代後期問世以來，發展迅速，廣泛套用於環境、製藥、臨床醫學、食品等領域 。

原理

固相萃取裝置

在過去的二十多年中，固相萃取作為化學分離和純化的一個強有力工具出現了。從痕量樣品的前處理到工業規模的化學分離，吸附劑萃取在製藥、精細化工、生物醫學、食品分析、有機合成、環境和其他領域起著越來越重要的作用。

固相萃取是一個包括液相和固相的物理萃取過程。在固相萃取中，固相對分離物的吸附力比溶解分離物的溶劑更大。當樣品溶液通過吸附劑床時，分離物濃縮在其表面，其他樣品成分通過吸附劑床；通過只吸附分離物而不吸附其他樣品成分的吸附劑，可以得到高純度和濃縮的分離物。

保留和洗脫

在固相萃取中最通常的方法是將固體吸附劑裝在一個針筒狀柱子裡，使樣品溶液通過吸附劑床，樣品中的化合物或通過吸附劑或保留在吸附劑上（依靠吸附劑對溶劑的相對吸附）。“保留”是一種存在於吸附劑和分離物分子間吸引的現象，造成當樣品溶液通過吸附劑床時，分離物在吸附劑上不移動。保留是三個因素的作用：分離物、溶劑和吸附劑。所以，一個給定的分離物的保留行為在不同溶劑和吸附劑存在下是變化的。“洗脫”是一種保留在吸附劑上的分離物從吸附劑上去除的過程，這通過加入一種對分離物的吸引比吸附劑更強的溶劑來完成。

固相萃取技術原理

容量和選擇性

吸附劑的容量是在最優條件下，單位吸附劑的量能夠保留一個強保留分離物的總量。不同鍵合矽膠吸附劑的容量變化範圍很大。選擇性是吸附劑區別分離物和其他樣品基質化合物的能力，也就是說，保留分離物去除其他樣品化合物。一個高選擇性吸附劑是從樣品基質中僅保留分離物的吸附劑。吸附劑選擇性是三個參數的作用：分離物的化學結構、吸附劑的性質和樣品基質的組成。

分類

1.正相固相萃取所用的吸附劑都是極性的．取決於目標化合物的極性官能團與吸附劑表面的極性官能團之間相互作用，其中包括了氫鍵，π—π鍵相互作用，偶極－偶極相互作用和偶極－誘導偶極相互作用以及其他的極性－極性作用。

2.反相固相萃取所用的吸附劑和目標化合物通常是非極性的或極性較弱的，主要是靠非極性－非極性相互作用，是范德華力或色散力。

3.離子交換固相萃取是靠目標化合物與吸附劑之間的相互作用的靜電吸引力 。

簡要過程

1.一個樣品包括分離物和干擾物通過吸附劑；

2.吸附劑選擇性的保留分離物和一些干擾物，其他干擾物通過吸附劑；3.用適當的溶劑淋洗吸附劑，使先前保留的干擾物選擇性的淋洗掉，分離物保留在吸附劑床上；

固相萃取技術簡要過程

4.純化、濃縮的分離物從吸附劑上淋洗下來。

固相萃取步驟

方法建立

固相萃取技術

1.選擇SPE 小柱或濾膜　首先應根據待測物的理化性質和樣品基質, 選擇對待測物有較強保留能力的固定相。若待測物帶負電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽離子交換填料。若為中性待測物, 可用反相填料萃取。SPE 小柱或濾膜的大小與規格應視樣品中待測物的濃度大小而定。對於濃度較低的體內樣品, 一般應選用儘量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。

2.活化　萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5～ 10ml 溶劑沖洗濾膜。一般可先用甲醇等水

溶性有機溶劑沖洗填料, 因為甲醇能潤濕吸附劑表面, 並滲透到非極性的矽膠鍵合相中, 使矽膠更容易

被水潤濕, 之後再加入水或緩衝液沖洗。加樣前, 應使SPE 填料保持濕潤, 如果填料乾燥會降低樣品保留值; 而各小柱的乾燥程度不一, 則會影響回收率的重現性。

固相萃取技術方法

3.上樣　一般可採取以下措施: (1) 用0.1mol/L 酸或鹼調節, 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃取；(2) 用甲醇、乙腈等沉澱蛋白質後取上清液, 以水或緩衝液稀釋後萃取；(3) 用酸或無機鹽沉澱蛋白質後取上清液, 調節pH 值後萃取；(4) 超聲15min後加入水、緩衝液, 取上清液萃取。尿液樣品中的藥物濃度較高, 加樣前先用水或緩衝液稀釋, 必要時可用酸、鹼水解反應破壞藥物與蛋白質的結合, 然後萃取。流速應控制為1ml/min, 流速快不利於待測物與固定相結合。

4.淋洗　反相SPE的清洗溶劑多為水或緩衝液, 可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調節pH值。加入小柱的清洗液應不超過一個小柱的容積, 而SPE濾膜為5～10ml。

5.洗脫待測物　應選用5～10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮乾後, 再用流動相重組殘留物後進樣。體內樣品洗脫後多含有水, 可選用冷凍乾燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測物可電離, 可調節pH 值, 抑制樣品離子化, 以增強待測物在反相SPE 填料中的保留, 洗脫時調節pH值使其離子化並用較弱的溶劑洗脫, 收集洗脫液後再調節pH值使其在HPLC分析中達到最佳分離效果。在洗脫過程中應減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫, 回收率更高。