《單核增生李斯特菌分子檢測標記發掘新方法》是依託上海大學，由劉戰民擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：單核增生李斯特菌分子檢測標記發掘新方法
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉戰民
- 依託單位：上海大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
發掘高特異性分子檢測標記是解決當前制約食源性致病菌分子檢測技術的瓶頸.和難題。本研究基於生物信息學和比較基因組學的理論和當前微生物基因組信息資源，採用.生物信息學和比較基因組學相結合的策略，通過對食源性致病菌單核增生李斯特菌基因組序.列片段和其它生物基因組序列的綜合比較分析、篩選和生物學驗證，構建具有我國自主智慧財產權的食源性致病菌分子檢測標記發掘的新方法，並利用該方法發掘若干個單核增生李斯特菌特異性分子檢測標記，進而建立具有我國自主智慧財產權的單核增生李斯特菌PCR快速檢測技術。.本研究不僅可以解決當前食源性致病菌分子檢測標記特異性不高和數量較少這一制約分子檢測技術的推廣和套用的關鍵問題，而且有助於扭轉我國在食源性致病菌檢測領域缺乏具有自主智慧財產權檢測標記和快速檢測技術的落後局面，為政府執法部門加強食品安全監測提供技術支撐。
結題摘要
基於對12株單核增生李斯特菌基因組數據和其他生物的已經公布的核酸序列數據進行兩種不同策略的基因序列比較分析，獲得單核增生李斯特菌候選的分子檢測標記序列；通過生物學驗證試驗，首次獲得具有種特異性的3個分子檢測新標記，進而分別以lmo0202 hly和lmo1035-lmo1037的部分DNA序列作為擴增靶標，建立了普通PCR檢測技術和添加擴增內標的單核增生李斯特菌分子檢測技術。結果表明，該方法對試驗中39株單核細胞增生李斯特菌和8株陰性菌株（綿羊李斯特菌、英諾克李斯特菌、西爾李斯特菌、格氏李斯特菌、威氏利斯特菌、豬霍亂沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌株、粘質沙雷菌）能夠擴增出所有陽性樣品的目標產物，陰性對照均無目標產物的出現，顯示出極強的單核增生李斯特菌特異性;該檢測方法的靈敏度為1.304fg/μL;用此方法檢測40份人工污染樣品，檢測結果中都為陽性，表明該檢測方法具有較高的準確性。在添加擴增內標的單核增生李斯特菌檢測方法中，構建了包含擴增引物序列的長度為541bp的擴增內標序列，40株單核細胞增生李斯特菌和30株非單核細胞增生李斯特菌分別進行檢測擴增，只有單核細胞增生李斯特菌都能擴增出455bp的目標序列特異性產物和541bp的擴增內標產物，而非單核細胞增生李斯特菌只能擴增出541bp的擴增內標產物，添加6.06×105拷貝的擴增內標在PCR檢測體系中，檢測方法的核酸檢測靈敏度為11.8fg/μL，不受豬霍亂沙門氏菌、金色葡萄球菌、大腸桿菌的干擾；該擴增內標PCR檢測技術的菌落靈敏度為3.44×104CFU/ml。
