《利用反向遺傳學技術研究乙腦疫苗株SA14-14-2的減毒機制》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由李世華擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：利用反向遺傳學技術研究乙腦疫苗株SA14-14-2的減毒機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李世華
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
流行性乙型腦炎是一種重要的蚊媒傳染病，在亞太地區廣泛流行。近年來，乙腦流行區域不斷擴大，不同基因型病毒交替流行，給疾病防控帶來了巨大挑戰。乙腦減毒活疫苗SA14-14-2株由野毒株SA14連續傳代而來，安全性和有效性俱佳。最近，我們成功構建了SA14-14-2的感染性全長cDNA克隆，在此基礎上，本研究擬結合疫苗株與野毒株病毒的基因組序列差異，首先通過同源片段置換的方法構建攜帶野毒株結構蛋白的乙腦嵌合病毒，通過比較恢復病毒對小鼠的致病性，確定決定乙腦毒力的主要區域；進一步對毒力決定區域內的每個核苷酸差異位點進行定點突變，拯救獲得一系列點突變病毒，通過小鼠感染實驗確認相應關鍵毒力位點，並通過受體結合、膜融合抑制、複製子以及病毒樣顆粒包裝系統等技術手段研究突變病毒與親本病毒的差異，闡明上述位點減毒的分子機制。本研究將能夠闡明乙腦病毒的減毒機制，對於新型減毒活疫苗的設計和質量控制具有重要意義。
結題摘要
我國廣泛使用的乙腦減毒活疫苗SA14-14-2株由野毒株SA14連續傳代而來，安全性和有效性俱佳，但是其減毒的機制目前未完全明確。本研究利用SA-14-14-2的全長感染性克隆，通過反向遺傳學操作以及其他多種實驗方法來研究疫苗株的減毒機制。首先通過同源片段置換的方法構建攜帶野毒株結構蛋白的乙腦嵌合病毒，通過比較恢復病毒對小鼠的致病性，確定決定乙腦毒力的主要區域為包膜糖蛋白E。進一步通過基因比較分析，對毒力決定區內的7個胺基酸差異位點進行突變，拯救並獲得一系列的單點以及多點突變病毒。通過小鼠的感染實驗測定點突變病毒的神經毒力以及神經侵襲力，結果發現L107，E138和A315位點為影響病毒的毒力關鍵位點，其中E138影響最大。進一步通過病毒一步生長曲線，病毒吸附，膜融合抑制等技術手段闡明上述位點減毒的分子機制。結果發現，L107和A315位點可以影響病毒介導的細胞膜融合過程，而E138主要與病毒對細胞的吸附相關，將其突變後會改變對細胞的吸附能力。同時，我們發現L107及E138位點對疫苗株SA14-14-2對干擾素的敏感性起著重要作用。另外，Q264位點為影響病毒穩定性的關鍵胺基酸位點。本研究闡明了乙腦病毒的減毒機制，可以為新型減毒活疫苗的設計和質量控制提供了參考。
