冷藏蝕刻技術

冷藏蝕刻技術發展

冷藏蝕刻（freeze－etching）技術是在冷藏斷裂技術的基礎上發展起來的更複雜的復型技術。如果將冷藏斷裂的樣品的溫度稍微升高，讓樣品中的乾冰在真空中升華，而在表面上浮雕出細胞膜的超微結構。當大量的乾冰升華之後，對浮雕表面進行鉑一碳復型，並在腐蝕性溶液中除去生物材料，復型經重蒸水多次清洗後，撈在載網上作電鏡觀察。

冷藏蝕刻技術操作方法

1.冷藏斷裂是在冷藏條件下使樣品變得又硬又脆，用刀劈裂樣品，暴露觀察面。因為是用刀劈裂的樣品，斷裂往往發生在細胞被凍結後較脆弱的部位，多數是沿細胞及細胞器的膜裂開。由於斷裂面是凸凹不平的，所以圖像立體感強。冷藏斷裂時，刀的作用在於劈裂，而不是切割，所以刀刃不必鋒利，但不能有缺口、油污和水份，還需保持清潔乾燥。冷藏復型的斷裂操作要在真空中進行，是因為真空對熱傳導性差，能使樣品較長時間維持在較恆定溫度下進行斷裂操作，同時也便於進行下步的蝕刻處理。

2.預處理取新鮮組織塊，大小為1?5～3～5mm，用2?5%戊二醛固定1～3小時。為防止冰晶形成，用30%甘油生理鹽水浸泡8～12小時。