冷凍刻蝕技術

凍刻蝕技術（freeze-etching technique）是透射電子顯微鏡觀察用試樣的制樣法之一。該法的特點是能較好地保持含水樣品如生物組織的自然狀態。在常壓下將樣品在-150℃快速凍結後，在10^-5Pa的高真空下將樣品切斷，然後在-100℃下使切割面的冰升華，最後在該面上真空蒸鍍上鈉等的薄膜，即得觀察用的樣品。

基本介紹

• 中文名：冷凍刻蝕技術
• 外文名：freeze-etching technique
• 釋義：透射電子顯微鏡觀察試樣的制樣法
• 優點：較好地保持含水樣品自然狀態
• 別稱：冷凍復型技術
• 套用：研究生物膜的結構與功能

簡介

冷凍刻蝕技術(或稱冷凍復型技術)是一種由冷凍斷裂與復型相結合的制樣技術。它是另一種冷凍制樣技術，同樣具有快速固定和避免化學固定劑及有機溶劑對樣品產生的不良影響，減少對細胞內物質的抽提的特點。它特別適用於研究膜的結構。

步驟

冷凍刻蝕技術的基本步驟是：首先將樣品在冷凍劑中急速冷凍，然後在真空中切斷，在切斷後的斷面上有細胞器，其間還有凍成凍的水分。稍加熱使冰升華(水分揮發)，使細胞器的膜結構暴露出來，斷面變得凹凸不平，好像“雕刻"一樣，故稱為冷凍刻蝕，如下圖所示。

冷凍刻蝕技術

最後在真空中向斷面噴鍍鉑一碳投影，再噴碳加固，這樣，在斷面形成一層復型膜，這層膜複印了細胞斷面的立體結構。把復型膜下的組織腐蝕掉後，剩下的復型膜就是冷凍刻絀的電鏡樣品，它能很好地描述膜的主體結構。

特點

樣品在真空中切斷時，斷裂面是沿著冷凍樣品中阻力最小的牲方進行，遇到生物膜時，通常沿著膜結構中脂類雙分子層的琉水區進行，因此生物膜的兩層被劈開，從而暴露出生物膜內部斷面的結構，在膜面上分布著許多微粒，這些微粒就是鑲嵌在脂類雙分子層中的結構蛋白。有人認為，激素藥物及介質的受體、主動或被動的運載體、催化作用的酶、傳遞離子的泵、個體特異性抗原等都在這些結構蛋白中，這些微粒的大小、數量及分布的改變都與膜的功能有密切關係。因此，冰凍刻蝕技術是研究生物膜的結構與功能的最重要的方法之一。