克隆基因分離

克隆基因分離,是指尚沒有嚴格定義,可以理解為基因研究中常規分離過程的俗稱。主要有套用核酸探針(核酸雜交篩選)法分離基因文庫中目的基因、差別雜交或扣除雜交法分離克隆的目的基因、mRNA差別顯示技術、表達文庫篩選和酵母雙雜交系統等。套用核酸探針法分離目的基因:把cDNA文庫轉移到尼龍膜或硝酸纖維素濾膜上,就可以與特異性的核酸探針進行菌落雜交,以便篩選出具有目的基因的陽性克隆。套用差別雜交或扣除雜交法分離克隆的目的基因:差別雜交亦稱差別篩選,適用於分離經特殊處理而被誘發表達的mRNA的cDNA克隆。

差別雜交的技術基礎需要有兩種不同的細胞群體:在一個細胞群體中目的基因正常表達,在另一個細胞群體中目的基因不表達。在這種情況下便可製備到兩種不同mRNA提取物。其一是含有一定比例的目的基因mRNA的總mRNA群體,其二是不含有目的基因mRNA的總mRNA群體。

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