《先天性黑蒙動物模型的構建及致病機制研究》是依託同濟大學，由史秀娟擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：先天性黑蒙動物模型的構建及致病機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：史秀娟
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
先天性黑蒙是基因突變引起的一種最嚴重的視覺失明的遺傳病，目前缺乏有效的治療手段。有效治療策略的建立依賴於人們對致病分子機制的認識，而基於動物模型的研究不僅為揭示致病機制提供重要信息而且是探索治療方案的必備工具。SPATA7突變誘發的視覺失明是先天性黑蒙的一種亞型，迄今為此，SPATA7突變如何導致視覺失明的分子機制還很不清楚。為揭示SPATA7突變誘發視覺失明的機制和探索其治療方法，我們利用基因沉默技術建立了一種藥物誘導SPATA7基因沉默缺的載體系統。在本項目中我們將利用這套載體系統建立由於SPATA表達下降而誘發的先天性黑蒙亞型的小鼠模型。通過比較正常小鼠與模型小鼠中視網膜的結構與形態、視網膜特異標誌物的表達與胞內定位、細胞凋亡途徑、視網膜電生理與離子通道功能分析以及蛋白與蛋白相互作用，不僅為闡明先天性黑蒙的分子病理機制提供一種重要信息，同時也為探索其治療策略提供評估參數。
結題摘要
先天性黑蒙是基因突變引起的一種最嚴重的視覺失明的遺傳病，目前缺乏有效的治療手段。有效治療策略的建立依賴於人們對致病分子機制的認識，而基於動物模型的研究不僅為揭示致病機制提供重要信息而且是探索治療方案的必備工具。SPATA7突變誘發的視覺失明是先天性黑蒙的一種亞型，迄今為此，SPATA7突變如何導致視覺失明的分子機制還很不清楚。為揭示SPATA7突變誘發視覺失明的機制和探索其治療方法，我們利用基因沉默技術建立了一種藥物誘導SPATA7基因沉默缺的載體系統。在該系統中，我們設計了針對小鼠Spata7基因的四個shRNA序列，並將這四個shRNA序列構建與同一個載體中，該載體含有強力黴素基因，因此可通過強力黴素來誘導針對Spata7的四個shRNA的同時表達，達到沉默Spata7基因表達的目的。在本項目中我們利用這套載體系統建立了由於Spata7表達下降而誘發的先天性黑蒙亞型的小鼠模型。首先，我們對建立的小鼠模型進行了基因型鑑定，通過設計針對shRNA質粒的特異引物，提取模型小鼠的基因組DNA，通過特異引物進行PCR反應，確定模型小鼠的基因組DNA已經成功整合了針對Spata7的shRNA片段。為進一步證實小鼠模型已經成功建立，還利用免疫印跡和實時定量PCR的方法，確定經過強力黴素誘導的模型小鼠的Spata7的轉錄水平和蛋白水平的表達都有明顯的降低。由此證明我們已經成功獲得了Spata7基因沉默的小鼠模型。接下來，我們利用視網膜電圖記錄 (Electroretinogram，ERG)比較正常小鼠和模型小鼠視網膜對光反應的功能變化，發現在Spata7沉默的小鼠模型中，其視網膜的光的反應逐漸消失，最終導致完全沒有反應。我們還通過HE染色和免疫螢光染色的方法比較了正常小鼠與模型小鼠中視網膜的結構與形態、視網膜特異標誌物的表達與胞內定位、細胞凋亡以及蛋白與蛋白相互作用，不僅為闡明先天性黑蒙的分子病理機制提供一種重要信息，同時也為探索其治療策略提供評估參數。
