《新型時空可控血管瘤動物模型的建立及其發病機制研究》是依託上海交通大學，由徐駸擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：新型時空可控血管瘤動物模型的建立及其發病機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：徐駸
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
血管瘤是頭頸部常見的良性血管腫瘤。缺少理想的、真實模擬血管瘤發病過程的動物模型制約了其發病機制的研究和新型治療手段的探索。課題組前期通過導入PyMT 基因成功建立了模擬血管瘤發病情況的轉基因動物模型，但是，模型動物由於多個重要器官受累，存在存活期短、無法長期觀察和獲取足夠實驗樣本的缺陷。本研究計畫在原有動物模型基礎上，採用皮膚組織特異表達啟動子K14 攜帶四環素調控的PyMT 基因，首次建立時空可控表達的新型轉基因血管瘤動物模型。在此基礎上，動態觀察血管瘤發生的各個階段，各種致病因子的表達、變化規律及其對於血管內皮細胞增殖活性的影響。梳理血管瘤發病過程的內在規律，尋找其關鍵調控分子，為揭示血管瘤的發病機制奠定基礎。並且，通過抑制血管發生相關信號通路的關鍵調節分子，阻斷通路傳導，觀察這種干預措施對於血管瘤內皮細胞增殖活性和體內成瘤能力的影響，為臨床血管瘤治療提供新思路。
結題摘要
血管瘤的確切發病機制目前仍不清楚，制約血管瘤發病機制及其新型治療策略機理研究的瓶頸在於缺少一個理想的、真實模擬血管瘤發病過程的動物模型。本研究期望通過最佳化動物模型策略，建立“時空可控”表達的轉基因血管瘤動物模型，並在此模型基礎上進行血管瘤發病機制和防治機理研究。本研究主要研究內容包括：（1）多策略血管瘤“時空”調控轉PyMT基因動物模型的構建與分析比較；（2）穩定表達血管瘤的轉基因動物模型的建系；（3）PyMT基因對於血管內皮細胞生物學行為的影響極其機制研究。通過實驗研究，發現（1）採用血管內皮特異啟動子Tie2 promoter及其增強子攜帶PyMT基因，成功構建動物模型，轉基因陽性動物的表型及組織學檢查證實其表現的新生物具有明顯血管瘤特徵。採用大鼠作為模型動物，慢病毒感染法獲得的轉基因動物，未表現有血管瘤樣新生物。採用四環素誘導及Tie2啟動子雙重調控產生的轉基因動物也未表現有血管瘤樣新生物。（2）前期實驗證實，SV40通用啟動子攜帶PyMT產生的轉基因動物在出生後2個月內即死亡，無法傳代建系。本實驗採用Tie2啟動子及其增強子攜帶PyMT基因，建立的血管瘤首建（Founder）鼠可以存活4個月，並成功配種、傳代，得到F1、F2代陽性轉基因動物，並且血管瘤表型也可遺傳給子代，從而為建立穩定表達的PyMT轉基因血管瘤動物品系奠定了基礎。（3）採用基因沉默技術下調血管內皮永生化細胞的PyMT基因的表達，與母本細胞相比，細胞生長受到抑制，凋亡水平增加，體內成瘤能力減弱。其可能的作用機制是，PyMT基因通過抑制蛋白磷酸酶2（PP2A）的磷酸酶活性，進而影響其下游的Erk蛋白磷酸化水平及信號通路活性。本研究採用組織特異性啟動子調控PyMT基因表達的方法，通過調控轉基因動物體內目的基因表達的部位及表達水平，實現了穩定表達血管瘤的轉基因動物傳代，同時觀察了PyMT基因對於血管內皮細胞生物學行為的影響並探索了其機制。實驗結果為完善血管瘤疾病模型，並進而闡明其發病機制，尋找新型治療手段奠定了重要實驗基礎。
