《低毒的抗炎抗滲出藥物組合物》是山東綠葉製藥有限公司於1999年12月30日申請的發明專利，該專利的申請號為998159964，公布號為CN1354666，公布日為2002年6月19日，發明人是劉萬卉、薛雲麗、張慶春、李世旭、蘇卡加、劉淑艷、朱發兵。
《低毒的抗炎抗滲出藥物組合物》含有通式Ⅰ的七葉皂甙和通式ⅠI七葉皂甙作活性成分及藥學上可接受的附加劑。該藥物組合物與七葉總皂甙相比，抗炎抗滲出活性相同，但毒性和刺激性都有顯著下降。
2014年11月6日，《低毒的抗炎抗滲出藥物組合物》獲得第十六屆中國專利優秀獎。
基本介紹
- 中文名：低毒的抗炎抗滲出藥物組合物
- 公布號：CN1354666
- 公布日：2002年6月19日
- 申請號：998159964
- 申請日：1999年12月30日
- 申請人：山東綠葉製藥有限公司
- 地址：中國山東省煙臺市萊山區寶源路9號（中國APEC科技工業園）
- 發明人：劉萬卉、薛雲麗、張慶春、李世旭、蘇卡加、劉淑艷、朱發兵
- 分類號：A61K31/56、C07J53/00、C07J63/00
- 代理機構：中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
- 類別：發明專利
- 代理人：唐偉傑
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
七葉總皂甙是一種從七葉樹屬植物的乾燥成熟的種子中提取得到的抗炎、抗滲出活性成分，目前臨床使用的七葉總皂甙針劑廣泛用於治療腦水腫並發腦功能失調、燒傷、燙傷、慢性靜脈功能不全、創傷、骨折及手術後水腫、血腫。儘管如此，由於七葉總皂甙具有較大毒副作用，其LD50值僅為3.99毫克/千克，並且用藥後常會產生較強烈的刺激性和毒副反應，所以限制了該藥在臨床上的使用。日本特開平10-17591披露了含式ⅠA或式ⅠB或它們的混合物的抗炎劑。
因此，尋找毒副反應降低的抗炎抗滲出藥物組合物仍是必要的。
發明內容
專利目的
《低毒的抗炎抗滲出藥物組合物》目的是尋找並開發低毒的抗炎抗滲出藥物組合物。
技術方案
- 發明簡述
《低毒的抗炎抗滲出藥物組合物》發明人經過研究發現，含下面的通式Ⅰ和通式ⅠI七葉皂甙的組合物在保持七葉總皂甙的抗炎抗滲出活性同時，降低了七葉總皂甙的毒副作用，從而完成了該發明。因此，該發明涉及的是一種新的藥物組合物，其包括通式（Ⅰ）和通式（Ⅱ）的七葉皂甙化合物及藥用載體或賦形劑。該組合物在保持七葉總皂甙活性同時，降低了七葉總皂甙的毒性。
根據該發明，該發明中所用的術語"通式（Ⅰ）七葉皂甙"是指由通式（Ⅰ）的21位（Z）（順式）和（E）（反式）立體異構體組成的通式（Ⅰ）七葉皂甙。
根據該發明，該發明中所用的術語"通式（Ⅱ）七葉皂甙"是指由通式（Ⅱ）的21位（Z）（順式）和（E）（反式）立體異構體組成的通式（Ⅱ）七葉皂甙。
- 詳細描述
該發明涉及新的具有低毒副作用的抗炎抗滲出藥物組合物，其包括通式Ⅰ和Ⅱ的七葉皂甙作為活性成分及藥用載體或賦形劑。
根據該發明，在藥物組合物中通式ⅠI七葉皂甙與通式Ⅰ七葉皂甙的重量比為1-7:3-9，優選重量比為2.5-4.5:5.5-7.5，最佳重量比為4:6。
根據該發明，該發明藥物組合物在抗炎抗滲出活性方面與已知的七葉總皂甙製劑在同一數量級水平上，但在毒副作用上，如急性毒性，明顯低於已知的七葉總皂戒製劑，如，七葉總皂甙的LD50 為3.99毫克/千克，而該發明藥物組合物的LD50為5.99毫克/千克。有關該發明藥物組合物的抗炎抗滲出活性及低毒性更詳細說明可見下面的實驗實施例。
根據該發明，通式Ⅰ和通式ⅠI七葉皂甙可按該領域已知方法由例如娑羅子粉提取得到，見《中草藥》1999年第5期，327-331頁披露的類似方法。它們的詳細製備可見後面的實施例1。
根據該發明，該發明藥物組合物可以含有藥學上可接受的各種藥物載體或賦形劑，這些藥用載體或賦形劑包括填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑、稀釋劑等。藥物載體或賦形劑的加入取決於該發明藥物組合物的劑型。例如，如果將該發明藥物組合物製成片劑，則可以包括製備片劑所使用的常規藥用載體或賦形劑，如：濕潤劑、潤滑劑、填充劑等。如果將該發明藥物組合物製成液體製劑，則可以包括稀釋劑，如蒸餾水、葡萄糖水等。所選用的藥物載體和賦形劑不與該發明藥物組合物中的活性成分發生反應，除此之外，將不受任何限制。
改善效果
由於該發明藥物組合物的毒性降低，安全性增加，可以採用常規的製藥工藝將該發明藥物組合物製成各種劑型，如胃腸道給藥製劑和非胃腸道給藥製劑，其中經胃腸道給藥製劑包括口服液、片劑、糖漿、酊劑、醑劑、膠嚢劑、顆粒劑等，非經胃腸道給藥製劑包括注射劑、以及滴眼劑、栓劑、陰道栓劑、凝膠劑、噴霧劑等局部用製劑。
權利要求
1.《低毒的抗炎抗滲出藥物組合物》含有作為活性成分的通式Ⅰ七葉皂甙和通式ⅠI七葉皂甙及藥學上可接受的載體或賦形劑，
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其中通式ⅠI七葉皂甙與通式Ⅰ七葉皂甙的重量比為1-7:3-9。
3.根據權利要求2所述的藥物組合物，其中通式ⅠI七葉皂甙與通式Ⅰ七葉皂甙的重量比為2.5-4.5:5.5-7.5。
4.根據權利要求3所述的藥物組合物，其中通式ⅠI七葉皂甙與通式Ⅰ七葉皂甙的重量比為4:6。
5.根據權利要求1-4中任一所述的藥物組合物，其劑型為片劑、膠嚢、凍乾粉針劑、凝膠、栓劑、噴霧劑。
實施方式
實施例1
稱取乾燥娑羅子粉1.0千克，加25%乙醇5L，浸泡過夜，攪拌提取二次，每次6小時，合併提取液，濾去藥渣，提取液通過1.0千克D-101大孔吸附樹酯，再用蒸餾水洗脫樹酯至無色，再用5L25%乙醇洗脫雜質，最後用5L95%乙醇洗脫得七葉總皂甙的乙醇提取液。濃縮該乙醇提取液至500毫升體積，加入5L丙酮，析出白色沉澱。濾取沉澱，置60℃真空乾燥得七葉總皂甙約15.0克。取七葉總皂甙15.0克，用500毫升蒸餾水加熱溶解、過濾，置冰櫃中放置30分鐘，收集析出的白色結晶。濾取結晶，用蒸餾水洗滌。置60℃真空乾燥，得通式Ⅰ七葉皂甙。剩下的水溶液，通過50克D-101大孔吸附樹酯，用95%乙醇500毫升洗脫得通式ⅠI七葉皂甙的乙醇液。濃縮該乙醇液至50毫升，置冰櫃中放置，濾取析出的白色片狀結晶，用蒸餾水洗滌，置60乾燥得通式ⅠI七葉皂甙。
其中通式Ⅰ七葉皂甙理化特徵如下：
m.p：253-256℃，
M（FAB-MS）：1153（M +Na），
IRcm：1649，1653，1708，1731，3404；
HNMR[δ]：1.61，1.87，1.92。
CNMR[δ]：129.1，136.8，167.8，170.8.。
通式ⅠI七葉皂甙為白色粉末，其理化特徵如下：
M（FAB-MS）：1153（M +Na），
IRcm：1074，1640，1713，1740，3409；
HNMR[δ]：1.56，1.92。
CNMR[δ]：129.5，136.8，168.5，170.7。
實施例2
凍乾粉針劑：通式（Ⅰ）七葉皂甙7毫克、通式（Ⅱ）七葉皂甙3毫克、注射用水適量。
將通式（Ⅰ）七葉皂甙和通式（Ⅱ）七葉皂甙用注射用水溶解，按常規凍乾粉針劑的方法製成凍乾粉針劑。
實施例3
注射液：通式（Ⅰ）七葉皂甙l毫克、通式（Ⅱ）七葉皂甙9毫克、0.9%生理鹽水至1000毫升。
用生理鹽水把通式（Ⅰ）七葉皂甙和通式（Ⅱ）七葉皂甙溶解，採用常規注射液的工藝製成注射液。
實施例4
片劑：通式（Ⅰ）七葉皂甙4毫克、通式（Ⅱ）七葉皂甙6毫克、澱粉20毫克、硬脂酸鎂5毫克。
採用常規片劑製備工藝製成片劑。
實施例5
滴眼液：通式（Ⅰ）七葉皂甙6毫克、通式（Ⅱ）七葉皂甙4毫克、0.9%生理鹽水1000毫升。
將上述組分配製成滴眼液。
實施例6
凝膠劑：通式（Ⅰ）七葉皂甙4.5毫克、通式（Ⅱ）七葉皂甙5.5毫克。
將上述組分作為活性成分，加入凝膠劑所用的常用賦形劑，採用常規的凝膠劑製備工藝製成凝膠劑。
實施例7
噴霧劑：通式（Ⅰ）七葉皂甙2.5毫克、通式（Ⅱ）七葉皂甙7.5毫克。
將上述組分作為活性成分，加入噴霧劑所用的常用賦形劑，採用常規的噴霧劑製備工藝製成噴霧劑。
試驗例1：抗炎試驗
試驗用藥物：七葉總皂甙（白色粉末），純度96.3%，通式（Ⅰ）七葉皂甙（純度98%），通式（Ⅱ）七葉皂甙（純度97%），其中通式（Ⅱ）七葉皂甙:通式（Ⅰ）七葉皂甙=4:6（重量比）。
以上藥物均經滅菌和滅熱源處理，用前以0.9%生理鹽水配成注射液。
試驗動物：25-30克健康昆明小鼠，雌雄各半。
給藥途徑：腹膜內給藥。
給藥劑量：0.7毫克/千克。
試驗方法：每組10隻小鼠，分別把藥物七葉總皂甙、和通式Ⅰ+通式ⅠI七葉皂甙腹膜內給藥，30分鐘後每鼠右耳滴二甲苯30微升（正反兩面），再過30分鐘後依次處死小鼠，用7.0毫米大孔器打下雙耳圓片，稱重，求出各鼠腫脹度（右耳重減去左耳重）。
結果如下表：
組別 | 對照 | 七葉總皂式 | 通式Ⅰ+通式ⅠI七葉皂忒 |
動物數 | 10 | 10 | 10 |
腫脹度 | 12.31±1.24 | 8.33±2.82*** | 8.73±2.64** |
抑腫率（%） | - | 32.33 | 29.08 |
與對照組比較，**P<0.01，***P<0.001。
由此可見，該發明藥物組合物所含活性成分的抗炎作用與現有的七葉總皂甙的抗炎作用基本在同一水平，彼此間差異無統計學意義。
試驗例2：抗滲出試驗
試驗用藥物：七葉總皂甙（白色粉末），純度96.3%，通式（Ⅰ）七葉皂甙（純度98%），通式（Ⅱ）七葉皂甙（純度97%），其中通式（Ⅱ）七葉皂甙:通式（Ⅰ）七葉皂甙=4:6（重量比）。
以上藥物均經滅菌和滅熱源處理，用前以0.9%生理鹽水配成注射液。
試驗動物：18-20克健康昆明小鼠，雌雄各半。
給藥途徑：皮下注射。
給藥劑量：1.4毫克/千克。
試驗方法：皮下注射下表所列的受試藥物或生理鹽水，40分鐘後靜脈注射0.55伊文思染液0.1毫克/千克，隨機腹膜內注射0.2%HAc0.3毫升/只，20分鐘後依次處死小鼠，剪開腹腔，用生理鹽水洗滌，將洗滌液吸出至10毫升離心管，離心3000轉每分x15分鐘，取上清液，在590nm處測定吸光度值，進行組間比較。
結果如下表：
組別 | 對照 | 七葉總皂甙 | 通.式1+通式ⅠI七葉皂式（4:6w/w） |
動物教 | 10 | 9 | 10 |
腫脹度 | 0.480+0.038 | 0.287±0.126*** | 0.338+0.058*** |
抑腫率（%） | - | 40.2 | 29.6 |
與對照組比較，**P<0.01，***P<0.001
可見，該發明藥物組合物所含活性成分的抗滲出作用與現有的七葉總皂甙鈉的作用基本在同一水平，彼此間差異無統計學意義。
試驗例3：急性毒性試驗
試驗動物：19-21克昆明小鼠，雌雄各半
試驗用藥物：七葉總皂甙（白色粉末），純度96.3%
通式（Ⅰ）七葉皂甙（純度98%），通式（Ⅱ）七葉皂甙（純度97%），其中通式（Ⅱ）七葉皂甙:通式（Ⅰ）七葉皂甙=4:6（重量比）。以上藥物均經滅菌和滅熱源處理，用前以0.9%生理鹽水配成注射液。
試驗劑量：選用6個劑量組，組間距經由預試驗結果決定。
給藥途徑：靜脈內給藥
試驗方法：將動物按體重隨機分為6組，每組10隻（雌雄各半），給藥後觀察動物反應情況，記錄7天內死亡動物分布。
結果如下
1.通式Ⅰ+通式ⅠI七葉皂甙的LD50
動物數 | 體重（克） | 劑量（毫克/千克） | 死亡數 | 死亡率（%） |
10 | 19.7±1.3 | 15.00 | 10 | 100 |
10 | 19.5±1.6 | 11.70 | 10 | 100 |
10 | 19.6±2.0 | 9.12 | 8 | 80 |
10 | 19.2±1.8 | 7.12 | 6 | 60 |
10 | 19.4±1.8 | 5.55 | 5 | 50 |
10 | 19.6±1.9 | 4.33 | 2 | 20 |
(1:K=1:0.78)
LD5 | LD50 | LD95 | 回歸方程 |
3.12 | 5.99 | 11.51 | E=0.487+5.803 log(D) |
1.80-4.54 | 4.56-7.08 | 8.51-17.80 |
2.七葉總皂甙的LD50
動物數 | 體重（克） | 劑量（毫克/千克） | 死亡教 | 死亡率（％） |
10 | 19.8±1.8 | 15.00 | 10 | 100 |
10 | 19.7±1.6 | 10.50 | 10 | 100 |
10 | 19.6+1.8 | 7.35 | 9 | 90 |
10 | 19.7±1.4 | 5.14 | 5 | 50 |
10 | 19.1±1.7 | 3.60 | 4 | 40 |
10 | 19.3±1.5 | 2.52 | 3 | 30 |
(1:K=1:0.75)
LD5 | LD50 | LD95 | 回歸方程 |
1.57 | 3.99 | 10.13 | E=2.56+4.061 log(D) |
0.54-2.47 | 2.91-5.06 | 7.03-23.20 |
3.通式Ⅰ七葉皂甙的LD50
動物數 | 體重（克） | 劑量（毫克/千克） | 死亡數 | 死亡率（％） |
10 | 18.8±1.0 | 7.00 | 8 | 80 |
10 | 19.0±0.7 | 5.25 | 8 | 80 |
10 | 19.0±0.9 | 3.94 | 5 | 50 |
10 | 19.2±0.4 | 2.95 | 2 | 20 |
10 | 19.0±0.0 | 2.21 | 1 | 10 |
10 | 19.2±0.4 | 1.66 | 0 | 0 |
(1:K=1:0.75)
LD5 | LD50 | LD95 | 回歸方程 |
1.96 | 4.12 | 8.65 | E=1.86+5.11 log(D) |
1.21-3.18 | 3.20-5.30 | 4.96-15.10 |
結果：該發明藥物組合物所含活性成分的LD50值與七葉總皂甙靜注的LD50值的比較
類別 | LD50值（毫克/千克） |
七葉總皂式 | 3.99 |
通式Ⅰ+通式ⅠI-七葉皂忒 | 5.99 |
通式Ⅰ七葉皂式 | 4.12 |
由此可見，該發明藥物組合物所含活性成分的LD50值明顯小於七葉總皂甙的LD50值，也就是說，該發明藥物組合物所含活性成分的毒性明顯降低。
榮譽表彰
2014年11月6日，《低毒的抗炎抗滲出藥物組合物》獲得第十六屆中國專利優秀獎。
