《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》是陸錦康和張光興於2001年8月10日申請的專利，該專利的申請號為011238860，公布號為CN1406946，公布日為2003年4月2日，發明人是張光興、陸錦康。
《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》公開了一種以肌苷（IR）為起始原料，用過量的醋酐將肌苷乙醯化，得到的乙醯化肌苷用Vilsmeier試劑氯化，得到氯－乙醯化肌苷，氯－乙醯化肌苷經脫乙醯基，得到氯化肌苷，再通入液態氨進行氨基化作用，將肌苷（IR）轉化為腺苷（AR）的生產方法。其中，所述的氯－乙醯化肌苷經脫乙醯基，得到的氯化肌苷，可以經過將產物－氯化肌苷分離，再通入液態氨進行氨基化作用，得到產物腺苷（AR）；也可以將氯－乙醯化肌苷經脫乙醯基得到氯化肌苷，不經過分離，直接升溫進行氨基化作用，將肌苷（IR）轉化為（AR）。
2005年，《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》獲得第四屆江蘇省專利項目獎銅獎。
基本介紹
- 中文名：以肌苷(IR)為起始原料用液氨法生產腺苷(AR)的新工藝
- 公布號：CN1406946
- 公布日：2003年4月2日
- 申請號：011238860
- 申請日：2001年8月10日
- 申請人：陸錦康、張光興
- 地址：江蘇省啟東市啟東港東首江蘇啟東藤尚生化有限公司
- 發明人：張光興、陸錦康
- 分類號：C07H19/16
- 代理機構：北京元中專利事務所
- 類別：發明專利
- 代理人：王明霞
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,附圖說明,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
腺苷（AR）與肌苷（IR）的結構類似，不同之處僅在於其嘌呤環上6-位處腺苷為-NH2，肌苷為＝0。它們都是核苷酸工業的重要原料放埋危，本身也都是藥物。通過一定的方法，腺苷（AR）與肌苷（IR）較易相互轉換。例如J.Amer.Chem.Soc.Vol.80，1669-1675，1958中發表了肌苷（IR）經苯基化保護以後，通過硫代反應，在6-位上接上-SH基，然後甲硫化，再在甲醇氨中經高壓反應生辨腿遷成腺苷（AR）。該工藝步驟多、收率低、產品質量達不到要求，工業化生產存在困難。而腺苷（AR）通過脫氨（化學脫氨或脫氨酶脫氨）可以獲得肌苷（IR）。
二十世紀八十年代以前，腺苷（AR）主要來自核糖核酸（RNA）降解，然後脫磷獲得。八十年代以後，日本開始用發酵法生產腺苷（AR）。但2001年8月前中國國內因無穩產菌株，發酵法生產腺苷（AR）在中國尚未工業化。用以上兩種方法生產腺苷（AR），成本都偏高，使以腺苷（AR）為原料的其它後續核苷酸類產品，如ATP，cAMP，CoA，Ara-A等在市場上缺乏競爭能力。
以往腺苷（AR）與肌苷（IR）這兩個產品的市場價格都是肌苷（IR）高於腺苷（AR）。但自九十年代國中國國內採用大規模工業發酵生產肌苷（IR）以來，肌苷的價格逐年降低，已經從七十年代的人民幣2400-2600元/公斤降至現在（2001年8月）的人民幣130-150元/公斤。所以，已不可能向以往那樣採用腺苷（AR）通過脫氨來獲得肌苷（IR）；而由於肌苷（IR）價格低廉，由肌苷（IR）製備腺苷（AR）則成為可能。這樣不但使腺炒寒殃苷（AR）的價格大大降低，而且將使其在國際市場上具有競爭能力。
發明內容
專利目的
《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》的目的在於提供以中國國內價廉易得的肌苷（IR）為起始原料，用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝，特別是以肌苷（IR）為起始原料，經過乙醯化、氯化、脫乙醯基、通入液態氨進行氨基化作用製備腺苷（AR）的新工藝。該工藝簡單、生產成本低、產率高、產品質量好。
技術方案
以肌苷（IR）為起始原料，將肌苷在過量醋酐存在下乙醯化，得到的乙醯化肌苷經氯化，得到氯-乙醯化肌苷，；-乙醯化肌苷脫乙醯基後，得到的氯化肌苷採用液氨氨化，得到產物腺苷（AR）。
《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》的另一技術方案為：以肌苷（IR）為起始原料，使肌苷在過量醋酐存在下乙醯化，得到的乙醯化肌苷經氯化，得到氯-乙醯化肌苷；氯-乙醯化肌苷經脫乙醯基，中間產物氯化肌苷不經過分離直接用液氨氨化得到產物腺苷。
具體步驟如下：
a）以肌苷（IR）為原料，在鹼性條件下將肌苷（IR）用過量的醋酐乙醯化，從反應混合物中收集生成物乙醯化肌苷；
b）將生成物乙醯化肌苷和溶解在溶劑中的Vilsmeier試劑/（氯亞甲基）-二甲基氯化銨添加到盛有上述溶劑的反應器中回流，冷卻後，將該反應液用鹼性水溶液中和，用溶劑抽提至少一次，溶劑層合併、乾燥、濃縮得氯-乙醯化肌苷；
c）將上述氯-乙醯化肌苷溶解於事先在0℃下被氨飽和的醇類溶劑中，反應液密封在0℃下放置反應5-30小時；反應後釋放剩餘的氨氣，經濃縮、乾燥，得到氯化肌苷結晶物；所述的醇類溶劑可以是甲醇、乙醇以及適合《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》的其它醇類；
d）將得到的氯化肌苷溶於液氨中，在一個密封的耐高壓反應器中逐漸升溫至90--130℃反應10--50小時；反應完成後，於室溫下緩慢減壓放出過量的氨，得棕黃-白色固體；將固體溶於適量的純水中重結晶得產物腺苷（AR）。
上述反應稱為四步反應法。
上述方法中，氯乙醯化肌苷的脫乙醯基和氨化也可以連續進行。就是將上述a-b步驟得到的氯-乙醯化肌苷溶解於事先在0℃下被氨飽謎紙和的甲醇、乙醇或其他醇類溶劑中，反應液密封在0℃下放置反應10-50小時；脫乙醯化反應完成之後，將反應液逐漸升溫至90--130℃反應10-50小時，反應混合物經過除氨、中和、結晶得到產物腺苷（AR）。
這種反應方式稱為三步反應法。
該發明中肌凶習鑽旬苷（IR）乙醯化一步中，所述的鹼性條件可以為砒啶、醇鈉以及適合該發明的其他有故疊姜狼機鹼。
該發明中乙醯化肌苷氯化為氯-乙醯化肌苷的反應中，所述的溶劑可以是氯仿、四氯化碳、二氯甲烷、苯、甲苯、THF、DMF等溶婆嫌遙劑一種或一種以上的組合，也可以採用適合該發明的其他溶劑。
上述腺苷的製備方法可以用如下的反應式描述：
以肌苷（IR）為起始原料合成腺苷（AR）的反應圖式：
該發明中，採用溶劑及反應物回收系統，將製備腺苷過程中所用的溶劑及過量的反應物，如氯仿、苯、酒精、甲醇、吡啶、醋酐、氨等均回收再利用，以降低生產成本、減少環境污染。所述的溶劑及反應物回收系統，可以採用常用的技術和方法。
改善效果
《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》以中國國內價廉易得的肌苷（IR）為原料，經過乙醯化，得到的乙醯化肌苷經氯化，得到氯-乙醯化肌苷；氯-乙醯化肌苷經脫乙醯基、氨化得到腺苷（AR）；本生產工藝步驟簡捷，產率高，AR/IR重量收率＞50％，確保用低於2公斤IR作1公斤AR，產品質量好，使腺苷（AR）的生產成本大大降低。
附圖說明
圖1是四步反應得到的產物（E）腺苷（AR）的質譜圖；
圖2a是腺苷（AR）標準品的紅外光譜圖；
圖2b是四步反應得到的產物（E）腺苷（AR）的紅外光譜圖；
圖3a是經過四步反應得到的產物（E）腺苷（AR）的色譜（HPLC）圖；
圖3b是經過三步反應得到的產物（E）腺苷（AR）的色譜（HPLC）圖；
圖4是四步反應得到的產物（E）腺苷（AR）的電位滴定圖。
權利要求
1.以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於將肌苷在鹼存在下用過量醋酐乙醯化，得到的乙醯化肌苷經氯化，得到氯-乙醯化肌苷；氯-乙醯化肌苷脫乙醯基後，得到的氯化肌苷採用液氨氨化得到產物腺苷。
2.以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於使肌苷在過量醋酐存在下乙醯化，得到的乙醯化肌苷經氯化，得到氯-乙醯化肌苷；氯-乙醯化肌苷脫乙醯基後，中間產物氯化肌苷不經過分離直接用液氨氨化得到產物腺苷。
3.根據權利要求1或2所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於所述的乙醯化反應中所用的鹼為吡啶或醇鈉。
4.根據權利要求3所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於所述的鹼優選吡啶。
5.根據權利要求1、2、4、或5所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於將乙醯化肌苷用Vilsmeier試劑氯化為氯-乙醯化肌苷；氯化反應的溫度控制在61℃±1℃。
6.根據權利要求1所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於將氯-乙醯化肌苷溶解於事先在0℃下被氨飽和的醇中，反應液密封，在小於0℃下放置反應5-30小時；反應後釋放剩餘的氨氣，經濃縮、乾燥，得到氯化肌苷結晶物。
7.根據權利要求1、2、4、5或7所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於將氯化肌苷溶於液氨中，在一個密封的耐高壓反應器中逐漸升溫至90-130℃反應10-50小時；反應完成後，於室溫下緩慢減壓放出過量的氨，得棕黃-白色固體產物腺苷。
8.根據權利要求2、4、5或7所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於乙醯化肌苷的脫乙醯基和氨化反應連續進行，步驟為：將氯-乙醯化肌苷溶解於事先在0℃下被氨飽和的甲醇中，反應液密封，在小於0℃下放置反應10--50小時後；將反應液逐漸升溫至90--130℃，反應15-40小時，反應混合物經過除氨、中和、重結晶得到產物腺苷。
9.根據權利要求1所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於反應步驟如下：
a）乙醯化反應：將反應物肌苷20公斤，醋酐32升添加到盛48升吡啶的反應罐中，在130℃-131℃下攪拌回流，用薄層層析監測反應，至約1小時薄層層析中反應物基本消失後，將反應液真空濃縮至吡啶和過量的醋酐基本除盡後，在小於5℃的環境下放置至析出沉澱；過濾收集沉澱物並用無水乙醇洗滌、乾燥，得乙醯化肌苷粗產物24公斤，熔點234-239℃；
b）氯化反應：將24公斤乙醯化肌苷和溶解在62.93升的氯仿中的16.32公斤Vilsmeier試劑添加到盛有64.25升氯仿的反應罐中回流，薄層層析監測反應至反應物乙醯化肌苷基本消失；冷卻後，將該反應液在攪拌下滴加到飽和碳酸氫鈉溶液中；水層用氯仿抽提兩次後，合併氯仿層，加無水硫酸鎂於室溫下乾燥，然後，真空濃縮得淡黃色的漿狀物氯-乙醯化肌苷粗產物44.15公斤；
c）脫乙醯基反應：將產物氯-乙醯化肌苷溶解在100升事先在0℃下被約30公斤液氨飽和的甲醇中，反應液密封並在小於0℃下放置15小時；減壓釋放並回收剩餘的氨氣後，真空濃縮至氨和甲醇基本除盡，產物氯化肌苷結晶出來；將氯化肌苷結晶物在室溫下真空乾燥，得粗產物氯化肌苷12.619公斤；熔點182-183.5℃；
d）氨化反應：將反應產物氯化肌苷12.619公斤溶於25公斤液氨中，在一個密封的耐高壓反應器中逐漸升溫至110℃，保持30小時，反應完成後，於室溫下緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體腺苷10.44公斤，熔點233-234℃；總的重量收率：52.2％。
10.根據權利要求2所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於包括如下步驟：
a）乙醯化反應：將反應物肌苷20公斤，醋酐32升添加到盛有48升吡啶的反應罐中，在130℃-131℃下攪拌回流，用薄層層析監測反應，至反應物基本消失；將反應液真空濃縮至吡啶和過量的醋酐基本除盡後，在小於5℃的環境下放置至析出沉澱；過濾收集沉澱物並用無水乙醇洗滌、乾燥，得乙醯化肌苷粗產物24公斤，熔點234-239℃；
b）氯化反應：將24公斤乙醯化肌苷和溶解在62.93升的氯仿中的16.32公斤Vilsmeier試劑，添加到盛有64.25升氯仿的反應罐中回流，薄層層析監測反應至反應物乙醯化肌苷基本消失；冷卻後，將該反應液滴加到飽和碳酸氫鈉溶液中；水層用氯仿抽提兩次後，合併氯仿層，加無水硫酸鎂乾燥；然後，真空濃縮得淡黃色的漿狀物氯-乙醯化肌苷粗產物44.15公斤；
c）脫乙醯反應--氨化反應合併進行：44.15公斤產物氯-乙醯化肌苷溶解在65.8升予先在0℃下被約用30公斤液氨飽和的甲醇中；密封的反應液在小於0℃下放置反應15小時後，逐漸升溫至110℃，保持30小時；冷卻至室溫，緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體產物腺苷12.86公斤；熔點：233℃；總的重量收率64.3％；
11.根據權利要求10所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於將產物腺苷徹底除淨氨後，加適量純水溶解；用鹽酸調至pH2.0-3.0，加活性炭脫色後，過濾；濾液再調至pH4.5-5.0，冷放置，待析出沉澱，濾去沉澱物；上清液調pH11在小於0℃放置過夜，腺苷結晶析出。
實施方式
實施例1
採用四步反應法製備腺苷：
a）乙醯化反應：將反應物（A）肌苷（IR）20公斤（74.56摩爾），醋酐32升添加到盛有48升吡啶的反應罐中，在130℃-131℃下攪拌回流。用矽膠塗布厚度0.25毫米的薄層層析（TLC）監測反應反應約1小時，待薄層層析中反應物肌苷基本消失後，將反應液真空濃縮至吡啶和過量的醋酐基本除盡後，在小於5℃的環境下放置至析出沉澱。過濾收集沉澱物並用無水乙醇洗滌、乾燥，得乙醯化肌苷（B）粗產物24公斤。熔點234-239℃。重量收率120％。
TLC的展層系統為氯仿:甲醇＝9:1；產物（B）乙醯化肌苷Rf≈0.5。
b）氯化反應：將24公斤反應a）得到的產物（B）乙醯化肌苷和溶解在62.93升氯仿中的16.32公斤Vilsmeier試劑：（氯亞甲基）-二甲基氯化銨添加到盛有64.25升氯仿的反應罐中，在61℃±1℃下回流。薄層層析監測反應，反應約1小時後，待反應物（B）乙醯化肌苷基本消失。冷卻後，將該反應混合物溶液在攪拌下滴加到132升飽和碳酸氫鈉溶液中，室溫下1小時滴完。此時，反應液分層。水層用33升氯仿抽提兩次後，合併氯仿層，加無水硫酸鎂（MgSO4）4.8公斤於室溫下乾燥至少0.5小時；然後，在30℃下，真空濃縮得淡黃色的漿狀物（C）氯-乙醯化肌苷粗產物44.15公斤。
TLC的展層系統為氯仿:甲醇＝9:1；產物（C）氯-乙醯化肌苷Rf≈0.8。
c）脫乙醯基反應：將產物（C）氯-乙醯化肌苷溶解在100升事先在0℃下被約30公斤液氨飽和的甲醇中，反應液密封並在0℃下放置15小時。減壓釋放並回收剩餘的氨氣後，在30-32℃下真空濃縮至氨和甲醇基本除盡，產物（D）氯化肌苷結晶出來。將氯化肌苷結晶物在室溫下真空乾燥，得薄層層析下顯示均一的一個斑點，即粗產物（D）氯化肌苷12.619公斤。熔點182-183.5℃。對產物B的重量收率為52.58％。該產物可在甲醇中重結晶。
TLC的展層系統為氯仿:甲醇＝4:1。
d）氨化反應：將反應產物（D）氯化肌苷12.619公斤溶於25公斤液氨中（氯化肌苷:液氨摩爾比為1:33），在一個密封的耐高壓反應器中逐漸升溫至110℃，保持30小時。罐壓在79公斤——74公斤變化。反應完成後，於室溫下緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體。將固體溶於適量的純水中再結晶得產物（E）腺苷（AR）10.44公斤。熔點233-234℃。重量收率82.73％。質譜測定證明符合腺苷（AR）的分子量；紅外光譜測定證明具有腺苷的特徵峰，並與標準腺苷（AR）的紅外光譜圖一致；色譜（HPLC）測定純度：＞99.50％；電位滴定法證明含量＞98％，如附圖1-4所示。以上主要指標，符合《美國藥典》USP24，2000年版質量標準。
反應的重量總收率為：10.44/20×100％＝52.2％。
採用溶劑及反應物回收系統：將製備腺苷過程中所用的溶劑及過量的反應物，如氯仿、甲醇、吡啶、醋酐、氨等均回收再利用，以降低生產成本、減少環境污染。所述的溶劑及反應物回收系統可以採用常用的技術和方法。
實施例2
採用三步法合成腺苷：反應a）-b）的工藝與實施例1相同，所不同的是將反應c）和d）的脫乙醯基反應與氨化反應二步合併為一步完成，反應c）的產物無需分離，具體操作如下：
將44.15公斤產物（C）氯-乙醯化肌苷溶解在65.8升事先在0℃下被約30公斤液氨飽和的甲醇中，密封的反應液在0℃下放置反應15小時。反應完成後，逐漸升溫至110℃，保持30小時。罐壓維持在74公斤---79公斤。反應完成後，冷卻至室溫，緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體產物（E）腺苷（AR）12.86公斤。熔點：233℃。色譜（HPLC）純度：99.15％。含量（電位滴定）：93-95％。相對於產物（B）的重量收率為53.58％；總收率為：12.86/20×100％＝64.3％。
該實施例1和2得到的腺苷可以通過重結晶進一步純化，具體方法如下：將產物（E）腺苷（AR）徹底除淨氨後，加適量純水溶解。然後，用6N鹽酸調pH2.0-3.0，加活性炭脫色後，過濾；濾液再調pH4.5-5.0，冷放置，待析出沉澱。濾去沉澱物。上清液調pH11放置冷庫過夜，有大量腺苷（AR）結晶析出。過濾收集結晶、乾燥。母液回收。得到符合《美國藥典》USP24，2000年版質量標準的腺苷。
比較實施例1和2可以看出，“三步法”收率比“四步法”高12個百分點左右，但“三步法”得到的腺苷產物（E）純度不如“四步法”。“三步法”得到的腺苷產物，須重結晶精製後，才能達到《美國藥典》USP24，2000年版質量標準。
實施例3
採用四步反應法製備腺苷：
a）乙醯化反應：將反應物（A）肌苷（IR）20公斤，醋酐20升添加到盛有乙醇鈉2公斤的反應罐中，攪拌回流並用薄層層析監測反應，至約2小時。薄層層析中反應物基本消失後，將反應液真空濃縮至過量的醋酐基本除盡後，在小於5℃的環境下放置至析出沉澱。過濾收集沉澱物並用無水乙醇洗滌、乾燥，得產物（B）乙醯化肌苷25公斤。熔點234-238℃。重量收率125％。
b）氯化反應：將25公斤反應a）得到的產物（B）乙醯化肌苷和溶解在50升苯中的12公斤Vilsmeier試劑[（氯亞甲基）-二甲基氯化銨]添加到盛有50升苯的反應罐中，加熱回流，薄層層析監測反應，約2小時後，反應物（B）乙醯化肌苷基本消失。冷卻後，將該反應液在攪拌下滴加到飽和碳酸氫鈉溶液中，水層用氯仿抽提兩次後，合併氯仿層，加無水硫酸鎂於室溫下乾燥；然後，真空濃縮得淡黃色的漿狀物（C）氯-乙醯化肌苷46.95公斤。
c）脫乙醯基反應：將產物（C）氯-乙醯化肌苷溶解在80升事先在-5℃下被液氨飽和的乙醇中，反應液密封並在小於-5℃下放置30小時。減壓釋放並回收剩餘的氨氣後，真空濃縮至氨和甲醇基本除盡，產物（D）氯化肌苷結晶出來。將氯化肌苷結晶物在室溫下真空乾燥，得產物（D）氯化肌苷14.1公斤。熔點182-183℃。對產物B的重量收率為56.4％。該產物可在甲醇中再結晶。
d）氨化反應：按照氯化肌苷:液氨摩爾比為1:25將反應產物氯化肌苷14.1公斤溶於液氨中，在一個密封的耐高壓反應器中逐漸升溫至130℃，保持10小時。反應完成後，於室溫下緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體。將固體溶於適量的純水中重結晶得產物（E）腺苷（AR）11.22公斤。熔點233-234℃。重量收率86.66％。經測定符合《美國藥典》USP24，2000年版質量標準。
e）重量總收率：11.22/20×100％＝56.1％。
實施例4
採用三步法合成腺苷：反應a）-b）的工藝與實施例3相同，所不同的是將反應c）和d）的脫乙醯基反應與氨化反應二步合併為一步完成，反應c）的產物無需分離，具體操作如下：將46.95公斤產物（C）氯-乙醯化肌苷溶解在50升事先在0℃下被液氨飽和的甲醇中，密封的反應液在0℃下放置反應5小時，反應完成後，逐漸升溫至90℃，保持50小時。反應完成後，冷卻至室溫，緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體產物（E）腺苷（AR）14.55公斤。熔點：233℃。色譜（HPLC）純度：99.15％。含量（電位滴定）：93-95％。相對於產物（B）的重量收率為：58.2％；重量總收率為：14.55/20×100％＝72.75％。
該實施例3、4得到的腺苷可以通過重結晶進一步純化，具體方法如下：將產物（E）腺苷（AR）徹底除淨氨後，加適量純水溶解。然後，用6N鹽酸調pH2.0-3.0，加活性炭脫色後，過濾；濾液再調pH4.5-5.0，冷放置，待析出沉澱。濾去沉澱物。上清液調pH11放置冷庫過夜，有大量腺苷（AR）結晶析出。過濾收集結晶、乾燥。母液回收。得到符合《美國藥典》USP24,2000年版質量標準的腺苷。
實施例中，電位滴定的方法為：稱腺苷樣品（AR）0.1996克，在充分攪拌下溶於一定量的乙酸溶液中，用高氯酸的乙酸標準溶液（0.02642摩爾/升）滴定至終點。27.5毫升高氯酸乙酸標準溶液，相當於98.28％成品腺苷（AR）含量（以乾燥品計）。
榮譽表彰
2005年，《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》獲得第四屆江蘇省專利項目獎銅獎。
技術方案
以肌苷（IR）為起始原料，將肌苷在過量醋酐存在下乙醯化，得到的乙醯化肌苷經氯化，得到氯-乙醯化肌苷，；-乙醯化肌苷脫乙醯基後，得到的氯化肌苷採用液氨氨化，得到產物腺苷（AR）。
《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》的另一技術方案為：以肌苷（IR）為起始原料，使肌苷在過量醋酐存在下乙醯化，得到的乙醯化肌苷經氯化，得到氯-乙醯化肌苷；氯-乙醯化肌苷經脫乙醯基，中間產物氯化肌苷不經過分離直接用液氨氨化得到產物腺苷。
具體步驟如下：
a）以肌苷（IR）為原料，在鹼性條件下將肌苷（IR）用過量的醋酐乙醯化，從反應混合物中收集生成物乙醯化肌苷；
b）將生成物乙醯化肌苷和溶解在溶劑中的Vilsmeier試劑/（氯亞甲基）-二甲基氯化銨添加到盛有上述溶劑的反應器中回流，冷卻後，將該反應液用鹼性水溶液中和，用溶劑抽提至少一次，溶劑層合併、乾燥、濃縮得氯-乙醯化肌苷；
c）將上述氯-乙醯化肌苷溶解於事先在0℃下被氨飽和的醇類溶劑中，反應液密封在0℃下放置反應5-30小時；反應後釋放剩餘的氨氣，經濃縮、乾燥，得到氯化肌苷結晶物；所述的醇類溶劑可以是甲醇、乙醇以及適合《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》的其它醇類；
d）將得到的氯化肌苷溶於液氨中，在一個密封的耐高壓反應器中逐漸升溫至90--130℃反應10--50小時；反應完成後，於室溫下緩慢減壓放出過量的氨，得棕黃-白色固體；將固體溶於適量的純水中重結晶得產物腺苷（AR）。
上述反應稱為四步反應法。
上述方法中，氯乙醯化肌苷的脫乙醯基和氨化也可以連續進行。就是將上述a-b步驟得到的氯-乙醯化肌苷溶解於事先在0℃下被氨飽和的甲醇、乙醇或其他醇類溶劑中，反應液密封在0℃下放置反應10-50小時；脫乙醯化反應完成之後，將反應液逐漸升溫至90--130℃反應10-50小時，反應混合物經過除氨、中和、結晶得到產物腺苷（AR）。
這種反應方式稱為三步反應法。
該發明中肌苷（IR）乙醯化一步中，所述的鹼性條件可以為砒啶、醇鈉以及適合該發明的其他有機鹼。
該發明中乙醯化肌苷氯化為氯-乙醯化肌苷的反應中，所述的溶劑可以是氯仿、四氯化碳、二氯甲烷、苯、甲苯、THF、DMF等溶劑一種或一種以上的組合，也可以採用適合該發明的其他溶劑。
上述腺苷的製備方法可以用如下的反應式描述：
以肌苷（IR）為起始原料合成腺苷（AR）的反應圖式：
該發明中，採用溶劑及反應物回收系統，將製備腺苷過程中所用的溶劑及過量的反應物，如氯仿、苯、酒精、甲醇、吡啶、醋酐、氨等均回收再利用，以降低生產成本、減少環境污染。所述的溶劑及反應物回收系統，可以採用常用的技術和方法。
改善效果
《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》以中國國內價廉易得的肌苷（IR）為原料，經過乙醯化，得到的乙醯化肌苷經氯化，得到氯-乙醯化肌苷；氯-乙醯化肌苷經脫乙醯基、氨化得到腺苷（AR）；本生產工藝步驟簡捷，產率高，AR/IR重量收率＞50％，確保用低於2公斤IR作1公斤AR，產品質量好，使腺苷（AR）的生產成本大大降低。
附圖說明
圖1是四步反應得到的產物（E）腺苷（AR）的質譜圖；
圖2a是腺苷（AR）標準品的紅外光譜圖；
圖2b是四步反應得到的產物（E）腺苷（AR）的紅外光譜圖；
圖3a是經過四步反應得到的產物（E）腺苷（AR）的色譜（HPLC）圖；
圖3b是經過三步反應得到的產物（E）腺苷（AR）的色譜（HPLC）圖；
圖4是四步反應得到的產物（E）腺苷（AR）的電位滴定圖。
權利要求
1.以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於將肌苷在鹼存在下用過量醋酐乙醯化，得到的乙醯化肌苷經氯化，得到氯-乙醯化肌苷；氯-乙醯化肌苷脫乙醯基後，得到的氯化肌苷採用液氨氨化得到產物腺苷。
2.以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於使肌苷在過量醋酐存在下乙醯化，得到的乙醯化肌苷經氯化，得到氯-乙醯化肌苷；氯-乙醯化肌苷脫乙醯基後，中間產物氯化肌苷不經過分離直接用液氨氨化得到產物腺苷。
3.根據權利要求1或2所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於所述的乙醯化反應中所用的鹼為吡啶或醇鈉。
4.根據權利要求3所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於所述的鹼優選吡啶。
5.根據權利要求1、2、4、或5所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於將乙醯化肌苷用Vilsmeier試劑氯化為氯-乙醯化肌苷；氯化反應的溫度控制在61℃±1℃。
6.根據權利要求1所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於將氯-乙醯化肌苷溶解於事先在0℃下被氨飽和的醇中，反應液密封，在小於0℃下放置反應5-30小時；反應後釋放剩餘的氨氣，經濃縮、乾燥，得到氯化肌苷結晶物。
7.根據權利要求1、2、4、5或7所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於將氯化肌苷溶於液氨中，在一個密封的耐高壓反應器中逐漸升溫至90-130℃反應10-50小時；反應完成後，於室溫下緩慢減壓放出過量的氨，得棕黃-白色固體產物腺苷。
8.根據權利要求2、4、5或7所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於乙醯化肌苷的脫乙醯基和氨化反應連續進行，步驟為：將氯-乙醯化肌苷溶解於事先在0℃下被氨飽和的甲醇中，反應液密封，在小於0℃下放置反應10--50小時後；將反應液逐漸升溫至90--130℃，反應15-40小時，反應混合物經過除氨、中和、重結晶得到產物腺苷。
9.根據權利要求1所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於反應步驟如下：
a）乙醯化反應：將反應物肌苷20公斤，醋酐32升添加到盛48升吡啶的反應罐中，在130℃-131℃下攪拌回流，用薄層層析監測反應，至約1小時薄層層析中反應物基本消失後，將反應液真空濃縮至吡啶和過量的醋酐基本除盡後，在小於5℃的環境下放置至析出沉澱；過濾收集沉澱物並用無水乙醇洗滌、乾燥，得乙醯化肌苷粗產物24公斤，熔點234-239℃；
b）氯化反應：將24公斤乙醯化肌苷和溶解在62.93升的氯仿中的16.32公斤Vilsmeier試劑添加到盛有64.25升氯仿的反應罐中回流，薄層層析監測反應至反應物乙醯化肌苷基本消失；冷卻後，將該反應液在攪拌下滴加到飽和碳酸氫鈉溶液中；水層用氯仿抽提兩次後，合併氯仿層，加無水硫酸鎂於室溫下乾燥，然後，真空濃縮得淡黃色的漿狀物氯-乙醯化肌苷粗產物44.15公斤；
c）脫乙醯基反應：將產物氯-乙醯化肌苷溶解在100升事先在0℃下被約30公斤液氨飽和的甲醇中，反應液密封並在小於0℃下放置15小時；減壓釋放並回收剩餘的氨氣後，真空濃縮至氨和甲醇基本除盡，產物氯化肌苷結晶出來；將氯化肌苷結晶物在室溫下真空乾燥，得粗產物氯化肌苷12.619公斤；熔點182-183.5℃；
d）氨化反應：將反應產物氯化肌苷12.619公斤溶於25公斤液氨中，在一個密封的耐高壓反應器中逐漸升溫至110℃，保持30小時，反應完成後，於室溫下緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體腺苷10.44公斤，熔點233-234℃；總的重量收率：52.2％。
10.根據權利要求2所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於包括如下步驟：
a）乙醯化反應：將反應物肌苷20公斤，醋酐32升添加到盛有48升吡啶的反應罐中，在130℃-131℃下攪拌回流，用薄層層析監測反應，至反應物基本消失；將反應液真空濃縮至吡啶和過量的醋酐基本除盡後，在小於5℃的環境下放置至析出沉澱；過濾收集沉澱物並用無水乙醇洗滌、乾燥，得乙醯化肌苷粗產物24公斤，熔點234-239℃；
b）氯化反應：將24公斤乙醯化肌苷和溶解在62.93升的氯仿中的16.32公斤Vilsmeier試劑，添加到盛有64.25升氯仿的反應罐中回流，薄層層析監測反應至反應物乙醯化肌苷基本消失；冷卻後，將該反應液滴加到飽和碳酸氫鈉溶液中；水層用氯仿抽提兩次後，合併氯仿層，加無水硫酸鎂乾燥；然後，真空濃縮得淡黃色的漿狀物氯-乙醯化肌苷粗產物44.15公斤；
c）脫乙醯反應--氨化反應合併進行：44.15公斤產物氯-乙醯化肌苷溶解在65.8升予先在0℃下被約用30公斤液氨飽和的甲醇中；密封的反應液在小於0℃下放置反應15小時後，逐漸升溫至110℃，保持30小時；冷卻至室溫，緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體產物腺苷12.86公斤；熔點：233℃；總的重量收率64.3％；
11.根據權利要求10所述的以肌苷為起始原料、液氨法生產腺苷的新工藝，其特徵在於將產物腺苷徹底除淨氨後，加適量純水溶解；用鹽酸調至pH2.0-3.0，加活性炭脫色後，過濾；濾液再調至pH4.5-5.0，冷放置，待析出沉澱，濾去沉澱物；上清液調pH11在小於0℃放置過夜，腺苷結晶析出。
實施方式
實施例1
採用四步反應法製備腺苷：
a）乙醯化反應：將反應物（A）肌苷（IR）20公斤（74.56摩爾），醋酐32升添加到盛有48升吡啶的反應罐中，在130℃-131℃下攪拌回流。用矽膠塗布厚度0.25毫米的薄層層析（TLC）監測反應反應約1小時，待薄層層析中反應物肌苷基本消失後，將反應液真空濃縮至吡啶和過量的醋酐基本除盡後，在小於5℃的環境下放置至析出沉澱。過濾收集沉澱物並用無水乙醇洗滌、乾燥，得乙醯化肌苷（B）粗產物24公斤。熔點234-239℃。重量收率120％。
TLC的展層系統為氯仿:甲醇＝9:1；產物（B）乙醯化肌苷Rf≈0.5。
b）氯化反應：將24公斤反應a）得到的產物（B）乙醯化肌苷和溶解在62.93升氯仿中的16.32公斤Vilsmeier試劑：（氯亞甲基）-二甲基氯化銨添加到盛有64.25升氯仿的反應罐中，在61℃±1℃下回流。薄層層析監測反應，反應約1小時後，待反應物（B）乙醯化肌苷基本消失。冷卻後，將該反應混合物溶液在攪拌下滴加到132升飽和碳酸氫鈉溶液中，室溫下1小時滴完。此時，反應液分層。水層用33升氯仿抽提兩次後，合併氯仿層，加無水硫酸鎂（MgSO4）4.8公斤於室溫下乾燥至少0.5小時；然後，在30℃下，真空濃縮得淡黃色的漿狀物（C）氯-乙醯化肌苷粗產物44.15公斤。
TLC的展層系統為氯仿:甲醇＝9:1；產物（C）氯-乙醯化肌苷Rf≈0.8。
c）脫乙醯基反應：將產物（C）氯-乙醯化肌苷溶解在100升事先在0℃下被約30公斤液氨飽和的甲醇中，反應液密封並在0℃下放置15小時。減壓釋放並回收剩餘的氨氣後，在30-32℃下真空濃縮至氨和甲醇基本除盡，產物（D）氯化肌苷結晶出來。將氯化肌苷結晶物在室溫下真空乾燥，得薄層層析下顯示均一的一個斑點，即粗產物（D）氯化肌苷12.619公斤。熔點182-183.5℃。對產物B的重量收率為52.58％。該產物可在甲醇中重結晶。
TLC的展層系統為氯仿:甲醇＝4:1。
d）氨化反應：將反應產物（D）氯化肌苷12.619公斤溶於25公斤液氨中（氯化肌苷:液氨摩爾比為1:33），在一個密封的耐高壓反應器中逐漸升溫至110℃，保持30小時。罐壓在79公斤——74公斤變化。反應完成後，於室溫下緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體。將固體溶於適量的純水中再結晶得產物（E）腺苷（AR）10.44公斤。熔點233-234℃。重量收率82.73％。質譜測定證明符合腺苷（AR）的分子量；紅外光譜測定證明具有腺苷的特徵峰，並與標準腺苷（AR）的紅外光譜圖一致；色譜（HPLC）測定純度：＞99.50％；電位滴定法證明含量＞98％，如附圖1-4所示。以上主要指標，符合《美國藥典》USP24，2000年版質量標準。
反應的重量總收率為：10.44/20×100％＝52.2％。
採用溶劑及反應物回收系統：將製備腺苷過程中所用的溶劑及過量的反應物，如氯仿、甲醇、吡啶、醋酐、氨等均回收再利用，以降低生產成本、減少環境污染。所述的溶劑及反應物回收系統可以採用常用的技術和方法。
實施例2
採用三步法合成腺苷：反應a）-b）的工藝與實施例1相同，所不同的是將反應c）和d）的脫乙醯基反應與氨化反應二步合併為一步完成，反應c）的產物無需分離，具體操作如下：
將44.15公斤產物（C）氯-乙醯化肌苷溶解在65.8升事先在0℃下被約30公斤液氨飽和的甲醇中，密封的反應液在0℃下放置反應15小時。反應完成後，逐漸升溫至110℃，保持30小時。罐壓維持在74公斤---79公斤。反應完成後，冷卻至室溫，緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體產物（E）腺苷（AR）12.86公斤。熔點：233℃。色譜（HPLC）純度：99.15％。含量（電位滴定）：93-95％。相對於產物（B）的重量收率為53.58％；總收率為：12.86/20×100％＝64.3％。
該實施例1和2得到的腺苷可以通過重結晶進一步純化，具體方法如下：將產物（E）腺苷（AR）徹底除淨氨後，加適量純水溶解。然後，用6N鹽酸調pH2.0-3.0，加活性炭脫色後，過濾；濾液再調pH4.5-5.0，冷放置，待析出沉澱。濾去沉澱物。上清液調pH11放置冷庫過夜，有大量腺苷（AR）結晶析出。過濾收集結晶、乾燥。母液回收。得到符合《美國藥典》USP24，2000年版質量標準的腺苷。
比較實施例1和2可以看出，“三步法”收率比“四步法”高12個百分點左右，但“三步法”得到的腺苷產物（E）純度不如“四步法”。“三步法”得到的腺苷產物，須重結晶精製後，才能達到《美國藥典》USP24，2000年版質量標準。
實施例3
採用四步反應法製備腺苷：
a）乙醯化反應：將反應物（A）肌苷（IR）20公斤，醋酐20升添加到盛有乙醇鈉2公斤的反應罐中，攪拌回流並用薄層層析監測反應，至約2小時。薄層層析中反應物基本消失後，將反應液真空濃縮至過量的醋酐基本除盡後，在小於5℃的環境下放置至析出沉澱。過濾收集沉澱物並用無水乙醇洗滌、乾燥，得產物（B）乙醯化肌苷25公斤。熔點234-238℃。重量收率125％。
b）氯化反應：將25公斤反應a）得到的產物（B）乙醯化肌苷和溶解在50升苯中的12公斤Vilsmeier試劑[（氯亞甲基）-二甲基氯化銨]添加到盛有50升苯的反應罐中，加熱回流，薄層層析監測反應，約2小時後，反應物（B）乙醯化肌苷基本消失。冷卻後，將該反應液在攪拌下滴加到飽和碳酸氫鈉溶液中，水層用氯仿抽提兩次後，合併氯仿層，加無水硫酸鎂於室溫下乾燥；然後，真空濃縮得淡黃色的漿狀物（C）氯-乙醯化肌苷46.95公斤。
c）脫乙醯基反應：將產物（C）氯-乙醯化肌苷溶解在80升事先在-5℃下被液氨飽和的乙醇中，反應液密封並在小於-5℃下放置30小時。減壓釋放並回收剩餘的氨氣後，真空濃縮至氨和甲醇基本除盡，產物（D）氯化肌苷結晶出來。將氯化肌苷結晶物在室溫下真空乾燥，得產物（D）氯化肌苷14.1公斤。熔點182-183℃。對產物B的重量收率為56.4％。該產物可在甲醇中再結晶。
d）氨化反應：按照氯化肌苷:液氨摩爾比為1:25將反應產物氯化肌苷14.1公斤溶於液氨中，在一個密封的耐高壓反應器中逐漸升溫至130℃，保持10小時。反應完成後，於室溫下緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體。將固體溶於適量的純水中重結晶得產物（E）腺苷（AR）11.22公斤。熔點233-234℃。重量收率86.66％。經測定符合《美國藥典》USP24，2000年版質量標準。
e）重量總收率：11.22/20×100％＝56.1％。
實施例4
採用三步法合成腺苷：反應a）-b）的工藝與實施例3相同，所不同的是將反應c）和d）的脫乙醯基反應與氨化反應二步合併為一步完成，反應c）的產物無需分離，具體操作如下：將46.95公斤產物（C）氯-乙醯化肌苷溶解在50升事先在0℃下被液氨飽和的甲醇中，密封的反應液在0℃下放置反應5小時，反應完成後，逐漸升溫至90℃，保持50小時。反應完成後，冷卻至室溫，緩慢減壓釋放氨至基本除盡，得棕黃-白色固體產物（E）腺苷（AR）14.55公斤。熔點：233℃。色譜（HPLC）純度：99.15％。含量（電位滴定）：93-95％。相對於產物（B）的重量收率為：58.2％；重量總收率為：14.55/20×100％＝72.75％。
該實施例3、4得到的腺苷可以通過重結晶進一步純化，具體方法如下：將產物（E）腺苷（AR）徹底除淨氨後，加適量純水溶解。然後，用6N鹽酸調pH2.0-3.0，加活性炭脫色後，過濾；濾液再調pH4.5-5.0，冷放置，待析出沉澱。濾去沉澱物。上清液調pH11放置冷庫過夜，有大量腺苷（AR）結晶析出。過濾收集結晶、乾燥。母液回收。得到符合《美國藥典》USP24,2000年版質量標準的腺苷。
實施例中，電位滴定的方法為：稱腺苷樣品（AR）0.1996克，在充分攪拌下溶於一定量的乙酸溶液中，用高氯酸的乙酸標準溶液（0.02642摩爾/升）滴定至終點。27.5毫升高氯酸乙酸標準溶液，相當於98.28％成品腺苷（AR）含量（以乾燥品計）。
榮譽表彰
2005年，《以肌苷（IR）為起始原料用液氨法生產腺苷（AR）的新工藝》獲得第四屆江蘇省專利項目獎銅獎。
