基本介紹
- 中文名：不皂化物含量
- 外文名：the Content ofUnsaponifiables
乙醚提取法,己烷提取法,
乙醚提取法
範圍
GB/T 5535的本部分規定了用乙醚提取法測定動植物油脂不皂化物含量的方法。
本部分適用於一般動植物油脂不皂化合物含量的測定。本部分不適用於蠟。對於某些不皂化合物含量高的油脂，如海產動物油脂，僅能得到近似結果。
當氣候條件或規定不允許使用乙醚時，可使用GB/T 5535.2的方法。
規範性引用檔案
下列檔案中的條款，通過在GB/T 5535的本部分中引用而成為本部分的條款。凡是注日期的飲用檔案，其隨後所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用於本部分，然而，鼓勵根據本部分達成的各方研究是否可使用這些檔案的最新版本。凡是不注日期的引用檔案，其最新版本適用於本部分。
GB/T 15687 油脂試樣製備（GB/T 15687-1995， eqv ISO 661:1989）
術語和定義
下列術語和定義適用於GB/T 5535的本部分。
不皂化物
用氫氧化鉀皂化後的全部生成物用指定溶劑提取，在規定的範圍條件下不揮發的所有物質。
原理
油脂與氫氧化鉀乙醇溶液在煮沸回流條件下進行皂化，用乙醚從皂化液中提取不皂化物，蒸發溶劑並對殘留物乾燥後稱量。
試劑
本部分使用的試劑均為分析純，水為蒸餾水、去離子水或等同純度的水。
乙醚：新蒸過，不含過氧化物或殘留物。
丙酮。
酚酞指示劑溶液：10g/L的95%（體積分數）乙醇溶液。
儀器
圓底燒瓶：帶標準磨口的250mL圓底燒瓶。
回流冷凝管：具有與圓底燒瓶配套的磨口。
500mL分液漏斗：使用聚四氟乙烯旋塞和瓶塞。
水浴鍋。
電烘箱：可控制在103℃±2℃。
扦樣
扦樣不是本部分規定的內容，推薦採用ISO 5555的方法。
實驗室收到的樣品應具有代表性，在運輸和存儲過程中不應受損或改變。
試樣製備
按GB/T 15687執行。
操作步驟
試樣
稱取約5g試樣，精確至0.01 g，置於250 mL燒瓶中。
皂化
加入50 mL氫氧化鉀一乙醇溶液和一些沸石。燒瓶與回流冷凝管(6.2)連線好後，小心煮沸回流1h。停止加熱，從回流管頂部加入100 mL水並旋轉搖動。
如果提取的不皂化物用於測定生育酚，則必須添加聯苯三酚且儘快地完成操作(30 min以內)。
不皂化物的提取
冷卻後轉移皂化液到500 mL分液漏斗，用100 mL乙醚分幾次洗滌燒瓶和沸石，並將洗液倒入分液漏斗。蓋好塞子，倒轉分液漏斗，用力搖1 min，小心打開旋塞，間歇地釋放內部壓力。靜置分層後，將下層皂化液儘量完全放入第二隻分液漏斗中。如果形成乳化液，可加少量乙醇或濃氫氧化鉀或氯化鈉溶液進行破乳。採用相同的方法，每次用100 mL乙醚再提取皂化液兩次，收集三次乙醚提取液放入裝有40 mL水的分液漏斗中。
乙醚提取液的洗滌
輕輕轉動裝有提取液和40 mL水的分液漏斗。
警告：劇烈的搖動可能會形成乳化液。
等待完全分層後棄去下面水層。用40 mL水再洗滌乙醚溶液兩次，每次都要劇烈震搖，且在分層後棄去下面水層。排出洗滌液時需留2 mL，然後沿軸線旋轉分液漏斗，等待幾分鐘讓保留的水層分離。棄去水層，當乙醚溶液到達旋塞口時關閉旋塞。
用40 mL氫氧化鉀水溶液，40 mL水相繼洗滌乙醚溶液後，再用40 mL氫氧化鉀水溶液進行洗滌，然後用40 mL水洗滌至少兩次以上。
繼續用水洗滌，直到加入1滴酚酞溶液至洗滌液後，不再呈粉紅色為止。
蒸發溶劑
通過分液漏斗的上口，小心地將乙醚溶液全部轉移至250 mL燒瓶中。此燒瓶需預先於103℃±2℃的烘箱中乾燥，冷卻後稱量，精確至0.1 mg。在沸水浴上蒸餾回收溶劑。
加入5 mL丙酮，在沸水浴上轉動時傾斜握住燒瓶，在緩緩的空氣流下，將揮發性溶劑完全蒸發。
殘留物的乾燥和測定
將燒瓶水平放置在103℃±2℃的烘箱中，乾燥15 min，然後放在乾燥器中冷卻，取出稱量，準確至0.1 mg。
按上述方法間隔15 min重複乾燥，直至兩次稱量質量相差不超過1.5mg如果三次乾燥後還不恆質，則不皂化物可能被污染，需重新進行測定。
註：如果條件允許，尤其是如果不皂化物需要進一步檢測時，可使用真空旋轉蒸發器。
當需要對殘留物中的游離脂肪酸進行校正時，將稱量後的殘留物溶於4 mL乙醚中，然後加入20 mL預先中和到使酚酞指示液呈淡粉色的乙醇。用0.1 mol/L標準氫氧化鉀醇溶液滴定到相同的終點顏色。
以油酸來計算游離脂肪酸的質量，並以此校正殘留物的質量。
測定次數
同一試樣需進行兩次測定。
用相同步驟及相同量的所有試劑，但不加試樣進行空白試驗。如果殘留物超過1.5 mg,需對試劑和方法進行檢查。
結果計算
試樣中的不皂化物含量按公式計算:
X=（m1-m2-m3）/m0 x 100 式中:
X—試樣中不皂化物的含量，以質量分數計，%;
m0—試樣的質量，單位為克(g) ；
m1—殘留物的質量，單位為克(g)；
m2—空白試驗的殘留物質量，單位為克(g) ；
m3—游離脂肪酸的質量，如果需要，等於0.28 V X c，單位為克(g)；
其中:
V—滴定所用標準氫氧化鉀乙醇溶液的體積，單位為毫升(mL) ；
c—氫氧化鉀乙醇標準溶液的準確濃度，單位為摩爾每升(mol/L) 。
用兩次測定數據的算術平均值作為結果。
己烷提取法
範圍
GB/T 5535的本部分規定了己烷三次提取測定動植物油脂不皂化物含量的方法。本部分適用所有油脂，不適用於蠟。
警告：與GB/T 5535.1中的方法相比，本方法的測定結果較低。
規範性引用檔案
下列檔案中的條款通過GB/T 5535本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用檔案，其隨後所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用於本部分，然而，鼓勵根據本部分達成協定的各方研究是否可使用這些檔案的最新版本。凡是不注日期的引用檔案，其最新版本適用於本部分。GB/T 15687油脂試樣製備(GB/T 15687-1995 , eqv ISO 661:1989)
術語和定義
下列術語和定義適用於GB/T 5535的本部分。
不皂化物 unsaponifiable matter
用氫氧化鉀皂化後的生成物用己烷提取，在規定條件下不揮發的所有物質。
註：不皂化物包括自然界中脂類物質，如街醉、烴類、醇類、脂肪族和菇烯醇類，以及用溶劑在103℃提取時不揮發的(如礦物油)外來有機物。
原理
油脂與氫氧化鉀乙醇溶液在煮沸回流條件下進行皂化，用己烷或石油醚從皂化液中提取不皂化物，蒸發溶劑並對殘留物乾燥後稱重。
試劑
本部分使用的試劑均為分析純，水為蒸餾水、去離子水或同等純度的水。
正己烷或沸程為40 0C ^-60℃的石油醚:溴價低於1，且不得含有雜質。
10%(體積分數)乙醇水溶液。
酚酞指示劑：10 g/L的95%(體積分數)乙醇溶液。
氫氧化鉀一乙醇溶液：c<（KOH）≈1 mol/L。在50 mL水中溶解60 g氫氧化鉀，然後用95%乙醇稀釋至1000 mL，溶液應為無色或淺黃色。
儀器
實驗室常用儀器，特別是下列儀器：
圓底燒瓶：帶標準磨口的250 mL圓底燒瓶。
回流冷凝管：具有與燒瓶配套的磨口。
250 mL分液漏斗：使用聚四氟乙烯旋塞和瓶塞。
水浴鍋。
扦樣
扦樣不是本部分規定的內容，推薦採用ISO 55550實驗室收到的樣品應具有代表性，在運輸和存儲過程中不應受損或改變。
試樣製備
按GB/T 15687執行。
分析步驟
稱樣
稱取約5g試樣，精確至0.01 g，放入250 mL燒瓶中。
皂化
加50 mL氫氧化鉀溶液和一些沸石。燒瓶與回流冷凝管聯接好後煮沸回流1h。停止加熱，從回流管頂部加入50 mL水並旋轉搖動。
不皂化物的提取
冷卻後轉移皂化液到250 mL分液漏斗，用50 mL己烷分幾次洗滌燒瓶和沸石，洗滌液倒入分液漏斗。蓋好旋塞，用力搖1 min，倒轉分液漏斗，並小心打開旋塞，間歇地釋放內壓。靜置分液漏斗，至溶液分層後，儘量將下層皂化液放入第二隻分液漏斗中。如果形成乳化液，須加少量乙醇或濃氫氧化鉀或氯化鈉破乳。
用相同方法，每次用50 mL己烷對皂化液再提取兩次。三次己烷提取液收集在同一分液漏斗中。
己烷提取物的洗滌
用乙醇溶液洗滌提取液三次，每次用量25 mL，並劇烈搖動，洗滌後棄去乙醇水溶液，每次棄去洗滌液後，保持分液漏斗中剩餘2 mL洗滌液，然後將分液漏斗沿其軸線旋轉。靜置數分鐘，使剩餘的乙醇水相進一步分離，然後棄去。當己烷溶液到達旋塞孔道時關閉旋塞。繼續用乙醇水溶液洗滌，直到洗滌液加入1滴酚酞溶液後不呈現粉紅色為止。
蒸發溶劑
通過分液漏斗的上口小心地將己烷溶液轉移到準確稱量至0.1 mg的250 mL燒瓶(6.1)中。燒瓶需預先在103℃烘箱中乾燥冷卻後稱量。在沸水浴中蒸發溶劑。
殘留物的乾燥和測定
將燒瓶水平放置在103℃烘箱(6.5)中，乾燥殘留物15 min。在乾燥器中冷卻，並精確稱量至0.1 mg。也可使用真空乾燥器乾燥，在最大真空度下，在沸水浴中蒸15 min之後，冷卻至室溫，將燒瓶表面的水擦乾，精確稱量至0.1 mg。
重複進行乾燥，直至兩次稱量的質量差不超過1.5mg。如果三次乾燥後還不恆質，則不皂化物可能被污染，需重新進行測定。
若需用游離脂肪酸進行校正，則將稱量後的殘留物溶於4 mL正己烷中，然後加入20 mL預先中和到使酚酞指示劑呈淡粉色的乙醇。用0. 1 mol/L標準氫氧化鉀一乙醇標準溶液標定至終點。以油酸計算游離脂肪酸的質量，並以此校正殘留物的質量。
測定次數
同一試樣需進行兩次測定。
空白實驗
需進行一個空白實驗，用相同步驟及相同量的所有試劑，但不加試樣。如果殘留物超過1.5 mg，需檢查測定方法和試劑。
結果計算
試樣不皂化物含量按公式計算：
X=（m1-m2-m3）/m0 x 100 式中：
x—試樣中不皂化物的含量，以質量分數計，%;
m0—試樣的質量，單位為克(g) ;
m1—殘留物的質量，單位為克(g);
m2—空白的殘留物質量，單位為克(g);
m3—游離脂肪酸的質量，等於0.28x V x c，單位為克(g);5其中:
V—滴定所用標準氫氧化鉀一乙醇溶液的體積，單位為毫升(mL) ;
c氫氧化鉀一乙醇標準溶液的準確濃度，單位為摩爾每升(mol/L)。
用兩次測定數據的算術平均值作為測定結果。
