根據典型雜音、右心房擴大及體循環淤血的症狀和體徵，一般即可做出診斷，對診斷有困難者可行右心導管檢查，若三尖瓣平均跨瓣舒張壓差在0.27kPa(2mmHg)以上，即可診斷為三尖瓣狹窄。
應注意與右房粘液瘤、縮窄性心包炎等疾病相鑑別。
輔助檢查
（一）X線檢查 右心房明顯擴大，下腔靜脈和奇靜脈擴張，但無肺動脈擴張。
（二）心電圖檢查 右心房肥大，Ⅱ及Ⅴ1導聯P波高尖；由於多數三尖瓣狹窄患者同時合併有二尖瓣狹窄，故心電圖亦常示雙心房肥大。無右心室肥大的表現。
（三）超聲心動圖檢查 三尖瓣的變化與二尖瓣狹窄時觀察到的相似，M型超聲心動圖常顯示瓣葉增厚，前葉的EF斜率減慢，舒張期與隔瓣呈矛盾運動、三尖瓣鈣化和增厚；二維超聲心動圖對診斷三尖瓣狹窄較有幫助，其特徵為舒張瓣葉呈園頂狀，增厚、瓣葉活動受限。都卜勒超聲可估測跨瓣壓力階差。
輔助檢查
（一）X線檢查 右心房明顯擴大，下腔靜脈和奇靜脈擴張，但無肺動脈擴張。
（二）心電圖檢查 右心房肥大，Ⅱ及Ⅴ1導聯P波高尖；由於多數三尖瓣狹窄患者同時合併有二尖瓣狹窄，故心電圖亦常示雙心房肥大。無右心室肥大的表現。
（三）超聲心動圖檢查 三尖瓣的變化與二尖瓣狹窄時觀察到的相似，M型超聲心動圖常顯示瓣葉增厚，前葉的EF斜率減慢，舒張期與隔瓣呈矛盾運動、三尖瓣鈣化和增厚；二維超聲心動圖對診斷三尖瓣狹窄較有幫助，其特徵為舒張瓣葉呈園頂狀，增厚、瓣葉活動受限。都卜勒超聲可估測跨瓣壓力階差。
