《一種超級泰樂菌素的提純方法》是中牧實業股份有限公司於2007年9月7日申請的發明專利，該專利的申請號為2007101460271，公布號為CN101381756，公布日為2009年3月11日，發明人是余志強、鄭應華、齊鵬、郭麗清、王華麗。
《一種超級泰樂菌素的提純方法》採用二次結晶法，摒棄了傳統意義上的有機溶媒萃取法，在減少環境污染，簡化提純步驟，降低生產成本的同時，可以得到與溶媒萃取法提純物相當純度的產品，更適用於工業化生產。由該發明所述方法製備的產品可作為獸藥超級泰樂菌素酒石酸鹽的原料藥。
2014年11月6日，《一種超級泰樂菌素的提純方法》獲得第十六屆中國專利優秀獎。
基本介紹
- 中文名：一種超級泰樂菌素的提純方法
- 公布號：CN101381756
- 公布日：2009年3月11日
- 申請號：2007101460271
- 申請日：2007年9月7日
- 申請人：中牧實業股份有限公司
- 地址：北京市豐臺區南四環西路188號總部基地八區16-17號樓
- 發明人：余志強、鄭應華、齊鵬、郭麗清、王華麗
- 分類號：C12P19/62（2006.01）I、C07H1/06（2006.01）I、C12R1/465（2006.01）N
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,附圖說明,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
超級泰樂菌素，化學名為3-O-乙醯-4″-O-異戊醯泰樂菌素（如圖）。超級泰樂菌素在水溶液中呈弱鹼性，溶液為鹼性條件時，會以沉澱的形式結晶出來。溶液為酸性條件時，超級泰樂菌素與大多數酸形成相應的鹽，易溶於水。
截至2007年9月，泰樂菌素作為專用獸藥和飼料添加劑在中國已使用多年，但由於其耐藥性的問題，歐盟已經下令禁止了磷酸泰樂菌素作為飼料添加劑的使用。超級泰樂菌素是泰樂菌素經Streptomycesthermotolerans生物轉化，在3位乙醯化及4″位異戊醯化，再經多步驟純化而得到的全新大環內酯類抗生素，因化學結構的改變使其在抗菌譜、抗菌活性、抗耐藥性、化學穩定性、口服吸收性、血藥濃度、動物殘留等方面發生了巨大的正向變化。使用劑量僅為泰樂菌素的四分之一即可達到比泰樂菌素更為卓越的效果。作為泰樂菌素的替代產品，超級泰樂菌素因其使用劑量低，無殘留，能有效的防治禽畜支原體病和提高飼料轉化率，是一種優良的禽畜專用大環內酯類抗生素和飼料添加劑。
美國專利4092473報導了超級泰樂菌素的提純方法：使用弱酸性處理反應混合物，離心，過濾，調節清夜的pH值到中性至弱鹼性，然後用乙酸乙酯、甲苯、苯進行抽提大環內酯類抗生素。上述方法採用有機溶媒作溶劑，操作毒性大，易污染環境，且成本高，在現代化的工業生產套用中應尋找到一種更安全環保的提純方法。
發明內容
專利目的
《一種超級泰樂菌素的提純方法》的目的在於避免2007年9月前已有技術中存在的不足，提供了一種能節約有機溶媒，降低生產成本，減少環境污染，利於工業化生產的超級泰樂菌素提取方法。
技術方案
《一種超級泰樂菌素的提純方法》採用酸提鹼沉二次結晶的技術方案，其特徵在於按下述工藝步驟進行：
（1）發酵超級泰樂菌素的生產菌株，經過多級培養發酵，得到“原始超級泰樂菌素髮酵液”；
（2）一次酸溶：將“超級泰樂菌素髮酵液”，加入酸性溶液，調節pH1~6，優選pH2~5.5，調節pH後攪拌1~5小時，優選1~3小時，得到“超級泰樂菌素一次酸溶液”；
（3）一次鹼沉：將上述“超級泰樂菌素一次酸溶液”，加入鹼性溶液，調節pH7~12，優選pH7.5~10，靜置4小時以上，得到“超級泰樂菌素一次結晶物”；
（4）二次酸溶：將上述“超級泰樂菌素一次結晶物”，加入酸性溶液，調節pH1~6，優選pH2~5.5，調節pH後攪拌1~5小時，優選1~3小時，得到“超級泰樂菌素二次酸溶液”；
（5）二次鹼沉：將上述“超級泰樂菌素二次酸溶液”，加入鹼性溶液，調節pH7~12，優選pH7.5~10，得到“超級泰樂菌素二次結晶物”。對該結晶物進行常規精製、乾燥處理得到超級泰樂菌素的固體物成品。
該發明的超級泰樂菌素的提純方法，所述的鹼性溶液包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氨水溶液中的一種；所述的酸性溶液包括硫酸、鹽酸、酒石酸、磷酸、檸檬酸溶液中的一種。
該發明的超級泰樂菌素的提純方法，所述的步驟（2）中，發酵液用水稀釋，發酵液降溫至20~40℃，優選20~30℃。
該發明的超級泰樂菌素的提純方法，所述的步驟（3）中，一次酸溶液板框過濾，濾液進入結晶罐，濾液升溫至35~60℃，優選40~60℃。
該發明的超級泰樂菌素的提純方法，所述的步驟（4）中，一次結晶物用酸水溶解，溶液降溫至20~45℃，優選20~35℃。
該發明的超級泰樂菌素的提純方法，所述的步驟（5）中，二次酸溶液板框過濾，濾液進入結晶罐，濾液升溫至30~60℃，優選30~50℃。
附圖說明
附圖：超級泰樂菌素的結構式。
附圖
權利要求
1.《一種超級泰樂菌素的提純方法》其特徵在於包括如下工藝步驟：
（1）發酵超級泰樂菌素的生產菌株，經過多級培養發酵，得到“原始超級泰樂菌素髮酵液”;
（2）一次酸溶：將“超級泰樂菌素髮酵液”用水稀釋，發酵液降溫至20~40℃，加入酸性溶液，調節pH1~6，調節pH後攪拌1~5小時，得到“超級泰樂菌素一次酸溶液”;
（3）一次鹼沉：將上述“超級泰樂菌素一次酸溶液”板框過濾，濾液進入結晶罐，濾液升溫至35~60℃，加入鹼性溶液，調節pH7~12，靜置4小時以上，得到“超級泰樂菌素一次結晶物”;
（4）二次酸溶：將上述“超級泰樂菌素一次結晶物”用水溶解，溶液降溫至20~45℃，加入酸性溶液，調節pHl~6，調節pH後攪拌1~5小時，得到“超級泰樂菌素二次酸溶液”;
（5）二次鹼沉：將上述“超級泰樂菌素二次酸溶液”板框過濾，濾液進入結晶罐，濾液升溫至30~60℃，加入鹼性溶液，調節pH7-12，得到“超級泰樂菌素二次結晶物”，對該結晶物進行常規精製、乾燥處理得到超級泰樂菌素的固體物成品。
2.根據權利要求1所述的提純方法，其特徵在於：所述步驟（2）中調節pH2~5.5。
3.根據權利要求1所述的提純方法，其特徵在於：所述步驟（2）中攪拌1~3小時。
4.根據權利要求1所述的提純方法，其特徵在於：所述步驟（3）中調節pH7.5~10。
5.根據權利要求1所述的提純方法，其特徵在於：所述步驟（4）中調節pH2~5.5。
6.根據權利要求1所述的提純方法，其特徵在於：所述步驟（4）中攪拌1~3小時。
7.根據權利要求1所述的提純方法，其特徵在於：所述步驟（5）中調節pH7.5~~10。
10.根據權利要求1所述的提純方法，其特徵在於：在步驟（2）中，發酵液降溫至20~30℃。
11.根據權利要求1所述的提純方法，其特徵在於：在步驟（3）中，濾液升溫至40~60℃.
12.根據權利要求1所述的提純方法，其特徵在於：在步驟（4）中，溶液降溫至20~35℃。
13.根據權利要求1所述的提純方法，其特徵在於：在步驟（5）中，濾液升溫至30~50℃。
實施方式
實施例1
超級泰樂菌素轉化菌在發酵罐中經過約170小時的發酵培養後得到超級泰樂菌素髮酵液50噸，加入水稀釋至70噸，使發酵液降溫至20℃；向該稀釋液中加入6摩爾/升鹽酸溶液，調節發酵液的pH至2，攪拌3小時。取樣HPLC檢測，效價為4572u/毫升，超級泰樂菌素溶出率為96％。板框過濾，濾液進入結晶罐。將一次酸溶過濾液升溫至40℃，加入4摩爾/升氫氧化鉀溶液，緩慢調節pH值至7.5，靜置4小時，產生超級泰樂菌素結晶，板框過濾得到一次結晶物，檢測上清液效價為82u/毫升。一次結晶物用水溶解，溶液降溫至20℃，加入6摩爾/升鹽酸溶液使全部溶解，調節發酵液的pH至2，攪拌3小時。取樣HPLC檢測，超級泰樂菌素溶出率為93％。板框過濾，濾液進入結晶罐。將二次酸溶過濾液升溫至30℃，加入4摩爾/升氫氧化鉀溶液，緩慢調節pH值至7.5，得到超級泰樂菌素二次結晶物，檢測上清效價液效價為77u/毫升，精製乾燥後得到超級泰樂菌素的固體物成品。HPLC法測定超級泰樂菌素含量為81％，回收率為90％。
實施例2
超級泰樂菌素轉化菌在發酵罐中經過約170小時的發酵培養後得到超級泰樂菌素髮酵液50噸，加入水稀釋至70噸，發酵液降溫至25℃；向該稀釋液中加入4摩爾/升硫酸溶液，調節發酵液的pH至3.8，攪拌1小時。取樣HPLC檢測，效價為4821u/毫升，超級泰樂菌素溶出率為97％。板框過濾，濾液進入結晶罐。將一次酸溶過濾液升溫至40℃，加入4摩爾/升碳酸鈉溶液，緩慢調節pH值至8，靜置8小時，產生超級泰樂菌素結晶，板框過濾得到一次結晶物，檢測上清液效價為80u/毫升。一次結晶物用水溶解，溶液降溫至25℃，加入4摩爾/升硫酸溶液使全部溶解，調節發酵液的pH至2.5，攪拌1小時。取樣HPLC檢測，超級泰樂菌素溶出率為94％。板框過濾，濾液進入結晶罐。將二次酸溶過濾液升溫至30℃，加入2摩爾/升碳酸鈉溶液，緩慢調節pH值至7.5，得到超級泰樂菌素二次結晶物，檢測上清效價液效價為81u/毫升，精製乾燥後得到超級泰樂菌素的固體物成品。HPLC法測定超級泰樂菌素含量為82％，回收率為89％。
實施例3
超級泰樂菌素轉化菌在發酵罐中經過約170小時的發酵培養後得到超級泰樂菌素髮酵液50噸，加入水稀釋至70噸，使發酵液降溫至30℃；向該稀釋液中加入8摩爾/升酒石酸溶液，調節發酵液的pH至5.5，攪拌2小時。取樣HPLC檢測，效價為4427u/毫升，超級泰樂菌素溶出率為95％。板框過濾，濾液進入結晶罐。將一次酸溶過濾液升溫至60℃，加入6摩爾/升碳酸氫鈉溶液，緩慢調節pH值至10，靜置6小時，產生超級泰樂菌素結晶，板框過濾得到一次結晶物，檢測上清液效價為79u/毫升。一次結晶物用水溶解，溶液降溫至35℃，加入8摩爾/升酒石酸溶液使全部溶解，調節發酵液的pH至5.5，攪拌2小時。取樣HPLC檢測，超級泰樂菌素溶出率為90％。板框過濾，濾液進入結晶罐。將二次酸溶過濾液升溫至50℃，加入3摩爾/升碳酸氫鈉溶液，緩慢調節pH值至10，得到超級泰樂菌素二次結晶物，檢測上清效價液效價為75u/毫升，精製乾燥後得到超級泰樂菌素的固體物成品。HPLC法測定超級泰樂菌素含量為81％，回收率為87％。
實施例4
超級泰樂菌素轉化菌在發酵罐中經過約170小時的發酵培養後得到超級泰樂菌素髮酵液50噸，加入水稀釋至70噸，使發酵液降溫至20℃；向該稀釋液中加入6摩爾/升磷酸溶液，調節發酵液的pH至1，攪拌5小時。取樣HPLC檢測，效價為4832u/毫升，超級泰樂菌素溶出率為96％。板框過濾，濾液進入結晶罐。將一次酸溶過濾液升溫至35℃，加入4摩爾/升氫氧化鈉溶液，緩慢調節pH值至7，靜置10小時，產生超級泰樂菌素結晶，板框過濾得到一次結晶物，檢測上清液效價為78u/毫升。一次結晶物用水溶解，溶液降溫至20℃，加入6摩爾/升磷酸溶液使全部溶解，調節發酵液的pH至1，攪拌5小時。取樣HPLC檢測，超級泰樂菌素溶出率為93％。板框過濾，濾液進入結晶罐。將二次酸溶過濾液升溫至30℃，加入4摩爾/升氫氧化鈉溶液，緩慢調節pH值至7，得到超級泰樂菌素二次結晶物，檢測上清效價液效價為72u/毫升，精製乾燥後得到超級泰樂菌素的固體物成品。HPLC法測定超級泰樂菌素含量為82％，回收率為90％。
實施例5
超級泰樂菌素轉化菌在發酵罐中經過約170小時的發酵培養後得到超級泰樂菌素髮酵液50噸，加入水稀釋至70噸，使發酵液降溫至40℃；向該稀釋液中加入8摩爾/升檸檬酸溶液，調節發酵液的pH至6，攪拌4小時。取樣HPLC檢測，效價為4615u/毫升，超級泰樂菌素溶出率為95％。板框過濾，濾液進入結晶罐。將一次酸溶過濾液升溫至60℃，加入6摩爾/升氨水溶液，緩慢調節pH值至12，靜置9小時，產生超級泰樂菌素結晶，板框過濾得到一次結晶物，檢測上清液效價為78u/毫升。一次結晶物用水溶解，溶液降溫至45℃，加入8摩爾/升檸檬酸溶液使全部溶解，調節發酵液的pH至6，攪拌4小時。取樣HPLC檢測，超級泰樂菌素溶出率為92％。板框過濾，濾液進入結晶罐。將二次酸溶過濾液升溫至60℃，加入6摩爾/升氨水溶液，緩慢調節pH值至12，得到超級泰樂菌素二次結晶物，檢測上清效價液效價為73u/毫升，精製乾燥後得到超級泰樂菌素的固體物成品。HPLC法測定超級泰樂菌素含量為83％，回收率為89％。
榮譽表彰
2014年11月6日，《一種超級泰樂菌素的提純方法》獲得第十六屆中國專利優秀獎。
