《一種治療白血病的組合物及其製備方法》是安徽天康（集團）股份有限公司於2017年3月9日申請的專利，該專利的公布號為CN106890268A，授權公布日為2017年6月27日，發明人是趙寬。
《一種治療白血病的組合物及其製備方法》屬於藥物製劑領域，主要涉及一種治療白血病的組合物及其製備方法，該發明採用青黛、雄黃、白花蛇舌草、山豆根、蛹蟲草、丹參、龍膽草、山慈菇、褐藻酸鈰配合物作為原料，對白血病治療效果好，不傷害人體正常細胞，毒副作用小；該發明製備組合物的方法中，採用免加熱萃取方法，高效萃取出有效成分，降低組合物的毒副作用；在組合物原料中加入褐藻酸鈰配合物，大大增加組合物對白血病的療效，且毒副作用很小。
2020年7月14日，《一種治療白血病的組合物及其製備方法》獲得第二十一屆中國專利獎優秀獎。
基本介紹
- 中文名：一種治療白血病的組合物及其製備方法
- 申請人：安徽天康（集團）股份有限公司
- 申請日：2017年3月9日
- 申請號：2017101386718
- 公布日：2017年6月27日
- 公布號：CN106890268A
- 發明人：趙寬
- 地址：安徽省滁州市天長市仁和南路20號
- Int.Cl.：A61K36/898(2006.01)I、A61K9/48(2006.01)I、A61K47/36(2006.01)I、A61P35/02(2006.01)I等
- 代理機構：南京眾聯專利代理有限公司
- 代理人：呂書桁
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
白血病，亦稱作血癌，是一類造血幹細胞異常的克隆性惡性疾病，其克隆中的白血病細胞失去進一步分化成熟的能力而停滯在細胞發育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細胞大量增生積聚並浸潤其他器官和組織，同時使正常造血受抑制，臨床表現為貧血、出血、感染及各器官浸潤症狀。近年來，白血病的發病率呈增長的趨勢，據統計，中國每年新增白血病約4萬餘人，每年3萬多人死於白血病。
2017年前，白血病的主要治療手段仍然是化學藥物治療，2017年3月之前的技術中，關於治療白血病的藥物眾多，但藥物毒副作用大，在強烈大量殺傷白血病細胞的同時，也重創機體的正常功能，其結果是既驅邪又傷正，表現為驅邪正衰，氣陰兩傷。
發明內容
專利目的
《一種治療白血病的組合物及其製備方法》是解決2017年3月之前的技術中治療白血病的藥物毒副作用大的技術問題，提供一種治療白血病的組合物及其製備方法。
技術方案
《一種治療白血病的組合物及其製備方法》的技術方案如下：
一種治療白血病的組合物，包括以下重量份配比的原料藥：
優選地，所述治療白血病的組合物包括以下重量份配比的原料藥：
青黛：1-10份；雄黃：1-10份；白花蛇舌草：10-50份；山豆根：10-50份；蛹蟲草：1-10份；丹參：10-80份；龍膽草：10-50份；山慈菇：10-50份；褐藻酸鈰配合物：1-5份。
優選地，所述治療白血病的組合物中褐藻酸鈰配合物由以下方法製備而成：
將褐藻酸鈉溶解超純水中，配置成5-15％的水溶液，水浴加熱至40-50℃，加入0.5-2％醋酸鈰溶液，繼續攪拌2小時，將混合溶液裝入透析袋，透析48-72小時後，加熱濃縮至原體積的10％。
優選地，所述治療白血病的組合物包括以下重量份配比的原料藥，
青黛：2-8份；雄黃：2-6份；白花蛇舌草：20-30份；山豆根：20-30份；蛹蟲草：3-7份；丹參：30-50份；龍膽草：20-30份；山慈菇：20-30份；褐藻酸鈰配合物：2-4份。
優選地，所述治療白血病的組合物包括以下重量份配比的原料藥，
青黛：6份；雄黃：4份；白花蛇舌草：25份；山豆根：25份；蛹蟲草：5份；丹參：40份；龍膽草：25份；山慈菇：25份；褐藻酸鈰配合物：3份。
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇分別研磨成細粉，混合均勻，備用；
步驟五，將步驟四所得混合粉末與超純水按1:5的體積比混合，攪拌均勻後加入高溫高壓反應釜，在溫度36℃，壓力0.1兆帕的條件下反應60-120分鐘，冷卻後抽濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟六，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉，過篩，裝入膠囊。
優選地，向步驟五所述混合粉末與超純水的混合物中加入褐藻酸鈰配合物。
改善效果
相對於2017年3月之前的技術，《一種治療白血病的組合物及其製備方法》的優點如下：
《一種治療白血病的組合物及其製備方法》採用青黛、雄黃、白花蛇舌草、山豆根、蛹蟲草、丹參、龍膽草、山慈菇、褐藻酸鈰配合物作為原料，其主要活性成分為青黛、雄黃和蛹蟲草，青黛性味鹹寒，有清熱解毒，涼血消斑，瀉火定驚等功效，雄黃有抗腫瘤作用，蛹蟲草能扶正益氣，提高免疫力和造血功能，補肺平喘，改善呼吸系統，調節體內血脂等功效，是一種能同時平衡、調節陰陽的中藥；白血病是一種克隆性惡性病，惡性克隆的產生可能和多種因素有關，其中逆轉錄病毒感染原瘤基因激活是主要的，單一的青黛、雄黃或蛹蟲草均不能起到治療白血病的效果，青黛與蛹蟲草的有效成分蟲草素、四硫化四砷產生協同作用，共同滅殺白血病細胞，但由於青黛中的主要成分靛玉紅服用後導致胃腸道黏膜的刺激症狀、骨髓抑制引起血小板下降、肝功受損等不良反應，雄黃本身也具備一定毒性，需要加入其它組分加以輔助，以抵消不良影響。實驗研究表明，加入經過處理的白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇混合物，可很大程度抵消青黛、雄黃或蛹蟲草組合物易產生的不良反應，製備得到藥性溫和、療效佳的藥物組合物；組合物中加入褐藻酸鈰配合物，褐藻酸鈰配合物與組合物中的各種成分，配合置換，可進一步促進藥物治療效果，不傷害人體正常細胞，降低藥物毒性；
《一種治療白血病的組合物及其製備方法》製備組合物的方法中，處理過程均採用溫和的溫度條件，最大程度地保留藥物的有效成分；採用超臨界萃取法高效萃取出青黛的有效成分，初步去除少量有毒副作用的物質；低功率微波萃取最大程度萃取蛹蟲草的主要成分同時保護其藥性；採用水熱法處理的白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇混合物，反應過程中除去其本身有毒成分，生成性質溫和，具有結合活性的混合物，可以與青黛、雄黃或蛹蟲草組合物結合，生成可抵消青黛、雄黃或蛹蟲草組合物副作用的混合物，降低組合物的毒副作用。
技術領域
《一種治療白血病的組合物及其製備方法》屬於藥物製劑領域，主要涉及一種治療白血病的組合物及其製備方法。
權利要求
1.一種治療白血病的組合物，其特徵在於，包括以下重量份配比的原料藥：
青黛：1-10份；雄黃：1-10份；白花蛇舌草：10-50份；山豆根：10-50份；蛹蟲草：1-10份；丹參：10-80份；龍膽草：10-50份；山慈菇：10-50份。
2.如權利要求1所述的治療白血病的組合物，其特徵在於，包括以下重量份配比的原料藥：
青黛：1-10份；雄黃：1-10份；白花蛇舌草：10-50份；山豆根：10-50份；蛹蟲草：1-10份；丹參：10-80份；龍膽草：10-50份；山慈菇：10-50份；褐藻酸鈰配合物：1-5份。
3.如權利要求2所述的治療白血病的組合物，其特徵在於，所述褐藻酸鈰配合物由以下方法製備而成：
將褐藻酸鈉溶解超純水中，配置成5-15％的水溶液，水浴加熱至40-50℃，加入0.5-2％醋酸鈰溶液，繼續攪拌2小時，將混合溶液裝入透析袋，透析48-72小時後，加熱濃縮至原體積的10％。
4.如權利要求3所述的治療白血病的組合物,其特徵在於，所述包括以下重量份配比的原料藥：
青黛：2-8份；雄黃：2-6份；白花蛇舌草：20-30份；山豆根：20-30份；蛹蟲草：3-7份；丹參：30-50份；龍膽草：20-30份；山慈菇：20-30份；褐藻酸鈰配合物：2-4份。
5.如權利要求4所述的治療白血病的組合物,其特徵在於，所述包括以下重量份配比的原料藥：
青黛：6份；雄黃：4份；白花蛇舌草：25份；山豆根：25份；蛹蟲草：5份；丹參：40份；龍膽草：25份；山慈菇：25份；褐藻酸鈰配合物：3份。
6.如權利要求1、3、4、5中任一項所述的治療白血病的組合物的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟：
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，33-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇分別研磨成細粉，混合均勻，備用；
步驟五，將步驟四所得混合粉末與超純水按1:5的體積比混合，攪拌均勻後加入高溫高壓反應釜，在溫度36℃，壓力0.1兆帕的條件下反應60-120分鐘，冷卻後抽濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟六，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉，過篩，裝入膠囊。
7.如權利要求6所述的治療白血病的組合物的製備方法，其特徵在於，向步驟五所述混合粉末與超純水的混合物中加入褐藻酸鈰配合物。
實施方式
- 實施例1
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
青黛：1克；雄黃：10克；白花蛇舌草：50克；山豆根：50克；蛹蟲草：10克；丹參：10克；龍膽草：50克；山慈菇：50克；
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇分別研磨成細粉，混合均勻，備用；
步驟五，將步驟四所得混合粉末與超純水按1:5的體積比混合，攪拌均勻後加入高溫高壓反應釜，在溫度36℃，壓力0.1兆帕的條件下反應60-120分鐘，冷卻後抽濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟六，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉。
- 實施例2
褐藻酸鈰配合物的製備：
將褐藻酸鈉溶解超純水中，配置成5-15％的水溶液，水浴加熱至40-50℃，加入0.5-2％醋酸鈰溶液，繼續攪拌2小時，將混合溶液裝入透析袋，透析48-72小時後，加熱濃縮至原體積的10％。
- 實施例3
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
青黛：10克；雄黃：1克；白花蛇舌草：10克；山豆根：10克；蛹蟲草：1克；丹參：80克；龍膽草：10克；山慈菇：10克；褐藻酸鈰配合物：2克；
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇分別研磨成細粉，混合均勻，備用；
步驟五，將步驟四所得混合粉末與超純水按1:5的體積比混合，加入褐藻酸鈰配合物，攪拌均勻後加入高溫高壓反應釜，在溫度36℃，壓力0.1兆帕的條件下反應60-120分鐘，冷卻後抽濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟六，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉。
- 實施例4
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
青黛：2克；雄黃：6克；白花蛇舌草：20克；山豆根：30克；蛹蟲草：7克；丹參：30克；龍膽草：20克；山慈菇：30克；褐藻酸鈰配合物：5克；
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇分別研磨成細粉，混合均勻，備用；
步驟五，將步驟四所得混合粉末與超純水按1:5的體積比混合，加入褐藻酸鈰配合物，攪拌均勻後加入高溫高壓反應釜，在溫度36℃，壓力0.1兆帕的條件下反應60-120分鐘，冷卻後抽濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟六，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉。
- 實施例5
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
青黛：8克；雄黃：2克；白花蛇舌草：30克；山豆根：20克；蛹蟲草：3克；丹參：50克；龍膽草：30克；山慈菇：20克；褐藻酸鈰配合物：1克；
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇分別研磨成細粉，混合均勻，備用；
步驟五，將步驟四所得混合粉末與超純水按1:5的體積比混合，加入褐藻酸鈰配合物，攪拌均勻後加入高溫高壓反應釜，在溫度36℃，壓力0.1兆帕的條件下反應60-120分鐘，冷卻後抽濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟六，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉。
- 實施例6
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
青黛：6克；雄黃：4克；白花蛇舌草：25克；山豆根：25克；蛹蟲草：5克；丹參：40克；龍膽草：25克；山慈菇：25克；褐藻酸鈰配合物：4克；
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇分別研磨成細粉，混合均勻，備用；
步驟五，將步驟四所得混合粉末與超純水按1:5的體積比混合，加入褐藻酸鈰配合物，攪拌均勻後加入高溫高壓反應釜，在溫度36℃，壓力0.1兆帕的條件下反應60-120分鐘，冷卻後抽濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟六，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉。
- 實施例7
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
青黛：6克；雄黃：4克；白花蛇舌草：25克；山豆根：25克；蛹蟲草：5克；丹參：40克；龍膽草：25克；山慈菇：25克；褐藻酸鈰配合物：3克；
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇分別研磨成細粉，混合均勻，備用；
步驟五，將步驟四所得混合粉末與超純水按1:5的體積比混合，加入褐藻酸鈰配合物，攪拌均勻後加入高溫高壓反應釜，在溫度36℃，壓力0.1兆帕的條件下反應60-120分鐘，冷卻後抽濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟六，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉。
上述細粉可過篩，裝入膠囊。
- 實施例8
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
青黛：20克；雄黃：20克；白花蛇舌草：25克；山豆根：25克；蛹蟲草：5克；丹參：40克；龍膽草：25克；山慈菇：25克；褐藻酸鈰配合物：6克；
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇分別研磨成細粉，混合均勻，備用；
步驟五，將步驟四所得混合粉末與超純水按1:5的體積比混合，加入褐藻酸鈰配合物，攪拌均勻後加入高溫高壓反應釜，在溫度36℃，壓力0.1兆帕的條件下反應60-120分鐘，冷卻後抽濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟六，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉。
- 實施例9
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
白花蛇舌草：25克；山豆根：25克；蛹蟲草：5克；丹參：40克；龍膽草：25克；山慈菇：25克；
步驟一將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇分別研磨成細粉，混合均勻，備用；
步驟三，將步驟二所得混合粉末與超純水按1:5的體積比混合，攪拌均勻後加入高溫高壓反應釜，在溫度36℃，壓力0.1兆帕的條件下反應60-120分鐘，冷卻後抽濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟四，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉。
- 實施例10
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
青黛：6克；雄黃：4克；蛹蟲草：5克；
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉混合均勻。
- 實施例11
一種治療白血病的組合物的製備方法，包括以下步驟：
青黛：6克；雄黃：4克；白花蛇舌草：25克；山豆根：25克；蛹蟲草：5克；丹參：40克；龍膽草：25克；山慈菇：25克；褐藻酸鈰配合物：3克；
步驟一，將所述雄黃水飛，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟二，將所述青黛加入CO2超臨界萃取釜中，95％乙醇溶液為夾帶劑，萃取壓力30兆帕、溫度36℃，液態CO2流量為3毫升/克生藥/分鐘，夾帶劑用量為總萃取溶劑的8％，動態萃取240分鐘，在壓力6兆帕、溫度36℃條件下解析，收集萃取物，減壓回收，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟三，將所述蛹蟲草加入微波萃取裝置中進行微波萃取，萃取功率300瓦，萃取4次，每次10分鐘，合併萃取液，採用Dl01大孔吸附樹脂柱分離純化，50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，30-36℃溫度下鼓風乾燥，用納米研磨機研細，備用；
步驟四，將所述白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇加水煎煮二次，每次2小時，合併煎液過濾，將濾液加熱濃縮至相對密度為1.15-1.20的浸膏，冷卻至室溫；
步驟六，向步驟五中所述浸膏中加入步驟一、步驟二、步驟三所製得的細粉，攪拌均勻後，30-36℃鼓風乾燥，粉碎成細粉。
- 實施例12
將實施例1-11所製得的組合物用於CCK-8細胞增殖試驗：
將表一中一系列的組合物溶解如細胞培養液中，製成相應濃度的組合物溶液；
在96孔板中配製100微升的細胞懸液，分別採用QSG-7701細胞（人正常肝細胞）、K562細胞（人類髓性白血病人工培養的細胞）、hl-60細胞株（人早幼粒白血病細胞）進行實驗；
將培養板在培養箱預培養24小時，培養條件：37℃，5％CO2；
向培養板每一列（8孔）分別加入10微升上述組合物溶液，其中一列加入10微升細胞培養液作為空白對照組；
將培養板在培養箱孵育24小時；
向每孔加入10微升CCK-8溶液；
將培養板在培養箱內孵育4小時；
用酶標儀測定在450納米處的測定光強度值（OD）。
細胞存活率可以通過下列計算得到：細胞存活率％＝[OD]test/[OD]control×100％。
系列（濃度） | QSG-7701細胞存活率 | K562細胞存活率 | hl-60細胞存活率 |
DMEM溶液 | 100% | 100% | 100% |
實施例1（10毫克/毫升） | 62.2% | 21.7% | 23.4% |
實施例2（10毫克/毫升） | 98.2% | 97.8% | 98.8% |
實施例3（10毫克/毫升） | 88.1% | 12.1% | 11.5% |
實施例4（10毫克/毫升） | 93.7% | 8.8% | 7.5% |
實施例5（10毫克/毫升） | 93.5% | 6.8% | 5.7% |
實施例6（10毫克/毫升） | 94.3% | 5.9% | 6.1% |
實施例7（10毫克/毫升） | 98.2% | 2.9% | 2.5% |
實施例8（10毫克/毫升） | 10.6% | 4.8% | 4.4% |
實施例9（10毫克/毫升） | 79.9.6% | 82.2% | 86.5% |
實施例10（10毫克/毫升） | 22.3% | 6.2% | 6.4% |
實施例11（10毫克/毫升） | 34.1% | 21.8% | 25.6% |
從表一可知，加入實施例1所製備的組合物，白血病細胞（K562細胞、hl-60）存活率較低，說明組合物對白血病細胞有一定的抑制作用，但其也是的正常細胞（QSG-7701）的存活率降低，有一定的毒副作用。
加入實施例3-7所製得的組合物，白血病細胞（K562細胞、hl-60）存活率很低，說明組合物中加入褐藻酸鈰配合物後，與其他組分發生協同作用，對白血病細胞有較強抑制作用，且正常細胞（QSG-7701）的存活率很高，說明組合物毒副作用小，其中實施例7為最優選。
單純加入實施例2所製得的褐藻酸鈰配合物，白血病細胞（K562細胞、hl-60）和正常細胞（QSG-7701）的存活率很都很高，說明褐藻酸鈰配合物細胞毒性小，單純的褐藻酸鈰配合物對白血病細胞並不起到明顯的抑制作用。
加入實施例8所製得的組合物，白血病細胞（K562細胞、hl-60）和正常細胞（QSG-7701）的存活率很都很低，說明青黛、雄黃、褐藻酸鈰配合物組成超過一定範圍會產生較大的毒副作用。
加入實施例9所製得的組合物，白血病細胞（K562細胞、hl-60）和正常細胞（QSG-7701）的存活率很都較高，說明若無青黛、雄黃、褐藻酸鈰配合物的存在，組合物對白血病細胞並不起到明顯的抑制作用。
加入實施例10所製得的組合物，白血病細胞（K562細胞、hl-60）和正常細胞（QSG-7701）的存活率都較低，說明單純的青黛、雄黃、蛹蟲草組合物，雖然能滅殺白血病細胞，但同時也滅殺正常細胞，副作用大。
加入實施例11所製得的組合物，白血病細胞（K562細胞、hl-60）和正常細胞（QSG-7701）的存活率也都較低，對白花蛇舌草、山豆根、丹參、龍膽草、山慈菇進行簡單的煎制，對青黛、雄黃、蛹蟲草組合物的副作用產生的影響不大。
2006年1月-2016年9月經臨床研究：
18例急性白血病患者，其中男性11例，女性7例，中位年齡30歲，服用實施例7的中藥組合物膠囊劑，一次3粒，一日3次，逐步加大劑量，到10天左右，達到一次9-12粒，一日3次，療程最長不超過60天。結果全部患者均獲得完全緩解（CR），其中30天獲CR共4例，占總數的22.2％；31-60天獲CR共14例，占總數的77.8％。療程中不出現骨髓抑制，無嚴重的感染、出血等併發症，療程中治療相關死亡率0％。
14例慢性白血病患者，診斷為CML加速器/急變期，8例男性，6例女性，中位年齡34.3歲，服用實施例7的中藥組合物膠囊劑，一次9-12粒，一日3次，第一個月連服30天；以後每月服藥15天，停藥15天；以此類推，12個月為1療程。結果發現所有患者在治療後均出現了外周血細胞計數下降。13例患者（92.8％）達到血液學緩解，其中12例患者（85.7％）為完全血液學緩解。血液學緩解通常發生在開始治療後的一端時間，中位時間為5周（範圍是1-11周）。在發生血液學緩解的13例患者中，12例患者為完全血液學緩解，而有1例患者在治療的第6月時出現病情惡化。1例患者沒有堅持服藥，在停止服藥1個月內出現病情惡化。因此總共12例患者獲得持久完全血液學緩解，隨訪中位數是18個月（14-20個月）。
榮譽表彰
2020年7月14日，《一種治療白血病的組合物及其製備方法》獲得第二十一屆中國專利獎優秀獎。
