《一種三七提取物及其製劑》是黑龍江省珍寶島製藥有限公司於2010年1月15日申請的專利，該專利的申請號為2010100034349，公布號為CN101732378A，授權公布日為2010年6月16日，發明人是方同華、李旭東、岳大彪、項彥華、周廣紅、代喜國、常英傑、王麗。
《一種三七提取物及其製劑》提供了一種三七提取物，其含有三七皂苷R15～10％，人參皂苷Rg125～36％，人參皂苷Re2.5～5％，人參皂苷Rb130～39％，人參皂苷Rd5～10％，人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3不少於2％，且三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd占總重量的75～95％。該發明還提供了一種三七提取物的製備方法，由該發明方法製備的三七提取物雜質少，且總皂苷成分純度更高，尤其是人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3等含量極低的成分得以提純。該發明所述三七提取物製備的藥用製劑療效更好，安全性更高。
2016年12月7日，《一種三七提取物及其製劑》獲得第十八屆中國專利優秀獎。
基本介紹
- 中文名：一種三七提取物及其製劑
- 公布號：CN101732378A
- 授權日：2010年6月16日
- 申請號：2010100034349
- 申請日：2010年1月15日
- 申請人：黑龍江省珍寶島製藥有限公司
- 地址：黑龍江省虎林市紅星街72號
- 發明人：方同華、李旭東、岳大彪、項彥華、周廣紅、代喜國、常英傑、王麗
- Int.Cl.：A61K36/258(2006.01)I；A61P9/10(2006.01)I；A61K125/00(2006.01)N
- 代理機構：北京路浩智慧財產權代理有限公司
- 代理人：王朋飛
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,技術方案,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
20世紀30年代，中國學者開始對三七提取物進行研究，限於當時條件的制約，研究進展緩慢。70年代以後，隨著現代分離手段及檢測儀器的廣泛套用，三七提取物化學成分的研究才取得顯著進展。三七化學成分包括皂苷類、揮髮油類、胺基酸類（三七素）、聚炔醇類、黃酮類、甾醇類、糖類、有機酸、環二肽類、人參內醯類、無機類等，但其主要有效成分為三七總皂苷，包括三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1等，含量約占三七根的10～12％。
三七常見的提取方法為水煎煮、醇回流和超音波提取，但由於三七中還含有大量的澱粉，在提取三七總皂苷時，一般不宜採用水或低濃度乙醇提取，以免糊化；超音波提取法所得的三七總皂苷含量雖然較高，但考慮到超音波提取不宜於工藝上放大套用，因此醇回流法仍是2010年1月前提取三七總皂苷的最佳方法。
2010年1月前文獻報導中，多採用60％或80％的乙醇進行回流提取，但提取過程中工藝參數選擇的不同，會直接造成三七總皂苷有效成分種類及含量差別很大。
發明內容
專利目的
《一種三七提取物及其製劑》的目的是提供一種總皂苷含量高的三七提取物。另一目的是提供一種三七提取物的製備方法。再一目的是提供一種由三七提取物製成的藥物製劑。
技術方案
《一種三七提取物及其製劑》提供一種三七提取物，其含有三七皂苷R15～10％，人參皂苷Rg125～36％，人參皂苷Re2.5～5％，人參皂苷Rb130～39％，人參皂苷Rd5～10％，人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3不少於2％，且三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd占總重量的75～95％。
其中，優選的為三七皂苷R15～8％，人參皂苷Rg125～34％，人參皂苷Re2.5～4％，人參皂苷Rb130～36％，人參皂苷Rd5～8％，人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3不少於2％，且三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd占總重量的75～90％。
更優選的為三七皂苷R17～8％，人參皂苷Rg127～34％，人參皂苷Re3～4％，人參皂苷Rb133～36％，人參皂苷Rd6～8％，人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3不少於2％，且三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd占總重量的80～90％。
以上所述的百分數為重量百分數。
《一種三七提取物及其製劑》所述三七提取物的製備方法，其採用先將三七主根或根莖粉碎成粗粉，用70～95％乙醇提取2～4次，收集濾液經減壓濃縮，並經大孔吸附樹脂柱吸附，然後用70～80％乙醇洗脫，洗脫液脫色後減壓濃縮，乾燥。
其中，所述減壓濃縮採用單效濃縮器。
所述大孔吸附樹脂柱採用D101或DM130大孔樹脂。
所述脫色採用D900樹脂和藥用炭。
《一種三七提取物及其製劑》減壓濃縮後還包括精製步驟，多採用正丁醇萃取和丙酮析晶聯用。
具體地說，所述三七提取物的製備方法，包括如下步驟：
1）取三七主根或根莖破碎成1～3厘米的顆粒，用1.5～2倍量70～95％乙醇浸泡10～12小時，回流提取2～4次，每次1.5～2小時，合併回流液，回收乙醇至無醇味，加水稀釋成0.20～0.30克生藥/毫升，沉澱12～18小時，過濾，減壓濃縮得濃縮液；
2）所述濃縮液以流速為1.2～1.4BV/小時的流速經D101或DM130大孔樹脂吸附，然後用樹脂體積1～3倍量的純化水過柱解吸，棄去水液，用樹脂體積1～3倍量的70～80％的乙醇浸泡樹脂20～40分鐘後，以樹脂體積3～5倍量的70～80％的乙醇以1.0～1.2BV/小時的流速洗脫，收集洗脫液；
3）再將洗脫液以流速為6.0～6.5BV/小時的流速過D900樹脂脫色，加入樹脂1～3倍量80～85％的乙醇以相同流速沖洗樹脂柱，合併初流液和洗脫液；
4）然後加入生藥重量4～6％的藥用炭於40℃保溫脫色40分鐘，過濾除炭，減壓濃縮並回收乙醇，最後減壓乾燥。
截至2010年1月，三七總皂苷的常規提取方法為乙醇回流提取，再經吸附樹脂富集總皂苷成分，但吸附樹脂富集的成分多為含量較高的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd；《一種三七提取物及其製劑》對提取溶劑濃度進行最佳化，使得總皂苷成分純度更高，尤其是人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3等含量極低的成分得以提純。同時還進行了精製方法的研究，進一步純化人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3等含量極低的成分。
《一種三七提取物及其製劑》三七提取物可根據該領域熟知的製備方法，由三七提取物、或三七提取物和藥用輔料製成不同藥用製劑，比如注射液、凍乾粉針劑、輸液劑、膠囊劑、顆粒劑或片劑。
所述藥用輔料為氯化鈉、葡萄糖、澱粉、糊精、蔗糖、滑石粉、硬脂酸鎂。
《一種三七提取物及其製劑》採用高效液相色譜儀，以乙腈和水作為流動相進行梯度洗脫的方法對三七提取物及其製劑中的成分進行鑑別檢測，5分鐘後的色譜峰，以三七總皂苷對照提取物的主要色譜峰校正，三七提取物及其製劑的相似度在0.95以上。
具體來說，《一種三七提取物及其製劑》採用高效液相色譜儀，以乙腈和0.1％甲酸水溶液作為流動相進行梯度洗脫的方法對三七提取物及其製劑中皂苷成分進行LC/TOFMS鑑別檢測，各成分的出峰順序依次為：三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd和人參皂苷Rg3。
技術方案
1、療效有所提高，尤其是對冠心病心絞痛患者的總有效率較原來可提高4～6％；
2、純度高、顏色淺、雜質少；
經過《一種三七提取物及其製劑》方法製備而得的三七提取物及其製劑的含量明顯高於常規方法製備的樣品，總皂苷含量可提升15～38％，尤其是人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3的含量由原來幾乎檢測不到，到能達到2％以上。
含量大幅度提升的同時，雜質成分相應減少。以AgilentICP-MS7500電感耦合電漿質譜儀對三七提取物中無機元素進行測定，結果，重金屬及有害元素僅占0.0007‰；以Agilent6890氣相色譜儀對三七提取物中的大孔吸附樹脂有機殘留物進行檢測，結果，未檢測出正己烷、苯、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1，2-二乙基苯和二乙烯苯。
3、通過降壓物質檢查、過敏檢查、異常毒性檢查、熱原檢查、溶血與凝聚檢查、刺激試驗等結果，表明由該三七提取物製備的製劑安全性更高。
技術領域
《一種三七提取物及其製劑》涉及一種三七提取物及其製劑，屬於醫藥技術領域。
權利要求
1.一種三七提取物，其特徵在於，其含有三七皂苷R15～10％，人參皂苷Rg125～36％，人參皂苷Re2.5～5％，人參皂苷Rb130～39％，人參皂苷Rd5～10％，人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3不少於2％，且三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd占總重量的75～95％。
2.根據權利要求1所述的三七提取物，其特徵在於，其含有三七皂苷R15～8％，人參皂苷Rg125～34％，人參皂苷Re2.5～4％，人參皂苷Rb130～36％，人參皂苷Rd5～8％，人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3不少於2％，且三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd占總重量的75～90％。
3.根據權利要求1所述的三七提取物，其特徵在於，其含有三七皂苷R17～8％，人參皂苷Rg127～34％，人參皂苷Re3～4％，人參皂苷Rb133～36％，人參皂苷Rd6～8％，人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3不少於2％，且三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd占總重量的80～90％。
4.製備權利要求1-3任意一項所述的三七提取物的方法，其特徵在於，其採用先將三七主根或根莖粉碎成粗粉，用70～95％乙醇提取2～4次，收集濾液經減壓濃縮，並經大孔吸附樹脂柱吸附，然後用70～80％乙醇洗脫，洗脫液脫色後減壓濃縮，乾燥。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，所述大孔吸附樹脂柱採用D101或DM130大孔樹脂。
6.根據權利要求4或5所述的方法，其特徵在於，所述脫色採用D900樹脂和藥用炭兩步脫色。
7.根據權利要求4-6任意一項所述的方法，其特徵在於，減壓濃縮後還包括精製步驟，所述精製採用正丁醇萃取和丙酮析晶聯用。
8.根據權利要求4-7任意一項所述的方法，其特徵在於，所述減壓濃縮採用單效濃縮器。
9.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，包括如下步驟：
1）取三七主根或根莖破碎成1～3厘米的顆粒，用1.5～2倍量70～95％乙醇浸泡10～12小時，回流提取2～4次，每次1.5～2小時，合併回流液，回收乙醇至無醇味，加水稀釋成0.20～0.30克生藥/毫升，沉澱12～18小時，過濾，減壓濃縮得濃縮液；
2）所述濃縮液以流速為1.2～1.4BV/小時的流速經D101或DM130大孔樹脂吸附，然後用樹脂體積1～3倍量的純化水過柱解吸，棄去水液，用樹脂體積1～3倍量的70～80％的乙醇浸泡樹脂20～40分鐘後，以樹脂體積3～5倍量的70～80％的乙醇以1.0～1.2BV/小時的流速洗脫，收集洗脫液；
3）再將洗脫液以流速為6.0～6.5BV/小時的流速過D900樹脂脫色，加入樹脂1～3倍量80～85％的乙醇以相同流速沖洗樹脂柱，合併初流液和洗脫液；
4）然後加入生藥重量4～6％的藥用炭於40℃保溫脫色40分鐘，過濾除炭，減壓濃縮回收乙醇，最後減壓乾燥。
10.由權利要求1或2所述三七提取物製成的藥用製劑，其特徵在於，所述藥用製劑為注射液、凍乾粉針劑、輸液劑、膠囊劑、顆粒劑或片劑。
實施方式
實施例1
取三七根莖破碎成3厘米以下的顆粒，用1.5倍量95％乙醇浸泡12小時後，回流提取3次，每次2小時。合併三次回流液，回收乙醇至無醇味，加水稀釋成0.25克生藥/毫升，沉澱12小時，過濾，濃縮，濃縮液以流速為1.4BV/小時的流速經D101大孔樹脂吸附，然後用樹脂體積1倍量的純化水過柱解吸，棄去水液，用樹脂體積1倍量的70％的乙醇浸泡樹脂30分鐘後，以樹脂體積4倍量的70％的乙醇以1.0BV/小時的流速洗脫，收集洗脫液。再將洗脫液以流速為6.5BV/小時的流速過D900樹脂脫色，加入樹脂1倍量85％的乙醇以相同流速沖洗樹脂柱，合併初流液和洗脫液加入生藥重量5％的藥用炭於40℃保溫脫色40分鐘，過濾除炭，回收乙醇，在70℃以內減壓乾燥，粉碎包裝得三七提取物。
經檢測，該實施例的三七提取物的成分為：
三七皂苷R17.74％，人參皂苷Rg131.83％，人參皂苷Re3.91％，人參皂苷Rb133.81％，人參皂苷Rd7.53％，人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3的和為2.24％，且三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd占總重量的84.82％。
其他性能檢測如下：
1）目檢，該品為類白色粉末。
2）將該品加水製成每1毫升中含三七總皂苷25毫克的溶液，照溶液顏色檢查法（《中國藥典》一部附錄XIA）檢查，與黃色4號標準比色液比較，供試品管呈現的顏色不深於對照管。
3）有關物質檢查（《中國藥典》一部附錄IXS）均符合要求。
4）有害元素檢查
取供試品0.1克，用1毫升的70％乙醇和2％硝酸混合溶液溶解，超聲30分鐘，取1毫升溶解後樣品，用2％硝酸水溶液9毫升稀釋，超聲10分鐘，備用。以7％乙醇和2％硝酸混合溶液分別配製0，1，10，100ppb昆合元素標準；Hg用1％HCI配製，1，2ppb；2％HNO3和7％乙醇混合溶液為工作曲線零點。用1.0微克/毫升Li，Se，Ge，Y，In，Tb，Bi多元素混合內標，採用虛擬內標校正。電感耦合電漿質譜儀進行檢查，結果Be、B、Al等18種重金屬及有害元素的總量為0.7毫克/千克。
5）大孔吸附樹脂有機殘留物檢查
照殘留溶劑測定法（中國藥典2005年版二部附錄VIIIP第二法）測定。
色譜條件與系統適用性試驗以鍵合/交聯聚乙二醇為固定相，採用彈性石英毛細管柱（30m×0.25毫米×0.25微米）；氫火焰離子化檢測器，柱溫，程式升溫，起始溫度為60℃，維持16分鐘，再以每分鐘20℃升溫至200℃，維持2分鐘；檢測器溫度300℃；進樣口溫度240℃；載氣為氮氣，流速為每分鐘1.0毫升。頂空進樣，頂空瓶平衡溫度為90℃，平衡時間為30分鐘。理論板數以鄰二甲苯峰計算應不低於40000，各待測峰之間的分離度應符合規定。
對照品溶液的製備精密稱取正己烷，苯，甲苯，對二甲苯，鄰二甲苯，苯乙烯，1，2-二乙基苯和二乙烯苯對照品適量，加N，N-二甲基乙醯胺製成每1毫升中分別含20微克、4微克、20微克、20微克、20微克、20微克、20微克、20微克的溶液，作為對照品儲備液。精密吸取上述儲備液2毫升，置50毫升量瓶中，加25％N，N-二甲基乙醯胺溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5毫升，置20毫升頂空瓶中，密封瓶口，取得。
供試品溶液的製備取該品約0.1克，精密稱定，置20毫升頂空瓶中，精密加入25％N，N-二甲基乙醯胺溶液5毫升，密封瓶口，搖勻，取得。
測定法分別精密量取頂空氣體1毫升，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，取得。
結果，苯、正己烷、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1，2-二乙基苯和二乙烯苯均未檢出。
實施例2
取三七主根破碎成1.5～2.5厘米的顆粒，用2倍量80％乙醇浸泡10小時後，回流提取2次，每次2小時。合併2次回流液，回收乙醇至無醇味，加水稀釋成0.20克生藥/毫升，沉澱16小時，過濾，濾液以流速為1.2BV/小時的流速經DM130大孔樹脂吸附，然後用樹脂體積2倍量的純化水過柱解吸，棄去水液，用樹脂體積2倍量的80％的乙醇浸泡樹脂40分鐘後，以樹脂體積3倍量的80％的乙醇以1.0BV/小時的流速洗脫，收集洗脫液。再將洗脫液以流速為6.0BV/小時的流速過D900樹脂脫色，加入樹脂2倍量80％的乙醇以相同流速沖洗樹脂柱，合併初流液和洗脫液加入生藥重量4％的藥用炭於40℃保溫脫色40分鐘，過濾除炭，回收乙醇，加入10倍量水飽和的正丁醇萃取，再用丙酮析晶，在70℃以內減壓乾燥，粉碎包裝得三七提取物。
經檢測，該實施例的三七提取物的成分為：
三七皂苷R16.05％，人參皂苷Rg132.14％，人參皂苷Re2.82％，人參皂苷Rb132.49％，人參皂苷Rd6.48％，人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3的和為2.06％，且三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd占總重量的79.98％。
實施例3
取三七根莖破碎成2-2.5厘米的顆粒，用1.5倍量70％乙醇浸泡11小時後，回流提取4次，每次1.5小時。合併4次回流液，回收乙醇至無醇味，加水稀釋成0.3克生藥/毫升，沉澱16小時，過濾，濾液以流速為1.3BV/小時的流速經DM130大孔樹脂吸附，然後用樹脂體積3倍量的純化水過柱解吸，棄去水液，用樹脂體積3倍量的75％的乙醇浸泡樹脂20分鐘後，以樹脂體積5倍量的75％的乙醇以1.0BV/小時的流速洗脫，收集洗脫液。再將洗脫液以流速為6.0BV/小時的流速過D900樹脂脫色，加入樹脂3倍量80％的乙醇以相同流速沖洗樹脂柱，合併初流液和洗脫液加入生藥重量6％的藥用炭於40℃保溫脫色40分鐘，過濾除炭，回收乙醇，加入8倍量水飽和的正丁醇萃取，再用丙酮析晶，在70℃以內減壓乾燥，粉碎包裝得三七提取物。
經檢測，該實施例的三七提取物的成分為：
三七皂苷R18.78％，人參皂苷Rg135.48％，人參皂苷Re4.56％，人參皂苷Rb136.05％，人參皂苷Rd8.46％，人參皂苷Rf、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2和人參皂苷Rg3的和為2.06％，且三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd占總重量的93.33％。
實施例4
取實施例1獲得的三七提取物200克，用注射用水適量溶解，加0.5％針用活性炭脫色，濾過，加注射用水至2000毫升，調pH至7.0，濾過，冷凍乾燥，即得凍乾粉針劑。
實施例5
取實施例1獲得的三七提取物100克，用注射用水適量溶解，加0.5％針用活性炭脫色，濾過，加注射用水至2000毫升，調pH至6.5，濾過，灌裝，滅菌即得小容量注射劑。
實施例6
取實施例2獲得的三七提取物4克，用0.9％氯化鈉注射液溶解，加0.5％針用活性炭脫色，濾過，加氯化鈉注射液至1000毫升，調pH6.5，濾過，灌裝，滅菌即得大容量注射劑。
實施例7
取實施例2獲得的三七提取物4克，用5％葡萄糖注射液適量溶解，加0.5％針用活性炭脫色，濾過，加5％葡萄糖注射液至1000毫升，調pH6.5，濾過，灌裝，滅菌即得大容量注射劑。
實施例8
取實施例2獲得的三七提取物，將其進一步粉碎成細粉，過300目篩，加入三七提取物量76％澱粉，混勻，製成顆粒，加入三七提取物量4％滑石粉混和均勻後裝入膠囊，即得膠囊劑。
實施例9
取實施例3獲得的三七提取物，將其進一步粉碎成細粉，加入三七提取物量70％糊精，混勻，製成顆粒，加入三七提取物量1％滑石粉和三七提取物量1％硬脂酸鎂混和均勻後打片，包裝，即得片劑。
實施例10
取實施例3獲得的三七提取物，將其進一步粉碎成細粉，加入三七提取物量2倍蔗糖，混勻，製成顆粒，分裝，包裝，即得顆粒劑。實驗例1藥效試驗數據
選擇冠心病心絞痛患者80例，隨機分為觀察組40例，採用《一種三七提取物及其製劑》的凍乾粉針劑治療；對照組40例，採用市售血塞通凍乾粉針劑治療。4周一療程。結果該發明的凍乾粉針劑（實施例4）和市售血塞通凍乾粉針劑對冠心病心絞痛的總有效率分別為90.00％和86.33％；對改善心電圖的總有效率分別為86.67％和84.50％；兩組用藥一療程後硝酸甘油的減停率分別為72.09％和70.73％；觀察組和對照組對心、肝、腎功能及血液指標均無明顯不良影響。
觀察結果表明，《一種三七提取物及其製劑》的凍乾粉針劑在治療冠心病心絞痛方面優於市售血塞通凍乾粉針劑。
榮譽表彰
2016年12月7日，《一種三七提取物及其製劑》獲得第十八屆中國專利優秀獎。
