《p73和Sestrins在MEHP致ROS介導細胞凋亡中的調控機制》是依託華中科技大學，由袁晶擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：p73和Sestrins在MEHP致ROS介導細胞凋亡中的調控機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：袁晶
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）是塑膠產品中使用最多的一種增塑劑。它廣泛存在於環境且難降解，是國內外優先控制的環境污染物。研究發現：DEHP是一種潛在的非遺傳毒性的致癌物，DEHP的肝臟致瘤機制並非僅依賴過氧化物酶體增殖物激活受體路徑，可能與氧化應激反應引發的其他信號通路調控的細胞凋亡機制有關。本項目擬在人肝腫瘤細胞（HepG2）、人胚肝細胞（L-02）和p53缺失肝癌細胞（Hep3B）中，重點研究Sestrins/p73參與的ROS介導的細胞凋亡信號調控通路中重要下游基因Bax、Bad、p21等的作用，揭示MEHP促發ROS介導的肝細胞凋亡的機制；通過阻斷PI3K/Akt通路技術與RNA干擾技術在沉默p53的L0-2細胞研究中初步揭示MEHP促發ROS介導的細胞凋亡分子事件中p73和Sestrins的作用機制，為評價DEHP暴露人群健康效應的表型標誌物研究提供科學依據。
結題摘要
1. 研究背景：鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP) 是國內外優先控制的環境污染物。但是有關DEHP和鄰苯二甲酸單(2-乙基己基)酯(mono-2-ethylhexyl phthalate，MEHP)對人肝細胞毒性的分子機制研究十分有限。 2. 研究內容：DEHP(62.5μM、12.5μM、25.0μM、50.0μM和100.0μM)和MEHP(6.25μM、12.50μM、25.00μM、50.00μM和100.00μM)分別處理L-02、HepG2和Hep3B細胞24h和36h。用阻斷PI3K/Akt通路技術研究PI3K-AKT-mTOR通路在DEHP致人肝細胞異常增殖中的調控機制。用RNA干擾技術(沉默p53)研究Fas/FasL參與p53非依賴性信號通路調控MEHP致L02細胞和HepG2細胞的凋亡機制。 3. 重要結果：①DEHP誘導人肝細胞(L-02、HepG2和Hep3B細胞)氧化性DNA損傷。p53、p73、sestrin1、sestrins2、和sestrins3 參與人肝細胞(L02細胞、HepG2細胞和Hep3B細胞)的增殖調控。②PI3K-AKT-mTOR細胞信號通路相關基因和蛋白(pi3k、akt、mtor和p70s6k)參與DEHP致Hep3B細胞增殖的調控。50μM LY294002明顯抑制Hep3B細胞的異常增殖。③一定劑量MEHP可致人肝細胞(L-02、HepG2和Hep3B細胞)氧化應激、氧化性DNA損傷和凋亡。在L02細胞和HepG2細胞， MEHP上調pxr的轉錄水平，CYP3A4蛋白的表達及其酶活性，並活化線粒體信號通路。④MEHP處理細胞36h, p53-線粒體通路介導L02細胞和HepG2細胞的凋亡。RNA干擾p53基因後，Fas和FasL參與p53非依賴性信號通路調控MEHP致L02-p53和HepG2-p53細胞的凋亡。 4. 研究意義： DEHP和MEHP對三種人肝細胞毒作用不盡相同。p53缺失和PI3K-AKT-mTOR信號通路激活與DEHP致Hep3B細胞的異常增殖有關；p53-線粒體通路和Fas/FasL參與的p53-非依賴信號通路調控MEHP致L02細胞和HepG2細胞凋亡的調控。本研究結果為DEHP暴露人群健康效應的表型標誌物研究提供依據
