p32在調控PKCzeta活性和乳腺癌細胞趨化運動的作用機制研究

《p32在調控PKCzeta活性和乳腺癌細胞趨化運動的作用機制研究》是依託天津醫科大學，由張飛擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：p32在調控PKCzeta活性和乳腺癌細胞趨化運動的作用機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：張飛
• 依託單位：天津醫科大學

中文摘要

轉移是導致乳腺癌患者死亡的主要原因，趨化運動在腫瘤轉移中起著重要作用，PKCzeta是乳腺癌細胞趨化運動信號途徑中的關鍵分子。目前關於趨化運動過程中調控PKCzeta活性的詳細機制並不清楚，申請人在乳腺癌細胞中發現p32是PKCzeta的一個結合蛋白質，採用小RNA干擾技術降低乳腺癌細胞中p32的表達後可以明顯抑制EGF誘導的趨化運動，同時p32表達下調導致乳腺癌細胞對EGF誘導的F-actin聚合能力也明顯降低，初步證實p32參與了EGF誘導的乳腺癌細胞趨化運動。本研究擬在前期研究基礎上進一步闡明p32與PKCzeta?的結合位點，明確p32在調節PKCzeta活性、乳腺癌細胞遷移能力、對細胞外基質的粘附能力和細胞骨架重構中的詳細作用；同時在免疫缺陷小鼠乳腺癌轉移模型中驗證p32表達下調對乳腺癌細胞轉移能力的影響。該研究對於進一步揭示腫瘤細胞趨化運動和轉移發生的分子機制具有重要意義。

結題摘要

p32又名C1QBP、HABP1或gC1qR。大量研究發現p32在多種腫瘤組織中高表達，而且與患者預後不良明顯相關，但是分子機制不明。前期研究發現p32是介導癌細胞趨化運動的關鍵分子PKCzeta的一個結合蛋白質，本次研究中我們探討了二者相互作用在調節乳腺癌細胞趨化運動中的作用機制，獲得了如下研究成果：採用western blotting的方法發現p32在高轉移的乳腺癌細胞系MDA-MB-231和BT549中高表達，而在低轉移的T47D、Bcap37和永生化的乳腺上皮細胞HBL100中低表達，隨後免疫組化的結果顯示p32在浸潤性導管癌組織中的表達明顯高於乳腺增生組織，而且其高表達與腫瘤的TNM分期和患者發生遠處轉移密切相關，說明p32可能是腫瘤轉移或患者預後不良的一個指標。採用RNAi技術降低p32的表達可以明顯抑制EGF誘導的趨化運動和劃痕誘導的細胞遷移能力；p32表達下降還抑制EGF誘導的F-actin聚合能力、粘附能力和cofilin的磷酸化水平；同時p32表達下調還抑制細胞極化和GSK3beta的磷酸化；證實p32是EGF誘導的乳腺癌細胞趨化運動中關鍵分子。免疫螢光染色發現EGF可以誘導p32和PKCzeta由胞質向胞膜發生轉位，而且兩者之間存在共定位；反向免疫沉澱實驗證實PKCzeta的調節結構域與p32的74-174aa結構域存在相互作用。降低p32的表達抑制了EGF誘導的PKCzeta的磷酸化和向細胞膜轉位，但是降低PKCzeta的表達並不影響EGF誘導p32的膜轉位，提示p32位於PKCzeta的上游。採用氧化磷酸化的抑制劑Rotenone並不抑制EGF誘導的細胞遷移和趨化運動以及PKCzeta的激活，說明p32調節PKCzeta激活以及細胞遷移和趨化運動並不依賴於其調節細胞氧化磷酸化的功能。最後對免疫缺陷小鼠乳腺癌轉移模型的研究發現p32表達下調明顯抑制了乳腺癌細胞肺轉移的發生。此外，我們繼續採用免疫共沉澱結合質譜的方法發現了NPM1也是PKCzeta的結合蛋白，而且NPM1在結腸癌細胞和組織中高表達，並與癌細胞的侵襲能力增強明顯相關；目前關於NPM1與PKCzeta的相互作用模式以及在癌細胞轉移中的作用正在深入研究中。綜上所述，經過三年多的研究，我們證實了p32介導了PKCzeta的激活並在乳腺癌細胞遷移、趨化運動和轉移過程中起非常重作用。