p12CDK2-AP1與新發現的結合蛋白Nbp相互作用的相關研究。

《p12CDK2-AP1與新發現的結合蛋白Nbp相互作用的相關研究。》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由孫沫逸擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：p12CDK2-AP1與新發現的結合蛋白Nbp相互作用的相關研究。
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：孫沫逸
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

本項目以所完成國科金項目P12蛋白在口腔癌中缺失的機理研究的結果為基礎，以p12CDK2-AP1蛋白及新發現的結合蛋白Nbp為研究對象，利用生物信息學技術明確Nbp的基本結構特徵。利用蛋白質表達與純化技術、免疫動物製備多克隆抗體、免疫組化技術研究Nbp的表達特點。套用免疫共沉澱、GST pull-down技術等技術，研究p12CDK2-AP1與Nbp的相互作用位點。利用雙分子螢光互補技術、腫瘤細胞生物學技術研究p12CDK2-AP1與Nbp的相互作用和調控關係，以及結合後結合蛋白的功能。利用生物信息學等技術尋找更多的p12CDK2-AP1的新的作用蛋白。總之，本項目研究的目的在於揭示p12CDK2-AP1與結合蛋白之間相互作用的規律，為研究p12CDK2-AP1在頭頸部腫瘤發生髮展中的作用如癌變、侵襲、轉移的機理奠定基礎，為頭頸部及頜面部腫瘤的預防、診斷和臨床治療提供研究思路。

結題摘要

1、本項目利用免疫共沉澱技術、GST pull-down技術以及雙分子螢光互補技術進一步證明了Nbp (UPP)與p12CDK2AP1蛋白之間的相互作用關係。 （1）P12CDK2-AP1蛋白原核體外表達、純化及GST pull-down技術證明p12CDK2AP1與Nbp (UPP)蛋白之間的相互作用關係。 （2）在真核細胞內利用免疫共沉澱技術（Co-IP ）證明p12CDK2-AP1和Nbp (UPP)蛋白之間的相互作用關係。 （3）在活細胞內利用雙分子螢光互補技術進一步證明p12CDK2AP1和Nbp (UPP)蛋白之間的相互作用關係。 2、本項目進一步研究了Nbp (UPP)蛋白對腫瘤細胞生物學行為的影響。 （1）利用生物信息學方法明確Nbp（UPP）蛋白的基本性質。 （2）通過p12CDK2-AP1沉默與過表達，研究p12CDK2-AP1與UPP基因的表達情況。 （3）UPP基因的甲基化水平檢測，證實UPP基因的生物學功能與CDK2-AP1基因相關聯。 （4）UPP基因對腫瘤細胞生物學行為的影響。 （5）Nbp（UPP）蛋白外源表達對腫瘤細胞生物學行為的影響。 3、本項目進一步尋找與p12CDK2-AP1蛋白存在相互作用的其他蛋白。 （1）利用計算機相關函式模板的蛋白質-蛋白質相互作用，推測抑癌蛋白CD82和RPL13可能與p12CDK2AP1蛋白之間存在相互作用。 （2） 利用IP方法證明抑癌蛋白CD82和RPL13與p12CDK2AP1蛋白之間相互作用的存在。 （3）利用串聯質譜技術篩選與p12CDK2AP1蛋白相結合的其他蛋白。 本項目的研究有助於揭示p12CDK2AP1抑癌因子在細胞癌變過程中的作用及其作用水平和發生機制，為探究引起細胞癌變的生物大分子網路的構成奠定了蛋白分子基礎，為進一步闡明p12CDK2AP1抑癌因子在口腔鱗癌發生髮展中的分子生物學機理奠定實驗基礎，這對口腔癌的預防、診斷、治療及監控都具有重要的意義。 本課題組已發表SCI 6篇，待發表SCI 2篇，中文核心期刊1篇，待發中文期刊1篇，會議論文5篇。