《microRNA-10a在平滑肌細胞表型轉換中的作用機制研究》是依託杭州師範大學，由黃華榮擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA-10a在平滑肌細胞表型轉換中的作用機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：黃華榮
- 依託單位：杭州師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
平滑肌細胞（SMC）異常增生及表型轉換是心血管疾病的重要致病機理，microRNA介導的轉錄後調控網路在SMC表型轉換中發揮著重要作用。通過自創的SMC體外分化系統我們首次發現miR-10a參與SMC分化過程，前期數據顯示miR-10a能夠顯著抑制血管損傷過程中新生內膜的形成。為了闡明miR-10a參與體內SMC表型轉換及抑制血管新生內膜形成的調控機制,本申請擬利用SMMHC-miR-10a轉基因小鼠為材料，通過先進的SILAC蛋白質組學技術篩選並鑑定miR-10a靶基因。經定點突變、雙螢光素酶報告系統分析、體外過表達等分子細胞生物學方法驗證miR-10a與靶基因的相互作用關係，結合體外胚胎幹細胞分化模型及體內金屬絲股動脈損傷模型揭示miR-10a及其靶基因在SMC表型轉換中的作用，為microRNA在心血管疾病的臨床套用提供重要依據和藥物開發的靶點。
結題摘要
血管平滑肌細胞(VSMC)的去分化及表型轉換是心血管疾病的重要致病機理。microRNA介導的轉錄後調控網路在SMC的發育、分化及表型轉換中發揮著重要作用。我們以前的研究報導miR-10a參與SMC的分化並能顯著抑制血管損傷過程中新生內膜的形成。本項目的關鍵目標就是揭示miR-10a在這一生物學過程中的分子機制。通過穩定同位素標記（SILAC）蛋白質組學技術，我們發現在過表達miR-10a小鼠血管組織中有253種蛋白質表達與WT組織存在顯著差異，其中有152種蛋白表達下調，101種蛋白表達上升。對這些差異表達基因進行生物信息學分析後，顯示它們大多參與SMC分化、繁殖和遷移等生物過程。p53在過表達mir-10a轉基因小鼠血管組織中表達上調，表明p53並非miR-10a的靶基因，是其間接調控的結果。有趣的是，在體外ESC-SMC 分化誘導過程中，我們也發現了p53 促進SMC分化的關鍵證據。進一步通過Chip、EMSA 和點突變等分子生物學實驗鑑定出了p53 參與SMC 表型變換的下游靶基因Myocardin。最後我們採用ESC-SMC 分化的細胞模型及SMMHC-p53過表達小鼠動物模型，結合血管損傷動物實驗，我們發現這樣一個調控途徑：RA能夠促進miR-10a的表達，後者通過間接調控的方式增強p53基因的表達，p53作為轉錄因子直接與SMC的關鍵基因Myocardin的啟動子結合促進其轉錄，從而促進平滑肌細胞的發育及體外分化。同時增強Myocardin的表達也能夠抑制體內SMC的表型轉換及病變血管新生內膜的形成。本項目結果可為miR-10a和p53的基因治療及相關抗腫瘤藥物在心血管疾病的臨床套用提供重要參考。
