《microRNA對NFATc1/RANKL骨免疫信號通路的調控機制研究》是依託四川大學，由孟姝擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA對NFATc1/RANKL骨免疫信號通路的調控機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：孟姝
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
活化T淋巴細胞分泌RANKL促進破骨細胞分化；miRNA參與調控破骨細胞分化。本課題旨在研究以RANKL和NFATc1為靶向的miRNA，以及活化T淋巴細胞中NFATc1對RANKL表達的調控作用。首先通過生物信息學分析預測可能與NFATc1/RANKL結合的miRNA，選取與miRNA微陣列分析結果一致的作為候選miRNA進行研究；採用螢光素酶報告基因技術，構建含有Luciferase報告基因和 NFATc1或RANKL 3'UTR序列的載體，驗證候選miRNA是否與目的基因有效結合；構建pri-miRNA慢病毒載體轉染細胞，檢測miRNA的調控作用及下游效應。採用染色質免疫共沉澱技術和基因功能學實驗，分析活化T淋巴細胞中NFATc1對RANKL表達的調控作用。本研究將揭示miRNA對NFATc1/RANKL信號通路的調控作用，闡明炎症性骨吸收的分子機制，為牙周炎的靶向治療提供新的思路。
結題摘要
研究背景 microRNA可通過靶向結合到 mRNA引起蛋白翻譯抑制或目的mRNA 的降解，從而調控基因表達。破骨細胞是唯一具有骨吸收功能的細胞，其分化與功能受多種炎症因子及轉錄因子的調控，其中活化T細胞核因子-1（NFATc1）在破骨細胞分化過程中發揮核心調控作用。本研究擬探討 microRNA調控 NFATc1/RANKL 表達的機制，以及 NFATc1/RANKL 信號通路在炎症性骨吸收中的作用。 研究內容 1. microRNA 對 T 淋巴細胞 RANKL 表達的調控機制研究 2. microRNA 對巨噬細胞向破骨細胞分化過程中 NFATc1 表達的調控 研究結果 1. 生物信息學分析預測可能與RANKL基因tnfsf11表達相關的microRNA，獲得結果為mmu-miR-144-3p；採用免疫磁珠分選法得到純化的小鼠CD4+T淋巴細胞，建立炎症刺激模型，發現CD4+T淋巴細胞的RANKL表達量下降，同時mmu-miR-144-3p的表達增加。RANKL與mmu-miR-144-3p表達變化的負相關關係提示mmu-miR-144-3p可能對RANKL表達具有抑制作用。 2. 生物信息學分析預測可能與 NFATc1結合的 microRNA，選擇mmu-143-3p作為驗證目標。採用RAW264.7細胞建立破骨細胞分化模型，real-time PCR結果發現在不同時間點nfatc1和mmu-miR-143-3p基因表達均表現出相關趨勢，利用雙螢光（Rluc/Fluc）素酶報告基因技術驗證，發現mmu-miR-143-3p不能與 nfatc1-3’UTR 預測的靶位點結合，可能存在其他潛在結合位點。 科學意義microRNA 在破骨細胞分化的多個環節發揮調控作用，本研究發現了兩種可能參與破骨細胞分化過程基因調控的microRNA。由於免疫反應和骨代謝反應共同具有非常複雜的網路調控機制，我們初步發現的microRNA與基因調控的相關性可能為進一步揭示其具體的作用機制奠定了基礎。在未來的研究中我們將一方面繼續驗證mmu-miR-143-3p和mmu-miR-144-3p在骨免疫RANKL/RANK/OPG調節軸中的作用機制，另一方面進一步篩選和驗證可能參與調控淋巴細胞RANKL表達和破骨細胞NFATc1表達的microRNAs。
