《miRNA-21調控靶基因ROCK-1抑制腸上皮細胞損傷的分子機制研究》是依託上海交通大學，由劉志華擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miRNA-21調控靶基因ROCK-1抑制腸上皮細胞損傷的分子機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉志華
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
課題組最新研究發現腸屏障損傷後上皮細胞microRNA（miRNA-21）表達顯著下降。本研究將以此為基礎，擬從細胞、實驗動物及人體標本三個水平探討miRNA-21對腸屏障的保護作用及機制。通過基因打靶建立腸道條件性敲除（mmu-mir21-IKO）小鼠模型，明確腸屏障受損情況，Argonaute蛋白相關的高通量測序-交聯免疫沉澱（HITS-CLIP-AGO）技術檢測其靶基因的結合位點；螢光素酶檢測法驗證miRNA-21與其靶基因ROCK-1的相互作用，並構建抑制和過表達的miRNA-21慢病毒載體轉染NCM460細胞驗證miRNA-21及ROCK-1對腸屏障的保護作用；臨床血清和組織標本檢測進一步闡明miRNA-21及ROCK-1與腸屏障損傷的關係。本課題可望為臨床腸屏障功能障礙提供早期診斷依據，而miRNA-21的類似物則有望用於腸屏障功能障礙的防治，可為難治性腸衰竭的治療提供新思路。
結題摘要
近年來在心臟和神經系統中microRNAs有關的研究很多，但在胃腸疾病中的研究較少，前期實驗發現細胞miR-21的表達量在腸屏障受損後會顯著下降。本研究將從細胞、基因特異性敲除小鼠及臨床標本三個水平探討miR-21 對腸屏障的作用及機制。成功構建腸道條件性敲除（mmu-mir21-IKO）小鼠模型研究miR-21對腸屏障的影響，構建miR-21轉染的NCM460細胞系,通過螢光素酶和western blot驗證ROCK-1為miR-21的靶基因，miR-21與ROCK-1的3`UTR特異性結合下調ROCK-1的表達，進而上調緊密連線蛋白表達。收集臨床標本檢測相關指標表達量，檢測occludin、Zo-1、IL-6、TNF-α以及降鈣素原表達量，顯示急性糞石梗阻患者血清miR-21比正常人低，緊密連線蛋白表達下調，進一步驗證了miR-21對於腸屏障的作用。通過研究可以從轉錄後調控水平了解腸屏障功能障礙的發生機制，提高早期診斷率，為臨床上治療腸屏障功能障礙提供新思路，為構建腸屏障早期診斷模型提供一定依據。
