miRNA激活p21基因表達機制及在膀胱腫瘤靶向治療作用研究

《miRNA激活p21基因表達機制及在膀胱腫瘤靶向治療作用研究》是依託華中科技大學，由陳忠擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：miRNA激活p21基因表達機制及在膀胱腫瘤靶向治療作用研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：陳忠
• 依託單位：華中科技大學

中文摘要

小分子非編碼RNA（ncRNA）不僅具有抑制基因表達的功能，而且還可以序列特異性地激活沉默或低表達基因，後者在基因功能研究及基因靶向治療方面具有誘人的潛力。我們針對ncRNA激活機制進行了多年研究，發現外源性引入小雙鏈非編碼RNA分子能顯著激活基因的表達，並發現某些內源性的微小單鏈RNA分子（miRNA）也具有激活相應基因表達功能。本研究以人膀胱腫瘤細胞株T24和J82及裸鼠異位膀胱腫瘤模型為研究對象，篩選針對p21基因啟動子區域DNA序列的具有激活p21基因表達功效的miRNA分子，構建miRNA表達載體，檢測miRNA分子對p21基因表達的激活效應及機制，以及基因激活後的生物學效應。通過本研究，有望對現有RNA激活機制的進行合理的補充和完善，並建立起一套簡單有效的篩選和鑑定具有激活功效的小分子ncRNA的方法，為利用RNA激活機制靶向治療腫瘤性疾病進行可行性研究。

結題摘要

本研究以人膀胱腫瘤細胞株及裸鼠異位膀胱腫瘤模型為研究對象，採用miRanda 軟體檢索p21 基因啟動子DNA 序列，篩選與該段DNA 序列對應的miRNA 分子miR-370-5p （miR-370）, miR-1180-5p (miR-1180)和miR-1236-3p (miR-1236)，分別轉染至T24和EJ細胞，經Real-time PCR和Western blot檢測三者均能激活p21 表達，採用染色質免疫共沉澱（ChIP）試驗，結果表明3種miRNAs均可與p21基因啟動子序列相結合從而激活p21表達。通過系列體外細胞學研究、腫瘤侵襲性實驗及裸鼠異位腫瘤模型研究等多種手段，發現具有激活p21基因表達的miRNA分子能顯著抑制體外培養的膀胱腫瘤細胞株及裸鼠體內種植的膀胱腫瘤細胞生長。設計篩選與活性miRNA分子對應的小雙鏈RNA分子（dsRNA），發現部分對應的dsRNA也具有激活p21基因表達，並表現出相應生物學效應。本研究還探索了miRNA在腎癌、肺癌等幾種不同組織來源人體腫瘤細胞中激活p21表達效應，發現其能激活部分，但不是所有體外培養的腫瘤細胞株的p21基因表達。同時，本研究還通過基因晶片分析了miRNA網路化基因調控機制，並對miRNA調控的下游基因功能進行了一定的探索。 本研究結果對現有RNA激活機制的進行合理的補充和完善，並建立起一套簡單有效的篩選和鑑定具有激活功效的小分子非編碼RNA的方法，為利用RNA激活機制靶向治療腫瘤性疾病提供了一定的理論和實驗依據。