miRNA檢測

miRNA檢測是一種檢測生物體內miRNA表達情況的技術，包括Northern雜交、微陣點分析、實時定量PCR等。檢測miRNA的表達豐度，對疾病的診斷和治療具有一定的意義。

基本介紹

• 中文名：miRNA檢測
• 檢測方法：Northern雜交、微陣點分析等

常見檢測方法

1．Northern雜交
該方法通過將RNA變性及電泳分離後，將其轉移到固相支持物上，從而用於雜交反應，Northern雜交不僅能夠靈敏檢測出RNA的豐度，還能結合RNA marker來檢測RNA的分子大小，這對於排除其他小分子RNA的污染有重要意義。Northern雜交也可用作miRNA的定量分析，只需將已知濃度梯度的寡核苷酸對照物與待測樣品進行平行雜交即可。該方法的缺點是耗時、耗量，一次檢測需要3個工作日，需要5到10微克的總RNA量才能成功檢測出miRNA。
2．微陣點分析
採用高密度的螢光標記探針與RNA樣本雜交，通過螢光掃描獲得表達圖譜，藉助相應軟體進行miRNA的表達分析。由於在設計探針時可以包含所有可用miRNA序列，因此微點陣可以作高通量的miRNA分析。不足之處在於需要足夠的RNA初始樣本，大約為每個微點陣5微克。
3．實時定量PCR
該方法主要是在PCR反應體系中加入螢光基團，利用螢光信號積累實時監測整個PCR進程，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析。既可檢測miRNA前體，又可檢測成熟miRNA的表達。與雜交方法相比，實時定量PCR可以高度靈敏地檢測出低豐度表達的靶分子，也常用於miRNA表達譜結果的鑑定。目前已有新的實時定量PCR的方法，利用莖環狀引物進行miRNA的反轉錄，然後再進行實時定量PCR。
以上三種檢測方法中，Northern雜交法是驗證和確認miRNA的重要方法，但比較繁瑣且靈敏度低，不適於臨床樣本的高通量檢測；實時定量PCR法是最方便使用且有效的檢測方法。

臨床套用

由於miRNA具有高度特異性、高度保守性，可以提高疾病診斷的準確性和精確度。另外，根據miRNA時序性的變化特點，可以針對患者血漿、血清、尿、唾液中的miRNA表達的變化確定患者疾病的進展情況，並制定相應的個體化治療方案。此外，miRNA檢測對新型生物醫藥製劑的研發也具有重要意義。